Epstein—Barr病毒膜抗原基因免疫的研究

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因,插入含有ＣＭＶ启动子的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３下游ＢａｍＨＩ位点,构建成真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＭＡ。将纯化的ＤＮＡ注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗ＥＢ病毒ＭＡ特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）,特异性Ｔ淋巴细胞增生性反应及细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤作用。基因免疫与基因－蛋白     

Epstein-Barr病毒膜抗原基因免疫的研究

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因,插入含有ＣＭＶ启动子的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３下游ＢａｍＨＩ位点,构建成真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＭＡ。将纯化的ＤＮＡ注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗ＥＢ病毒ＭＡ特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）,特异性Ｔ淋巴细胞增生性反应及细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤作用。基因免疫与基因－蛋白联合免疫效果相似。不同启动子控制下的ＭＡ基因,诱发小鼠免疫应答无明显差异。     

双功能抗体介导的胃癌杀伤效应

将诱变的αＣＤ３杂交瘤（ＴＫ~－）与ＰＤ４杂交瘤（ＨＧＰＲＴ~－）融合,获得分泌双功能抗体（ＢｓＡｂ）的四体杂交瘤Ｃ３．ＢｓＡｂＣ３可分别与ＣＤ３分子及胃癌相关抗原Ｐ４０反应．体外杀伤试验证实,当效靶比为４０：１,ＢｓＡｂＣ３浓度为１ｍｇ／Ｌ时,其杀伤效应可达７７．６％．该杀伤效应具有明显的特异性,仅Ｐ４０阳性表达的靶细胞可被溶解,体内杀伤试验证实,裸鼠接种胃癌细胞后５ｄ,以ＢｓＡｂＣ３活化的外周血淋巴细胞（ＰＢＬｓ）经局部皮下注射处理,可使移植胃癌完全消退（５／５）．这一明显的治疗作用可能与局部注射途径有关,可供临床应用参考．     

抗人CD3改形单链抗体的构建、表达及活性测定

ＣＤ３单抗通过多种途径有效地同体的免疫状态,在临床应用中具有极大的潜力。为克服鼠源单抗用于临床的局限性,拟采用抗体工程技术研制抗人ＣＤ３改形单链抗体。首先,将鼠源ＣＤ３单抗ＯＫＴ３轻重链ＣＤＲｓ分别移植到人源抗体ＬＳ１轻链和Ｎｄ重链的框架中,经计算机模拟其空间构象,进行残基替换,确定ＣＤ３改形ＶＬ、ＶＨ氨基酸序列,化学合成改形ＶＬ、ＶＨ基因,将其分别插入至载体ｐＲＯＨ８０中,构建成抗人ＣＤ３改形单     

抗丙肝病毒核心抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

用基因工程重组技术获得的丙肝病毒（ＨＣＶ）核心蛋白抗原与鼠血清白蛋白交联后免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术成功地建立了４株稳定分泌抗核心抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞,试验结果表明,该４株ＭｃＡｂｓ与免疫抗原及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶ ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５无反应,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。４株ＭｃＡｂｓ中３株为ＩｇＧ２     

恶性疟原虫子孢子CS抗原融合基因的表达及其生物活性

采用遗传工程技术了获得了含有恶性疟原虫子孢子ＣＳ抗原融合基因的重组质粒ｐＭＣ０５５－ＣＳ的工程菌株,能高效分泌ＣＳ抗原的融合蛋白至胞外,可达２５ｍｇ／Ｌ,具有霍乱毒素Ｂ亚单位和子孢子ＣＳ的抗原性;将纯化的融合蛋白免疫Ｃ５７纯系小鼠,免疫后抗ＣＴ－Ｂ抗体滴度可达１：３ ２００－６４００,抗ＣＳ抗体滴度可达１：３２０－６４０,免疫小鼠用纸氏疟孢子腹腔攻击,保护率达３４－４５％。     

骨组织的脱钙及其免疫组织化学技术的探讨

骨组织的免疫组织化学染色 (ＩＨＣＳ)技术不同于普通石蜡切片常用的ＩＨＣＳ技术 ,有许多特殊性。为了提高骨组织ＩＨＣＳ的质量 ,本文根据骨组织及其ＩＨＣＳ技术的特点 ,对影响ＩＨＣＳ质量的几个问题进行了探讨。免疫组织化学染色 (Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇ,ＩＨＣＳ)技术是用已知的标记的特异性抗体或抗原对组织内相应抗原或抗体进行定性、定位或定量检测 ,经组织化学反应 ,使标记于特异性抗体的酶、金属及荧光素等呈现出某种颜色 ,并借助于光镜、荧光显微镜及电子显微镜等观察所显示的颜色和变化 ,从…     

