抗体应答期间大鼠脑和胸腺中儿茶酚胺含量的变化

目的：探讨在抗体应答期间,脑和淋巴器官中儿茶酚胺（ＣＡｓ）含量的动态变化,籍以了解免疫状态对中枢和外周ＣＡｓ神经活动的影响。方法：用绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）免疫大鼠,在免疫后第２￣７ｄ应用高效液相色谱－电化学检测法（ＨＰＬＣ－ＥＣＤ）测定大鼠下丘脑、海马、脑干和胸腺中云甲肾上腺素（ＮＡ）、肾上腺素（Ａ）、多巴胺（ＤＡ）和高香草酸（ＨＶＡ）的含量。结果：①下且脑和海马内ＮＡ在抗体应答期间升高,而胸腺中     

TGF-β1对Aβ1-42诱导海马神经元-小胶质细胞共培养体系中细胞因子表达和分泌的影响

目的：探讨在海马神经元和小胶质细胞共培养体系中转化生长因子-β1（TGF-β1）对β淀粉样肽1-42（Aβ_1-42）诱导的小胶质细胞激活表达和分泌细胞因子的影响。方法：将大鼠海马神经元和小胶质细胞进行共同培养,于共同培养后第5日,加入TGF-β1（5 or 20 ng/ml）,1 h后加入Aβ_1-42（5 μmol/L）,继续培养72 h后用于后续实验,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表达;Real-time PCR和ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和胰岛素样生长因子（IGF-1）的mRNA表达和分泌。结果：在共同培养的海马神经元与小胶质细胞体系中,Aβ_1-42诱导炎症因子iNOS、TNF-α和IL-1β的表达和/或分泌上调,神经营养因子IGF-1表达下调,TGF-β1预处理削弱上述Aβ_1-42的作用。结论：TGF-β1明显抑制Aβ_1-42诱导的小胶质细胞激活引起的炎性细胞因子的增加和神经营养因子的减少。     

乙酰胆碱对培养T细胞功能的作用

本文研究不同浓度（１０＾－１０－１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ）乙酰胆碱（ＡＣｈ）对离体培养的大鼠脾脏Ｔ淋巴细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。实验结果表明：１０＾－９－１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ可显著增强Ｔ细胞由刀豆素Ａ（Ｃ－Ａ）诱导的增殖反应,以１０＾－７－１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ时最强。淋巴细胞先用ＡＣｈ刺激１ｈ或者刺激１ｈ后洗弃ＡＣｈ,再用ＣｏｎＡ诱导６ｈ的Ｔ细胞的增殖。１０＾－７－１０－６ｍｏｌ／Ｌ阿托品可阻     

胶原诱导性关节炎小鼠CD4^＋T细胞亚群表达酪氨酸羟化酶的作用

目的：本研究应用胶原诱导性关节炎（CIA）的动物模型,通过研究CD4＋T细胞亚群表达酪氨酸羟化酶（TH）的变化与作用,探讨CIM＋T细胞亚群来源的儿茶酚胺与CIA的炎症反应之间的关系。方法：雄性DBA／1小鼠36只随机分为对照组、35天模型组和55天模型组（n=12）。用Ⅱ型胶原（cⅡ）乳剂免疫DBA／1小鼠诱导CIA,在初次免疫后第35天和55天进行关节临床评分并检测血清中抗cⅡ IgG抗体水平的变化。用Western blot法检测肠系膜淋巴结中1h1、Th17、Th2和Treg细胞的特异性转录因子及其细胞因子以及TH表达的变化。用流式细胞术检测肠系膜淋巴结中表达TH的CD4＋T细胞亚群数目的变化。结果：CIA小鼠在发病早期（初次免疫后第35天）和发病晚期（初次免疫后第55天）临床评分和血清中抗cⅡ IgG抗体水平显著升高。CIA小鼠肠系膜淋巴结中1h1和Th17细胞的特异性转录因子和细胞因子表达增加而Th2和Treg细胞的细胞因子表达减少。CIA小鼠肠系膜淋巴结中TH的表达增加,且CD4＋T细胞中TH＋的细胞数目增多,这主要是来自CD4＋T细胞亚群中Thl和rIh17细胞的作用。结论：CIA小鼠肠系膜淋巴结中存在CIM＋T细胞亚群来源的儿茶酚胺的增加,可能在cn的发展过程中具有一定的抗炎作用。     

丹参多酚酸盐对斑马鱼胚胎血管新生的影响及分子机制初步研究

目的:研究丹参多酚酸盐对斑马鱼发育过程中血管新生的影响,并初步探讨其机制。方法:取血管内皮具有绿色荧光蛋白标记的转基因斑马鱼卵后,胚胎分别给0.5%二甲基亚砜(DMSO,对照组)、丹参多酚酸盐(1mg/ml,实验组)处理24h,观察斑马鱼血管发育的变化并记录节间血管长度。定量RT-PCR检测前述药物处理后4、12和24h的斑马鱼胚胎中血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。结果:与对照组相比,使用丹参多酚酸盐药物处理后明显促进斑马鱼节间血管发育,其长度差别具有统计学意义([79.67±2.96)umvs(61.11±2.56)um,n=10,P<0.01)]。实验组较对照组VEGFmRNA表达量升高,在药物作用12h和24h时差异有统计学意义(P<0.05)。结论:丹参多酚酸盐可促进斑马鱼血管新生,可能与通过上调VEGF的表达有关。     

