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相似文献
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1.
将马铃薯Y病毒普通系(PVY0)的外壳蛋白基因克隆到表达质粒pMALc2中,构建这一基因在大肠杆菌中的表达载体pMALc2PVY0CP。SDSPAGE及Westernbloting检测结果表明,这一表达栽体在E.coliDH5α中经IPTG诱导可表达分子量为71.8kDa的特异性融合蛋白。以amyloseresin亲合柱层析纯化这一融合蛋白为抗原,免疫家兔制备了效价为1∶1024的特异性抗血清。用该抗血清可通过对流免疫电泳、免疫双扩散及Westernbloting对PVY进行检测  相似文献   

2.
根据猪瘟病毒C株的序列,以计算机辅助设计,化学合成1对引物(PF5648/PR6604),应用RTPCR技术从感染猪血中成功地扩增了我国猪瘟病毒强毒石门株NS23基因片段,大小为957bp,位于NS3基因的中部NTPase和Helicase活性区。克隆后测序,结果表明该段基因产物具有解旋酶超家族全部七个特征性保守序列,包括共同的NTP结合基序A位点(GXGKT/S)和B位点(3hy,2x)D。序列同源性比较表明,石门株与日本的ALD和GPE-株同源性最高,与其它3株猪瘟病毒(C株、Brescia株和Alfort株)的同源性也很高,并与2株牛病毒性腹泻病毒(BVDV)(NADL株和SD1株)也有较高的同源性,尤其是由核苷酸序列推导的氨基酸序列,同源性均大于90%,是瘟病毒属基因组中最保守的区段,这与该基因产物在病毒复制及聚蛋白前体加工过程中所具有的重要功能是一致的  相似文献   

3.
将含有鸡传染性支气管炎病毒 S1 基因c D N A 的重组转移质粒p S X I V V I+ X3 S1 . Holte 和p S X I V V I+ X3/4 S1 . Holte 分别与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Tn N P V S V I- G D N A( O C C- ,gal+ ) 共转染草地夜蛾( Sf9) 细胞,经空斑纯化得到重组病毒 Tn N P V( X3) S1 . Holte O C C+ 和 Tn N P V( X3/4) S1 . Holte O C C+ 。将重组毒株分别感染 Tn5 B1 细胞,并进行 S D S P A G E 与 Westernblot 检测。结果表明, Tn N P V( X3/4) S1 . Holte O C C+ 在感染的细胞中高效表达了 S1 蛋白, S D S P A G E 凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后72 h S1 蛋白的表达量占细胞内总蛋白量的35 .8 % ,而 Tn N P V( X3) S1 . Holte O C C+ 感染的细胞内检测不出 S1 蛋白。经分析认为这一差异主要来自 S1 基因翻译起始位点及其附近的周围环境。  相似文献   

4.
大豆短叶柄性状的遗传分析   总被引:3,自引:0,他引:3  
赵团结  盖钧镒 《遗传学报》1998,25(2):166-172
2个短叶柄遗传材料NJ90L1SP及D761609与长叶柄品种(系)杂交的9个组合的后代分离结果表明:(1)新发现的突变体NJ90L1SP的短叶柄与不正常叶枕两性状之间为一因多效,受2对隐性重叠基因控制;(2)由美国引进的D761609的短叶柄性状受2对隐性重叠基因控制;(3)NJ90L1SP与D761609短叶柄性状的遗传控制不同,叶柄长度至少受两两重叠的4对基因控制。  相似文献   

5.
长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2的分离和初步表征   总被引:10,自引:0,他引:10  
东北长白山白眉蝮蛇(AgkistrodonblomhoffiUsurensis)蛇毒经DEAESephadexA50离子交换层析柱,连续3步SephadexG75凝胶过滤柱得到了磷脂酶A2(PLA2)的纯品。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)以及基质辅助激光解析电离飞行时质谱(MALDI/TOF/MS)表征为单一蛋白,其准确分子量为(14.008±0.007)kD。最适pH范围8.0~9.0,最适的反应温度为45℃。在溶液中有多聚体的存在。  相似文献   

