长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2的分离和初步表征

东北长白山白眉蝮蛇（ＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｂｌｏｍｈｏｆｆｉＵｓｕｒｅｎｓｉｓ）蛇毒经ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换层析柱,连续３步ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤柱得到了磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）的纯品。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）以及基质辅助激光解析电离飞行时质谱（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳ）表征为单一蛋白,其准确分子量为（１４．００８±０．００７）ｋＤ。最适ｐＨ范围８．０～９．０,最适的反应温度为４５℃。在溶液中有多聚体的存在。     

不同品种淫羊藿黄酮类有效成分的主成分分析及对肾阳虚大鼠保护作用的研究

采用HPLC测定不同品种淫羊藿黄酮类即淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C 4种有效成分含量,结合主成分分析对不同品种淫羊藿进行质量分析与评价,并考察淫羊藿对大鼠肾阳虚保护作用。将实验动物随机分为阳虚模型对照组(模型组)、金匮肾气丸干预组(阳性组)、淫羊藿低(125 mg/kg)、中(250 mg/kg)、高(500 mg/kg)剂量组。四周后测定肾阳虚大鼠血清中尿酸(UA)、肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)。主成分分析结果显示,主成分1淫羊藿苷、朝藿定C和主成分2朝藿定B是影响样品质量评价的主要因子。12批淫羊藿药材整体质量较好。药理学结果显示,与空白组相比,大鼠血清中UA、CRE和BUN含量显著降低。上述结果表明:本方法同时测定淫羊藿黄酮类4种有效成分,为建立淫羊藿质量评价提供参考;淫羊藿对氢化可的松诱导的肾阳虚具有明显的保护作用,具有量效关系。     

抗体酶设计新思想——疏水腔修饰法

提出一种新的抗体酶设计思想———疏水腔修饰法 ,并根据这一思想合成出谷胱甘肽 (GSH)的类似物S 二硝基苯取代的谷胱甘肽二丁酯 (GSH S DNPButyles ter)作为半抗原Hapten 3;将该半抗原连到载体蛋白上进行免疫 ,利用单克隆抗体制备技术得到抗体 1C8,通过 2步化学修饰方法 ,将谷胱甘肽过氧化物酶的催化基团硒代半胱氨酸 (Sec)引入到抗体 1C8可变区中 ,得到转换值即催化中心活力 (kcat)为天然兔肝谷胱甘肽过氧化物酶 1 7倍的抗体酶Se 1C8,是曾经报道抗体酶Se 4A4,Se 4G3的 40倍和 5 3倍 ,是目前与天然酶相比催化效率最高的抗体酶 ,这一结果也验证了提出的抗体酶设计思想     

不同浓度藻酸钙复合软骨细胞体外培养的实验研究

为探寻复合软骨细胞生长的最佳藻酸钙浓度,将传代培养的、细胞终浓度为1×107/mL的软骨细胞复合藻酸钠凝胶,然后滴入浓度分别为100、200、300、400、500mmol/L的氯化钙溶液中,固化15min形成藻酸钙凝珠,于体外培养7d后,行HE染色及Masson’s三色染色,结果显示软骨细胞与固化剂氯化钙浓度为100、200、300mmol/L的藻酸钙凝胶复合良好并能在其中保持活性及分裂能力;而在氯化钙浓度为400mmol/L和500mmol/L的藻酸钙凝胶中,软骨细胞的活性及分裂能力明显下降.因此固化剂氯化钙的浓度可以提高到300mmol/L,该浓度不仅对软骨细胞的生长无影响,而且能适当提高藻酸钙凝胶的机械强度,可以作为一种较理想的软骨组织工程支架材料.     

体外构建组织工程化软骨的初步研究

观察用藻酸钠凝胶在体外长期培养软骨细胞的情况,为求进一步用藻酸钠凝胶在体外构建组织工程化软骨提供初步研究.将传代培养的、细胞终浓度为1×107/mL的软骨细胞复合藻酸钠凝胶,注入圆柱形模具中,将模具分别浸入100、200、300 mmol/L的固化剂氯化钙溶液中,固化15 min使其成形,于体外培养2、4、6周后,行HE染色、阿尔新蓝染色,了解软骨细胞的生长情况.2、4、6周时软骨细胞与藻酸钙凝胶复合良好并能在其中保持活性及分裂能力,且在6周时出现类软骨变化.因此藻酸钠凝胶是可用于体外构建组织工程化软骨的生物材料.     

基于转录组学的梅花鹿茸皮组织修复机制研究

为研究不同生长时期梅花鹿东北亚种Cervus nippon hortulorum鹿茸茸皮差异基因表达变化,以期为鹿茸生长机制及组织修复的临床治疗提供理论依据,本研究采用Illumina测序技术和生物信息学方法对快速生长期和骨化期鹿茸生长中心茸皮进行转录组测序和差异基因表达分析。从快速生长期和骨化期茸皮中分别获得45422254条和44530430条clean reads,测序质量值分别为98.50和98.39;通过Trinity组装,分别获得44352条和43194条组装序列,平均长度分别为977nt和1135nt。通过数据库比对和差异基因表达分析筛选出生长因子7种、转录因子25种和胶原分子6种。在快速生长期鉴定出多种参与组织修复的重要生长因子和转录因子,包括Pdgfa、Tgfβ3、Egfl7、Vegfb、Sox4、Sox12、Scx、E4f1、Tcf4和Elf4等。     

五味子抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶活性的比较研究

筛选出五味子抗氧化活性最强及α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用最优的部位。对各提取物及有效部位进行含量测定。以对DPPH·清除能力和铁离子还原能力代表其抗氧化活性,比较五味子各提取部位的抗氧化活性。以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物,阿卡波糖(ACAR)为阳性对照,对各提取部位的α-葡萄糖苷酶活性的体外抑制作用进行比较。采用Origin 8软件中的多项拟合计算活性实验的IC50值及Abs0.7值,并采用皮尔森相关性分析测定活性成分含量与抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性间的相关性。五味子药材中含量最高的是总多糖类物质,含量为72.9 mg GL/g DM,其次为总酚酸类物质,含量为46.8 mg GA/g DM,木脂素类物质含量为39.6 mg SC/g DM,三萜类物质含量为32.2 mg OL/g DM,总黄酮类物质含量最低,为22.6 mg RU/g DM。五味子各有效部位抗氧化活性顺序为:总木脂素总黄酮总三萜总酚酸总多糖。对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用最强的为总木脂素(IC50值为0.24),抑制作用最弱的为总三萜。五味子70%乙醇提取物和乙酸乙酯萃取物的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶活性抑制作用最优。五味子中总木脂素具有最优的抗氧活性及α-葡萄糖苷酶活性抑制活性。抗氧活性和α-葡萄糖苷酶活性抑制活性与木脂素类物质的含量呈正相关。