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介绍了从健康牛骨髓中分离到一种具有抑制肿瘤活性的糖蛋白,并对该糖蛋白进行了纯化,获得了电泳纯和层纯的纯品,测得该糖蛋白N末端为丙氨酸残基,用SDS-PAGE法测得该糖蛋白的表观分子量为65kD,氨基酸组成分析显示其为一种富含丝氨酸的蛋白质,生物活性测定表明,该糖蛋白纯品对小白鼠白血病P388细胞和人慢粒白血病HL-69细胞株的增殖均有抑制作用,有关该糖蛋白的糖含量的定量测定及蛋白质一级结构分析正在 相似文献
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经SephadexG-50和SP-SephadexC-25两次柱层析,从河南淅川马氏钳蝎毒素中分得一种碱性神经毒素BmKMI8.等电聚焦和SDS电泳显示单一组分,其pI为9.1,Mr为7100.毒性测试结果表明,该组分对小白鼠有较强的毒性,对昆虫也有一定的毒性,已获得该毒素的两种晶型的大单晶,并测定其空间群为P2_12_12_1,晶胞参数为:BmKMI8-A:a=36.7,b=26.6,c=52.0,BmKMI8-B:a=36.64A,b=37.31,c=37.95,已收集了BmKMI8-B分辨率为1.74的X射线单晶衍射数据。 相似文献
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在新生大鼠胸段脊髓薄片,对经腹根逆行刺激鉴定的交感节前神经元(SPNs)进行细胞内记录,发现部分SPNs有长时程后超极电位(11-AHP),其达峰时间0.2-0.7s,时程1-10S,幅度7-20mV。11-AHP前部常为6-30ms达峰、短于400ms时程的快AHP成分。11-AHP除伴有膜输入电阻降低外,还呈膜电位依赖性,翻转电位为-90至-100mV。结果证明11-AHP能起着控制SPN的放 相似文献
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联合采用DEAE-纤维素层析、色谱聚焦、NADP亲和层析与SephadexG-100的凝胶过滤,对人脑醛糖还原酶(EC1.1.1.21;ALR)进行纯化.现测得该酶的等电点pH值为5.85.经聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳和Western印迹证实,获得了满意的酶纯度.同葡萄糖,葡糖-6-磷酸与NADPH保温后,人脑ALR纯品的活性与对照酶组相似,且不被糖酵解途径的一些磷酸化中间产物抑制.苯基硼酸琼脂糖柱层析洗脱谱峰和氢硼化钠还原反应提示,当同葡萄糖保温时,人脑ALR(特别是其均一态)可能未被进一步糖基化.在糖尿病并发症和按结构完成药物设计的研究工作中,纯品ALR的应用可发挥重要作用 相似文献
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在新生大鼠胸腰段脊髓薄片,对经腹根逆行刺激鉴定的交感节前神经元(SPNs)进行细胞内记录.发现部分SPNs有长时程后超极化电位(11-SHP),其达峰时间为0.2-0.7s.时程1-10s,幅度7-20mV。11-AHP前部常为6—30ms达峰、短于400ms时程的快AHP成分。11-AHP除伴有膜输入电阻降低外,还呈膜电位依赖性,翻转电位为-90至-100mV。结果证明11-AHP能起着控制SPN的放电频率的重要作用。 相似文献
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大鼠催乳素基因真核细胞可表达性质粒的构建及应用研究 总被引:4,自引:0,他引:4
735bp的PRLcDNA片段从质粒PRL-SP65#1中回收后,用粘性末端连接法将其重组到真核表达载体pcDNA3上,筛选出正向连接重组体pcDNA3-PRLS和反向连接重组体pcDNA3-PRLAS。将重组体pcDNA3-PRLs和空载体pcDNA3分别转入NIH3T3细胞系,用G418筛选出阳性细胞后与未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2的情况下,用原位杂交的方法,分别用PRLcDNA探针和原癌基因c-H-rascDNA探针进行检测,未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2时都几乎无催乳素基因的表达,同样,转入空载体的NIH3T3细胞也无PRL的表达,而转入重组体pcDNA3-PRLS的NIH3T3细胞则有大量的PRL基因的表达,与对照组相比有显著差异(P<0.01)。正常和转入空载体的NIH3T3细胞有一定程度的原癌基因c-H-ras的表达,当分别加入E2和转入重组体pcDNA3-PRLS后,NIH3T3细胞中的c-H-ras基因表达水平都显著升高(P<0.05)。 相似文献
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柑叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
唐云明 《Acta Botanica Sinica》1995,(8)
柑(Citrusreticulata Blanco)幼叶中存在高活性的酸性蔗糖酶。经硫酸铵盐析、DEAE-琼脂糖离子交换层析、SephacrylS-200 凝胶层析纯化,活性回收率6.4% ,纯化倍数179.2 倍。纯化的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示1 条蛋白带,其亚基分子量40 kD。用SephacrylS-200 凝胶层析法测得分子量为80 kD。推测该酶由两个相同亚基构成。以蔗糖为底物测定该酶的表观Km 为1.6×10- 2 m ol·L- 1,Vm ax为100 m g 还原糖·m g- 1蛋白质·h- 1。最适pH 5.0,酸碱稳定区在pH 4.5—5.5 之间。最适温度55℃ 相似文献