6.
用PCR法获得了HBsAgpreS1(1-65)肽段基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子(hTNFα)之后,插入表达载体PSB-92中,使融合基因的5′端直接置于大肠肝菌PL启动子下游,采用30℃培养,42℃诱导,获得了TNF与preS1(1-65)融合蛋白的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为25kD,约占细菌总蛋白的35%。表达产物经Westernblot验证,能分别特异地与hTNFα抗体与preS1抗体结合,稀释复性后,该融合蛋白还具有TNF的生理功能(对L929细胞的细胞毒活性)。经DNA序列测定,preS1(1-65)肽基因正确地融合在hTNFα基因之后。该结果提供了一种制备preS1的新方法,为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。  相似文献   

7.
帕金森病是一种神经退化性疾病,又称震颤麻痹。该病病因复杂、临床表现多样,多发生于老年人,但也可见于青年人。先前的研究已表明,自发消退性青春型帕金森病(ARJP)相关基因定位于第六号染色体长臂(6q25.2~q27),并与D6S305和D6S253标...  相似文献   

8.
从水稻矮缩病毒(Ricedwarfvirus,RDV)中国福建分离物中克隆分离了最外层外壳蛋白基因(S2)全长cDNA,并对其进行了序列分析,结果表明RDVS2cDNA全长3512bp,仅含一个3348bp的阅读框架,编码一个含有1116个氨基酸的蛋白(P2)。与基因库中已知基因序列比较,发现它与日本RDVH株系相应片段的核苷酸和氨基酸同源率分别为946%和954%,与轮状病毒VP2氨基酸序列有一定的同源性。S2核苷酸序列二级结构预测结果表明,5’端50个核苷酸的二级结构为一个发夹结构和一个茎环结构。P2有4个富含亮氨酸的区域,位于N端亲水区域的10个氨基酸(AA69~78)残基形成一个α螺旋,这些特点均与轮状病毒VP2的结构特征相似。SDSPAGE和Western印迹分析表明在大肠杆菌中分段高效表达了S2编码蛋白的N端和C端。  相似文献   

9.
潘星华  傅继梁 《遗传学报》1997,24(3):195-205
对7种哺乳动物MHC DQA座位的23个等位基因不同外显子,抗原识别位点和EN2的非ARS的核苷酸同义替换率和异义替换率进行了分析,发现在HLA-DQA1的7个等位基因之间和Ia Aa8个等位基因之间,即同一物种DQA1座位内,ARS的PN均显著高于Ps2倍以上,表现超显性选择;而不同物种DQA基因(DQA1或DQA2)或同一物种的DQA基因(DQA1和DQA2)的ARS之间和各比较组的NAEN2  相似文献   

10.
为了研究内皮型氧化氮合酶(eNOS)的功能、功能调节以及结构与功能的关系.通过PCR技术克隆出eNOSFAD间区801~902AA肽段的编码基因,插入pET28a(+)表达质粒中构建成pET28a/eNOS2重组表达质粒,经转染在大肠杆菌中成功表达.表达蛋白经金属离子螯合亲和层析和SDSPAGE回收纯化,得蛋白质纯品.为eNOS特异性抑制肽的筛选和eNOS特异性抗体的制备提供了必要的准备  相似文献   

11.
将外源基因———日本血吸虫26kD抗原(Sj26GST)基因克隆到大肠杆菌分枝杆菌穿梭质粒中,构建成四个不同的表达截体,研究它们在耻垢后分枝杆菌(Mycobacteriumsmegmatis)中的表达效率。首先将含有结核杆菌热休克蛋白70(HeatShockProtein,HSP70)的启动子的质粒pMT70用NcoI切,进行两种不同的修饰后,得到不同的SD序列;将Sj26GST基因克隆进去。再将含HSP70启动子和Sj26GST基因的片段切下,克隆到分枝杆菌大肠杆菌穿梭质粒pBCG2000中,筛选出不同SD序列、不同方向和不同拷贝数的分枝杆菌表达载体四个。所表达的重组天然Sj26GST(rSj26GST)为可溶性蛋白,在SDSPAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带。通过薄层扫描分析,发现表达质粒中双拷贝启动子外源基因组合,表达效率最高,是单拷贝组合的16倍,占分枝杆菌菌体总蛋白的28%。而不同的克隆方向和不同的SD序列(两者相差3个碱基)对表达效率的影响不明显。  相似文献   