乙酰胆碱对大鼠体外抗体生成的影响

目的：观察不同浓度乙酰胆碱（ＡＣｈ,１０－１０～１０－５ｍｏｌ／Ｌ）对大鼠体外抗体生成的影响,并初步探讨其作用机制,从细胞水平了解乙酰胆碱与免疫功能之间的关系。方法：用体外抗体生成的检测方法,用绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）刺激大鼠肠系膜淋巴结Ｂ细胞转化成抗体形成细胞（ＡＦＣ）,然后检测其抗体生成量。结果：①１０－１０～１０－７ｍｏｌ／ＬＡＣｈ能显著抑制体外抗体生成,其中１０－８和１０－７ｍｏｌ／ＬＡＣｈ的作用较强,而１０－６和１０－５ｍｏｌ／ＬＡＣｈ无明显的抑制作用;②Ｍ型胆碱能受体激动剂毛果芸香碱（１０－８和１０－７ｍｏｌ／Ｌ）能明显减弱体外抗体生成,而Ｎ型受体激动剂烟碱（１０－８和１０－７ｍｏｌ／Ｌ）没有显著的减弱作用,Ｍ型受体拮抗剂阿托品（１０－７和１０－６ｍｏｌ／Ｌ）可完全阻断ＡＣｈ抑制体外抗体生成的作用;③ＡＣｈ分别在Ｂ细胞用ＳＲＢＣ刺激后３～４８ｈ中的６个不同时间与淋巴细胞作用,其抗体生成仍然是减少的。结论：ＡＣｈ可非浓度依赖性地抑制大鼠的体外抗体生成;此作用可能由Ｂ细胞上的Ｍ型胆碱能受体介导;且ＡＣｈ可能主要影响Ｂ细胞转化的后期过程。     

免疫应答对大鼠部分脑区中乙酰胆碱酯酶活性的影响

免疫应答对大鼠部分脑区中乙酰胆碱酯酶活性的影响彭聿平,邱一华,王健鹤（南通医学院生理学教研室南通２２６００１）测定脑内ＡＣｈＥ的活性可间接反映ＡＣｈ的含量,如果ＡＣｈＥ活性降低,表示脑内ＡＣｈ含量增高,反之亦然。国外文献报道,外周ＡＣｈ可增强Ｔ淋巴细...     

miR-217参与高糖诱导的内皮细胞凋亡的调控

目的:研究miR-217对高糖诱导的内皮刺激内皮细胞凋亡的作用。方法:培养人冠状动脉内皮细胞,用含D-葡萄糖(30mmol/L)的培养液刺激:(1)利用实时定量PCR检测内皮细胞相关微小RNA(miR-217、miR-137、miR-29c、miR-218、miR-451、miR-328、miR-517c和miR-216a等)的表达变化;(2)利用慢病毒感染技术干预内皮细胞miR-217水平,利用流式细胞术检测细胞凋亡水平;(3)生物信息学预测、双荧光素酶报告基因验证以及蛋白免疫印迹法(western blot)确定miR-217的靶基因。结果:(1)实时定量PCR检测发现高糖刺激内皮细胞后,miR-217、miR-137、miR-29c、miR-218等的表达上调(P0.01),miR-451、miR-328、miR-517c和miR-216a的表达下调(P0.01),其中miR-217比对照细胞升高了5.67倍;(2)慢病毒感染内皮细胞后再经高糖刺激,流式细胞术检测发现过表达miR-217的内皮细胞凋亡水平有显著提高;(3)生物信息学分析发现SIRT1基因的3'非翻译区上存在一个miR-217的结合位点,双荧光素酶报告基因和western blot结果均证明SIRT1是miR-217的靶基因。结论:miR-217可能通过抑制SIRT1的表达参与高糖诱导的内皮细胞凋亡的调控。     

热休克蛋白90对血小板源衍生因子诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究热休克蛋白90(HSP90)对血小板衍生因子(Platelet derived growth factor,PDGF)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:采用胶原酶消化法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,应用脂质体细胞转染siRNA的方法抑制HSP90的表达,定量PCR和western blot的方法检测抑制效率。利用PDGF-bb诱导刺激平滑肌细胞增殖,CCK8法检测细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测细胞生长周期的改变。结果:平滑肌细胞中转染HSP90的siRNA后,HSP90的mRNA和蛋白水平明显降低,分别为对照组的65.3%和57.6%(P0.05);PDGF-bb刺激明显促进平滑肌细胞生长,而降低HSP90水平显著影响PDGF-bb诱导的细胞增殖(P0.05);流式细胞术检测发现降低HSP90水平引起平滑肌细胞生长停滞,分布在细胞周期G1期的细胞比例明显增多(P0.05)。结论:HSP90通过调控平滑肌细胞的生长周期参与调节细胞增殖过程。     

乙酰胆碱通过作用于α7烟碱型乙酰胆碱受体抑制大鼠小胶质细胞炎性反应

小胶质细胞是中枢神经系统中主要的免疫细胞。本研究旨在探讨乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)抑制小胶质细胞炎症反应的具体机制。原代培养Sprague-Dawley(SD)大鼠小胶质细胞,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导建立炎症反应模型,ACh处理24 h后,用Western blot检测多种炎性因子、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)的蛋白表达,用ELISA检测多种炎性因子和IGF-1的释放情况,用慢病毒转染沉默α7nAChR后观察ACh作用的变化。结果显示,LPS可促进小胶质细胞的激活,上调诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)蛋白表达,增加白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的表达和释放,减少神经营养因子IGF-1的表达和释放,ACh能逆转LPS的这些作用;LPS可下调小胶质细胞的α7nAChR蛋白表达,ACh逆转该作用;α7n AChR-shRNA慢病毒转染小胶质细胞后,ACh对抗LPS的作用消失。以上结果提示,ACh对抗LPS诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用是通过α7nAChR实现的,这为今后神经炎症疾病的治疗提供了新的治疗靶点。