肠毒素源性定居因子CS6在减素伤寒沙门氏菌中表达及免疫原性的研究

将编码肠毒素源性大肠杆菌定居因子抗原ＣＳ６基因克隆到ｐＸＬ６７０,转化ａｓｄ基因突变的Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ６０９７,获得重组质粒ｐＳＳ６４,再将后者转化至减毒的△ａｒｏＡ、△ａｒｏＣ、△ａｓｄ伤寒沙门氏菌,构建了无药物抗性且稳定的大肠杆菌和伤寒双价菌苗候选株。小鼠腹腔免疫和攻击实验表明,该菌株对伤寒沙门氏菌毒株的攻击具有良好的保护作用。家兔免疫实验证明,该菌株能产生抗ＣＳ６和伤寒菌Ｖｉ抗原的血清抗体。     

乙酰胆碱对大鼠体外抗体生成的影响

目的：观察不同浓度乙酰胆碱（ＡＣｈ,１０－１０～１０－５ｍｏｌ／Ｌ）对大鼠体外抗体生成的影响,并初步探讨其作用机制,从细胞水平了解乙酰胆碱与免疫功能之间的关系。方法：用体外抗体生成的检测方法,用绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）刺激大鼠肠系膜淋巴结Ｂ细胞转化成抗体形成细胞（ＡＦＣ）,然后检测其抗体生成量。结果：①１０－１０～１０－７ｍｏｌ／ＬＡＣｈ能显著抑制体外抗体生成,其中１０－８和１０－７ｍｏｌ／ＬＡＣｈ的作用较强,而１０－６和１０－５ｍｏｌ／ＬＡＣｈ无明显的抑制作用;②Ｍ型胆碱能受体激动剂毛果芸香碱（１０－８和１０－７ｍｏｌ／Ｌ）能明显减弱体外抗体生成,而Ｎ型受体激动剂烟碱（１０－８和１０－７ｍｏｌ／Ｌ）没有显著的减弱作用,Ｍ型受体拮抗剂阿托品（１０－７和１０－６ｍｏｌ／Ｌ）可完全阻断ＡＣｈ抑制体外抗体生成的作用;③ＡＣｈ分别在Ｂ细胞用ＳＲＢＣ刺激后３～４８ｈ中的６个不同时间与淋巴细胞作用,其抗体生成仍然是减少的。结论：ＡＣｈ可非浓度依赖性地抑制大鼠的体外抗体生成;此作用可能由Ｂ细胞上的Ｍ型胆碱能受体介导;且ＡＣｈ可能主要影响Ｂ细胞转化的后期过程。     

双歧杆菌,大肠杆菌菌体多糖iIFL激活作用的对比研究

采用ＰｅｒｃｏⅡ非连续密度梯度离心法从小鼠小肠提取小肠上皮间细胞（ｉｎｔｅａｌｉｎａｌ ｉｎｔｒａｅ」ｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ,ｉＩＥＬ）,应用双抗原标记间接免疫荧光法对其抗原表型进行测定,同时,应用有机溶剂提取的双歧杆菌、大肠杆菌菌体多糖与ｉＩＥＬ细胞共同孵育徨,检测ｉＩＥＬ细胞的自然系伤活性、ＩＦＮγ和ＩＬ－２产生能力。结果表明：ｉＩＥＬ细胞的表型８５．１％ＣＤ３＾＋７３．８Ｃ     

人免疫重建SCID小鼠的研究

４２只不渗漏ＳＣＩＤ小鼠分别腹腔注射经冷冻、复苏的胎肝或胎肝加胎胸腺细胞,每鼠２×１０７活细胞,建立人胎肝细胞ＳＣＩＤ小鼠模型Ⅰ和Ⅱ,研究人免疫系统。用人肝癌细胞（ＨＨＣＣ）免疫,ＳＣＩＤ鼠出现初始免疫答应,血清人ＩｇＧ平均滴度分别达到５１３．０±８４．２ｎｇ／ｍｌ和７１９．７±２０１．６ｎｇ／ｍｌ,ＩｇＧ峰值分别出现在免疫重建后１０～１２和１０～１４周,特异性抗ＨＨＣＣ抗体滴度分别达到１∶７０．４±３５．０５和１∶２９４．４±１６８．５２,免疫重建后７～８周龄,ＡＢＣ法免疫组化染色,免疫鼠模型肝、脾中可检出标记人的ＣＤ３＋、ＣＤ２０＋Ｔ和Ｂ淋巴细胞克隆和细胞岛。流式细胞仪检测了抗原免疫组和模型组外周血、脾脏、肝脏的人ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１９＋、ＣＤ２０＋标记的淋巴细胞数,其中标记ＣＤ２０＋淋巴细胞平均值外周血３．１２±３．０３％、脾脏１．４±０．２０％、肝脏２．３２±１．４９％。而无抗原免疫的模型组在肝脏仅有微量或检测不到人标记淋巴细胞。     