12.
PARP酶抑制剂未引起整合的外源LacZ基因的丢失   总被引:2,自引:0,他引:2  
使用聚ADP核糖聚合酶(PARP)NAD位点抑制剂苯甲酰胺(BA)研究了降低PARP酶活性对外源LacZ基因整合稳定性的影响,利用DNA体外重组技术将LacZ基因全序列插入到真核表达载体载体PSV2neo的HindⅢ位点,构建了一个具有真核细胞neo基因筛选标记和LacZ基因的真核表达重组体PSV2neo-beta-gal将该重组体导入HeLa细胞,经G418筛选获得了能稳定表达β-半乳糖苷酶的H  相似文献   

13.
三唑酮对绿豆幼苗叶片衰老的延缓作用   总被引:26,自引:0,他引:26  
三唑酮处理可提高离体绿豆(PhaseolusradiatusL.)幼苗叶片叶绿素和蛋白质含量。叶片衰老过程中超氧物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(AsAPOD)活性及抗坏血酸(AsA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量降低。20mg/L三唑酮可提高POD、AsAPOD活性和AsA、GSH含量,对SOD、CAT活性无影响。丙二醛(MDA)含量在叶片衰老过程中提高,并与POD、AsAPOD活性和AsA、GSH含量呈显著负相关,三唑酮可降低MDA含量。表明三唑酮有提高植物对膜脂过氧化作用的保护能力,延缓叶片的衰老作用。  相似文献   

14.
应用分子杂交技术和放射免疫检测方法研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞的环氧合酶(COX)和血栓素合成酶(TXS)基因表达及其条件培养基中6ketoPGF1α和TXB2含量的动态变化。发现:6,12,24和48h缺氧组分别与常氧组比,COX1和COX2基因表达增加,并且COX2mRNA在缺氧6和12h就明显表达增加。在前述的不同缺氧时间组内皮细胞条件培养基中6ketoPGF1α含量也均显著高于相应常氧对照组(P<0.05);但TXS的mRNA水平及TXB2含量在缺氧48h才有明显增加(P<0.05)。结果表明:(1)缺氧可诱导肺动脉内皮COX基因表达和PGI2生成增加,在早期以COX2基因表达增加更为明显,提示可能在肺血管缺氧反应中起调节作用。(2)48h的缺氧可使内皮细胞TXS基因表达及TXA2生成增加,它可能在慢性缺氧肺血管反应中起介导作用。  相似文献   

15.
酵母菌 S H2 发酵产物( 简称 F S H2) ,用 Sephadex G75 凝胶层析和 H P L C 色谱层析分离纯化,收集到一组蛋白。该组蛋白在 P A G E 和 S D S P A G E 电泳上带型一致,无蛋白亚基,分子量范围为52 ~72 k D。凝胶上糖蛋白的特异性染色——— Schiff’s 染色显示阳性染色带;用 Lowry’s 法测蛋白和硫酸酚法测糖,显示蛋白与糖的比例约为3∶1 。该组蛋白与人α干扰素作用,增强干扰素生物学效价分别为1 .6 ~2 .8 倍和1 .4 ~4 .0 倍;经 Sephadex G75 凝胶层析的 F S H2 蛋白洗脱峰增效2 .01 ~5 .68 倍;发酵液增效1 .64 ~6 .86 倍。并证实酵母菌 S H2 增效干扰素的活性成分为52 ~72k D 分子量范围的胞外糖蛋白( 简称 Y E G Ps) 。  相似文献   

16.
减蛋综合征病毒100K蛋白基因的克隆与序列分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
用常规方法提取减蛋综合征病毒(EDSV)中国分离株(AA2株)病毒DNA,分别构建了限制性内切酶HindⅢ、SphⅠ、PstⅠ水解片段的全基因文库,并对其中100K蛋白基因的序列进行了分析。EDSV100K蛋白基因位于减蛋综合征病毒基因组55.7~64.8物理图谱单位(m.u),共2091个核苷酸(nt),其编码产物由696个氨基酸(aa)组成,推测其分子量为77.7kD。编码蛋白氨基酸同源性分析表明,EDSV100K蛋白与人腺病毒(Ad2、Ad5、Ad12、Ad41)、Ⅰ群禽腺病毒(CELO和FAV10)的同源性为32.3~34.4%之间,而与羊腺病毒(OAV)的同源性达到56.4%。  相似文献   

