一种在哺乳动物细胞中研究蛋白分子转录激活活性系统的建立

为了在哺乳动物细胞中建立一套用于研究蛋白分子转录激活活性的系统,首先以质粒pTe-Off和真核表达载体pCDNA3.1B(-)/myc-his为基础,分别构建重组质粒pZHO1(用于插入待测基因并作为该系统的阴性对照）,pZHO2（用于作阳性对照）,此外,该系统还包括质粒pTRE-luc(编码Firefly荧光素酶报道基因）和质粒pRL-TK(编码Renilla荧光素酶基因,用作内参对照）,为验证该系统的可行性,分别将质粒pZHO1,pZHO2,pZHO3(编码p53分子N端转灵激活区73个氨基酸片段,作为实验组）与质粒pTRE-luc和pRL-TK共轨染至C4－2,MCF－7,COS7 3种不同的细胞株中,通过检测各转染组细胞中Firefly荧光素酶相对活性的大小来判断该系统的可行性,结果表明,所构建的系统可以在哺乳动物细胞中检测目的分子的转录激活活性。     

小鼠PC-1蛋白兔多克隆抗体的制备及初步应用

目的:获得小鼠PC1蛋白的兔多克隆抗体,检测其在小鼠器官中的表达谱。方法:以纯化后的小鼠PC1蛋白及其N端45个氨基酸与GST的融合蛋白(GSTMPC1、GSTMPC145)为抗原,制备了它们的兔多克隆抗体。进一步应用饱和硫酸铵沉淀法、DEAE52和ProteinA亲和层析法对这两个抗体进行了纯化,Westernblot检测了PC1蛋白在昆明白小鼠七个组织中的表达情况。结果:两个兔多克隆血清的效价分别为1∶20000和1∶200000,并能与人工合成的人PC1蛋白N端的46个氨基酸发生良好的交叉反应。PC1蛋白在结肠中有表达,在肾中有微弱表达,而在心、肺、肝、胃、脾中没有表达。结论:获得小鼠PC1蛋白的兔多克隆抗体,PC1蛋白在结肠中有表达,在肾中有微弱表达,而在心、肺、肝、胃、脾中没有表达 。     

冷藏方式对桃采后果胶含量和β-半乳糖苷酶活性的影响

以采后包装和不包装的'大久保'桃果实为材料,分别测定了其在8℃冷藏(A)、8℃冷藏10 d后转入0℃贮藏(B)和0℃冷藏(C)方式下的硬度、出汁率、果胶含量和β-半乳糖苷酶活性的变化.结果表明:在A、B冷藏方式下,包装较不包装处理显著抑制了果实的硬度下降、原果胶含量减少和可溶性果胶含量增加,降低了果实出汁率和β-gal活性;与冷藏期比较,货架期后冷藏方式A和B果实表现为硬度下降、原果胶含量减少、可溶性果胶含量增加,以及出汁率和β-gal活性升高.与冷藏方式A和B比较,冷藏方式C果实的硬度和原果胶含量较高,出汁率和可溶性果胶含量较低;货架期后,不包装的果实硬度和原果胶含量增加,可溶性果胶含量和β-gal活性降低,但包装处理却能减缓上述现象的发生.研究表明,桃采后用30 μm聚乙烯袋包装、于8℃冷藏10 d后转入0℃贮藏处理,能使桃果实在贮藏期保持较低的可溶性果胶含量和较高的原果胶含量和出汁率,并能使桃在货架期正常后熟软化,是贮藏桃的一种较好方式.     

外源高表达PC-1蛋白N端43个氨基酸可加速人前列腺癌细胞系C4-2的生长

研究PC-1蛋白N端43个氨基酸表达对人前列腺癌细胞C4—2生长的影响。用DNA重组技术将含PC—1蛋白N端43个氨基酸的DNA序列正向克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,采用脂质体法将重组质粒稳定转染进C4—2细胞中,RT—PCR分析外源序列的转录情况,固相ELISA法测定PC—1蛋白N端43个氨基酸的表达,MTT实验分析细胞的生长速度。结果获得了稳定转染PC—J基因N端43个氨基酸的前列腺癌细胞株,在该细胞株中外源PC—1蛋白N端43个氨基酸得到高表达,细胞生长速度较对照细胞加快了38％。结果表明外源PC—I基因N端43个氨基酸高表达可提高人前列腺癌细胞C4—2的生长速度,推论PC—J基因高表达可能在人前列腺癌的发展中起一定的促进作用。     

小鼠PC-1基因在大肠杆菌中的表达和纯化

利用PCR和基因重组技术构建了小嫌PC－1基因全长cDNA及其N端45个氨基酸残基的表达质粒pGEX-4T-1-mPC-1和pGEX-4T-1-mPC-1-45。经IPTG诱导后,在大肠杆菌DH5α中,GST－mPC-1和GST－mPC-1-45两个融合蛋白都获得了可溶性高表达。经谷胱甘肽Sepharose-4B亲和柱层析纯化后,获得了纯的GST－mPC-1和GST－mPC-1-45蛋白。