丙型肝炎病毒基因组C区和NS3区基因cDNA的融合及其在大肠杆菌中的表达与初步应用

通过逆转录（ＲＴ）－聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,从中国人丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）携带者的血清中扩增并克隆到２段ｃＤＮＡ片段,即ＨＣＶ基因组Ｃ区抗原基因Ｃ８３１ｃＤＮＡ片断（约５３０ｂｐ）和ＮＳ３区抗原基因Ｃ３３ｃｃＤＮＡ片段（约８６０ｂｐ）。Ｃ３３ｃｃＤＮＡ片段同Ｃ８３１ｃＤＮＡ片段经连接　　　肽Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ连接成为基因嵌合体Ｃ３３ｃ－Ｃ８３１（约１４００ｂｐ）。Ｃ３３ｃ－Ｃ８３１基因嵌合体同温控型原核表达载体ｐＢＶ２２０重组,构建成表达质粒ｐＢＶ／Ｃ３３ｃ－Ｃ８３１,并在大肠杆菌细胞中获得了重组嵌合抗原Ｃ３３ｃ－ＣＬ的表达。通过酶切分析和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹法,对约占菌体可溶性蛋白９％的表达产物做了鉴定。采用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和盐析处理,获得粗提表达产物。粗提的表达产物经尿素裂解和离子交换层析纯化,得到可用于检测抗ＨＣＶ核壳蛋白和抗ＮＳ３区抗体的重组嵌合抗原Ｃ３３ｃ－ＣＬ。对Ｃ３３ｃ－ＣＬ做抗原性分析发现,它同时具有完整的Ｃ３３ｃ抗原和Ｃ２２抗原的免疫反应活性,完全能替代单纯的Ｃ３３ｃ和Ｃ２２抗原。该嵌合抗原在血清学诊断中有重要的应用价值,可望成为新一代ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的优选抗原。     

LTD4对系膜细胞促增殖作用机制的研究

本实验应用ＴｄＲ掺入法测定ＬＴＤ４对大鼠系膜细胞的促增殖作用,测定系膜细胞合成的ＤＡＧ及ＩＰ１、ＩＰ２、ＩＰ３量,用ＰＫＣ抑制剂ＣａｌｐｈｏｓｔｉｎＣ预处理系膜细胞,观察其对ＬＴＤ４促增殖作用的影响。结果表明,ＬＴＤ４促进增殖作用的影响。结果表明,ＬＴＤ４促进系膜细胞的增殖及ＤＡＧ合成,ＩＰ合成。以０．０１μｍｏｌ／Ｌ的ＬＴＤ４作用最强。ＣａｌｐｈｏｓｔｉｎＣ可抑制ＬＴＤ４的促殖作用,证实ＬＴＤ４     

抗癌胚抗原单链抗体基因在家蚕细胞和幼虫中的表达

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫＨｉｓ, 与修饰的家蚕核型多角体病毒ＢｍＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗ＣＥＡＳｃＦｖ 基因的重组病毒ＢｍＢａｃＳｃＦｖ。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为２８ｋＤ, 前者占细胞总蛋白的６ ％ , 后者为０ ．３ ｍｇ／ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ｎｉ２＋ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和柱纯化, 前者纯度可达９０％ 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有ＣＥＡ 结合活力, 其亲和常数分别为５ ．４×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 和２．３ ×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－１ , 略低于其亲本单抗Ｅ７Ｂ１０ ２．７ ×１０９／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 。     

口腔粘膜中朗格罕氏细胞的研究

朗格罕细胞（ｌａｎｇｅｒｈａｎｓｃｅｌ,ＬＣ）是一种骨髓来源的免疫活性细胞,具有呈递抗原,诱导免疫反应的功能。口腔粘膜的复层鳞状上皮中亦有ＬＣ分布,它们是口腔粘膜防御体系的组成部分。本研究运用ＡＴＰ酶组织化学方法和电镜技术,对２５例人的口腔粘膜标本中的ＬＣ的形态、结构及数量分布进行观察,结果提示,在口腔粘膜的上皮中,ＬＣ主要分布于上皮的基底部,并且趋于环绕结缔组织乳头排列,ＬＣ的数量也因部位不同而有显著差异     

