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1.
酵母表达体系及其在抗体工程中的应用   总被引:6,自引:0,他引:6  
酵母是最简单的真核生物,以其为宿主表达异源蛋白具有很大的优越性,近十几年来,各种各样的酵母表达体系陆续发展起来,本文介绍了两种酵母表达系统,并对现有的主要表达体系进行了比较,另外,本文还涉及到酵母在表达抗体或其片段方面的成功应用。  相似文献   
2.
亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一.利用巨型引物PCR定点诱变方法,设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物,在第一轮PCR中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的DNA片段,即巨型引物,将其经琼脂糖凝胶电泳分离纯化后,作为3′和5′的两端引物应用于第二轮PCR反应中.通过改变标准PCR反应条件,调整引物与模板的浓度,扩增出特异性较强的目的DNA条带.PCR产物经回收后,进行DNA测序.测序结果表明利用该方法扩增得到特异的抗CD3改型单链抗体的突变体库.  相似文献   
3.
基因工程抗体   总被引:2,自引:0,他引:2  
基因工程抗体是80年代发展起来的研究领域,把基因工程技术与单克隆抗体技术结合起来,创造出自然界不存在的各种抗体,如人-鼠嵌合抗体、改形抗体、单链抗体等,大大地降低或消除鼠源单克隆抗体的免疫原性,从而可以发挥抗体在肿瘤和病毒病治疗中的潜力。在此基础上发展起来的抗体库技术使人们有可能不经免疫获得任何一种抗体,将对医学和生物学的发展起着深远的影响。本文将对这两方面的内容作一简要的介绍。  相似文献   
4.
根据抗体基因可变区两端保守序列FR1和FR4,设计并化学合成轻重链PCR扩增引物。从体外培养细胞UCHT1中提取总RNA,反转录成Cdna,以Cdna为模板经PCR扩增轻,重链可变区基因片段。将扩增片段克隆至Puc19质粒,筛选阳性克隆并测序,序列分析结果为重链366pb,编码122个氨基酸,轻链327bp,编码109个氨基酸  相似文献   
5.
基因工程抗体研究进展   总被引:4,自引:0,他引:4  
  相似文献   
6.
在低浓度(≤1μg/ml)放线菌素D作用下,兔腹腔巨噬细胞RNA合成被抑制的情况与兔肾细胞类似。但随着放线菌素D浓度增高,反而促进巨噬细胞的RNA合成。在浓度为100μg/ml时,可使~3H-尿苷的掺入量比对照增加2—10倍。相反,在此浓度下,兔肾细胞的RNA合成却完全被抑制。蔗糖的存在能使巨噬细胞丧失对放线菌素D这种刺激作用反应的能力,其RNA合成完全被抑制。另一方面,巨噬细胞的KNA聚合酶对利福平的敏感性要比其他非免疫细胞至少高4—5倍。如果用高浓度的(500μg/ml)利福平完全抑制巨噬细胞的转录之后,再  相似文献   
7.
抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达   总被引:4,自引:0,他引:4  
设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因VH和VK,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因VH,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆VH基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-VH改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30%左右.  相似文献   
8.
使用同源建模的方法通过计算机模拟鼠抗体OKT3抗原结合位点的空间结构,在结构分析及人和鼠抗体各自保守序列分析的基础上,设计出抗CD3的改形抗体序列;并进一步模拟改形抗体的结构,理论计算和实验的结果表明改形设计是合理的。  相似文献   
9.
具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒单链抗体酶制备   总被引:1,自引:0,他引:1  
 利用RT PCR从分泌有谷胱甘肽结合部位的单克隆抗体杂交瘤细胞株 2F3中 ,扩增出单抗重链可变区和轻链可变区基因 .经DNA测序后 ,用Linker(Gly4 Ser1) 3 构建成单链抗体 (scFv)表达载体pTMF scFv ,将重组质粒pTMF scFv转化到大肠杆菌BL2 1(DE3) ,实现了单链抗体的高效表达 .表达的单链抗体占菌体总蛋白 2 5%~ 30 % .该重组蛋白以包涵体形式存在 ,分子量为 30kD .经过金属螯合亲和层析纯化、复性和凝胶过滤纯化 ,得到电泳均一的单链抗体 .再经化学诱变 ,得到含硒单链抗体酶 ,其谷胱甘肽过氧化物酶活性为 330 0U μmol.采用荧光滴定法测定了单链抗体对谷胱甘肽的结合常数  相似文献   
10.
噬菌体呈示单链抗体表达载体及小鼠非特异抗体库的构建   总被引:4,自引:0,他引:4  
用大肠杆菌丝状噬菌体表面呈示技术构建抗体库的方法,为从抗原出发获得特异抗体提供了新的途径。报道的是,首先构建了一个用于噬菌体呈示抗体的噬粒表达载体pFUW80,它具有既可以进行外分明表达,又可进行附着表达的特点。然后利用设计的一套扩增小鼠抗体重链和轻链可变区基因片段的PCR引物,从未免疫小鼠脾细胞中扩增出了抗体重、轻链可变区基因,构建了一个1.2×106库容的小鼠非特异性单链抗体库。从这个抗体库中,筛选出了针对人IgG的单链抗体噬菌体,并进行了ELISA检测和部分序列分析。这一初步结果为今后继续利用这一系统进行研究奠定了基础。  相似文献   
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