17.
以鸡传染性法氏囊病病毒内蒙古毒株(IBDV-NM)dsRNA为模板,用RT-PCR法扩增其主要寄主保护抗原VP2基因的全长cDNA,克隆于pUC19的XbaI/KpnI位点,进行了全序列分析。序列比较发现IBDV-NM毒株VP2基因与已报道的其它7个IBDVCJ801bkf、Cu1、PBG98、52/70、002—73、STC及VariantE毒株之间高度同源,其核苷酸序列的同源率为91.6%~96.2%,推测的氨基酸序列的同源率为96.2%~98.6%。IBDV-NM毒株VP2高变异区的第一个亲水区氨基酸序列与CJ801bkf、Cu1、PBG98、52/70、STC、002—73比较,有一个氨基酸差异,第二个亲水区氨基酸序列与上述6个毒株完全相同。而与VariantE比较,两个亲水区内各有两个氨基酸差异。此外,IBDV-NM毒株VP2具有强毒株所特有的7肽保守区:SWSASGS。这些结果表明,IBDV-NM毒株为标准血清Ⅰ型IBDV强毒株。  相似文献   

18.
高粱细胞质雄性不育系3197A(3A)在常温条件下是不育的(Figs.11&2),经热激(45℃)诱导不同程度地恢复了育性(Figs.13&4),为研究其不育机理提供了线索。热激2h后,3A中即可产生一类线粒体热激蛋白(HSPs)。其中,分子量为70kD的HSP70含量最高,也最为稳定。不过,3A中HSPs的稳定性弱于保持系3197B(3B)(Fig.2,Panels1~4)。放线菌素D抑制HSPs的合成,而氯霉素无此作用(Fig.2,Panels5&6),表明:HSPs是由核基因编码、在细胞质中合成、再跨膜转运到线粒体中的。3A幼穗经热激后,线粒体的总蛋白量猛增了2.7倍(Fig.3),达到3B的水平,育性亦变为可育的。Fig.4表明:HSP70反义链cDNA(R1)能进入到3B花药细胞中,并与靶RNA(HSC70mRNA)结合,而对照、正义链cDNA(D)链无此反应。由此、再增加一个通用保守序列的反义链cDNA(R2)、共两个探针(R1、R2),可以检测到:3A在常温下没有能力合成HSC70mRNA(Fig.5),而在热激条件下,转变为有能力(Fig.6)。启示:3A在热激条件下由不育转变为可育  相似文献   

19.
观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心肌肌浆网Ca2+,Mg2+-ATPase基因(SERCA2a)转录调节的影响,评价DMP811对此效应的干预作用.6周龄雄性SD大鼠随机分为3组,每组6只.组1:生理盐水输注;组2:AngⅡ输注+DMP811管饲(3mg·d-1·kg-1);组3:AngⅡ输注(200ng·min-1·kg-1.1周后称其体重,取心脏并称重,提取心脏总RNA后采用Northernblot的方法检测SER-CA2a的转录水平,采用RT-PCR检测AngⅡ1型受体(AT1)mRNA水平.实验后,组3心重(CW)、心重/体重(C/B)、AT1受体转录水平均高于组1(分别增加4.7±0.4%,4.9±0.9%和24.7±3.5%;P<0.01),而SERCA2a基因转录水平显著低于组1(降低20.1±3.0%,P<0.01),并且SERCA2amRNA水平与AT1受体mRNA水平呈负相关(r=-0.74,P<0.01).AngⅡ导致的上述改变能被DMP811完全阻断.AngⅡ通过其Ⅰ型受体的介导,诱导了SERCA2a的转录下调  相似文献   

20.
对PAK株的绿脓杆菌外毒素结构基因进行全长核苷酸顺序测定时发现:来源于PA103株和PAK株的PE基因一级结构间存在差异,其中Thr~(179)(ACC)→Ala~(179)(GCC)、Ser~(515)(AGC)→Gly~(515)(GGC),并有11个同义突变,但变异并不影响白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的ADP-核糖基化活性及其细胞毒活性。  相似文献   

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