纤维素载体的酶免疫测定技术

纤维素载体的酶免疫测定技术黎皓（北京生化免疫制剂中心开发室）程伯鲲（中国预防医科院流研所微生物室）自１９６６年Ｎａｋａｎｅ建立酶标记抗体技术以来,酶免疫测定技术（ＥｎｚｙｍｅＩｍｍｕｎｏａｓ－ｓａｙｓ,ＥＩＡ）在很多领域得到广泛应用,被认为是继放射免疫测定技术（ＲＩＡ）和荧光免疫测定技术（ＩＦＡ）之后的一项重要的免疫测定技术。其原理是通过化学方法将酶与抗体（或抗原）结合起来,酶标记后的抗体（或抗原）仍然保持与相应抗原（或抗体）相结合的免疫学活性以及酶的催化活性, 酶标记抗体与抗原结合后, 形成酶标抗体一抗原复合物。     

微波在免疫组化双重染色的抗体洗脱中的应用

本文介绍一种新技术──微波加强抗体洗脱法。在酸洗脱液中微波辐射（最低能量档）３分钟．完全除去经ＰＡＰ法染色后的垂体前叶切片上的抗体复合物;双重染色显示两种形态和颜色不同的细胞。切片在Ｔｒｉｓ缓冲盐液中微波辐射３分钟,或分别浸入室温和约５０℃的酸洗脱液中２小时和３分钟,抗体复合物不能被洗脱,或洗脱不完全;双重染色时出现假性双标记细胞。结果表明微波具有加强抗体洗脱的作用,是一种快速、有效的除去免疫酶双重染色中抗体复合物的方法。     

三氧化二砷诱导细胞凋亡对线粒体的影响

线粒体作为细胞能量的“动力工厂”,在细胞的生理过程中起着重要的作用,本文采用三氧化二砷（Ａｓ２ Ｏ３） 诱导ＭＧＣ－ ８０３ 细胞凋亡,通过罗丹明１２３ 和Ｈｏｅｃｈｅｓｔ３３２５８ 对细胞进行荧光标记,利用具有光子计数成像能力的超高灵敏度荧光显微镜观察凋亡细胞与未加入Ａｓ２ Ｏ３ 的对照组细胞的区别,发现Ａｓ２ Ｏ３ 在诱导细胞凋亡时可引起线粒体内膜电位差减小     

鸡球虫Etp28基因的克隆及其在杆状病毒系统中的表达

本文克隆了鸡柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌａ）广东株子孢子折光体抗原Ｅｔｐ２８基因,与国外发表的柔嫩艾美耳球虫ＭｅｒｃｋＬＳ１８株比较,仅在第４９２位有一个属于同义突变的碱基变异（Ｃ→Ｔ）。随后在修饰的苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ－ＯＣＣ－）载体系统中得到了高效表达,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹结果表明表达产物为５３ｋＤ的融合蛋白ＧＳＴ－６×Ｈｉｓ－Ｅｔｐ２８,其产物占细胞总蛋白量的２１．３％,在草地夜蛾培养细胞（Ｓｆ９）中的得量为０．４２ｍｇ／Ｌ×１０６个细胞。免疫保护效果实验初步结果表明该重组抗原能够提供一定的抗球虫保护作用。     

天然及氧化修饰脂蛋白对人动脉平滑肌细胞原癌基因表达的影响

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ＡＳ）的形成过程中极其重要。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,Ｈ－ｒａｓ原癌基因及Ｒｂ抗癌基因转录表达的影响。结果表明：（１）ＨＤＬ对ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,ｒａｓ基因表达无影响;（２）ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势;（３）ｏｘ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＶＬＤＬ和ｏｘ－ＨＤＬ具有使ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,和ｒａｓ基因表达显著增强的作用（Ｐ＜０．０１）,且其作用较相应的天然脂蛋白大（Ｐ＜０．０１）;（４）天然和氧化修饰型脂蛋白对Ｒｂ基因表达均无影响。据上述结果推测：ＬＤＬ,ＶＬＤＬ,ｏｘ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＶＬＤＬ和ｏｘ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与刺激ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ和ｒａｓ原癌基因表达增加有关。