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鸡减蛋综合征病毒(EDSV—76)基因组E1区结构特点分析 总被引:1,自引:0,他引:1
EDSV-76病毒中国株AA-2经常规方法提取其病毒DNA后,建立了限制性内切酶PstI水解片段的全基因文库。对其中PstI-G片段和PstI-A片段的正反链进行序列测定,获得EDSV E1区(0-8.8m.u)的核苷酸序列。经分析,EDSV E1区具有与其他腺病毒E1区类似的结构。以大于60个氨基酸残基为标准,EDSV E1区共有7个开放读码框架(ORF),其中R1、R2、ElbsT和E1b1T 相似文献
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以牛血球为材料,经溶血等处理和丙酮沉淀,获得牛血球超氧化物歧化酶粗品。此粗酶可以通过DEAE-Sepharose和CM-Sepharose快速柱层析,获得超氧化物歧化酶纯品。纯化的酶比活可达13500u/mg,经PAGE、SDS-PAGE和快速蛋白液相色谱(FPLC)检测,结果表明,纯化酶是均一的Sephadex G-100凝胶过滤测得该酶分子量为31,800,SDS-PAGE测得亚基分子量为15 相似文献
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一种东亚钳蝎碱性神经毒素的纯化和初步晶体学研究 总被引:1,自引:0,他引:1
经SephadexG-50和SP-SephadexC-25两次柱层析,从河南淅川马氏钳蝎毒素中分得一种碱性神经毒素BmKMI8。等电聚聚焦和SDS电泳显示单一组分,其PI为9.1,Mr为7100,毒性测试结果表明,该组分对小白鼠有较强的毒性,对昆虫也有一定的毒性。已获得该毒素的两种晶全型的大单晶,并测定其空间群为P212121,晶胞参数为:BmKMI8-A:a=36.7A,b=26.6A,c=52 相似文献
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皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素IV的纯化与初步鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
从皖南尖吻蝮蛇毒液中经DEAE-Sepharose和Sephacryl S-200两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量血毒素(简称AaHⅣ)。经SDS-PAGE和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为44kD,等电点为pH5.0。从500mg粗毒中可获得20mg AaHⅣ纯品。AaHⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量(MHD)为0.4μg。 相似文献
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雌激素诱发大鼠原位与移植垂体催乳素瘤中催乳素基因与TGFα和TGF … 总被引:1,自引:0,他引:1
利用本实验室建立的17β-雌二醇诱致Sprague-Dawley(SD)大鼠原位垂体和异体移植于肾囊的垂体同时形成催乳素瘤的动物模型,采用Northem印迹杂交方法,我们观察了E2长期作用(120d)后诱发的原位与移植垂体PRL瘤中PRL基因和两种转化生长因子TGFα和TGFβ1基因表达水平的改变。结果表明:在E2长期作用后,原位垂体与异体移植于肾囊,从而远离下丘脑的垂体均可形成垂体PRL瘤;原位 相似文献
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本文报告利用pWR590质粒为载体,构建了含lac启动子,β-半乳糖苷酶(1-590)基因,Xa因子的四肽识别位点和HBV preS1,preS2编码序列的表达质粒,并成功地大肠杆菌中获得稳定表达。融合蛋白经Xa因子消化和高效液相层析,得到了preS1(1-91)纯肽。此肽特异性地与人肝细胞质膜结合,从而为肝细胞上存在preS1受体提供了直接的实验依据,也为分离和鉴定肝细胞上preS1受体打下良好 相似文献
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以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的12种糖苷酶,其中α-甘露糖苷酶、α-和β-半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-150分子筛层析,ConASepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α-半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高1072倍,活力回收15.6%,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE上均显示1条蛋白质带,在α-半乳糖苷酶浓度为150mU/ml的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α-半乳糖苷酶的分子量用SephadexG-100凝胶过滤柱测定或在SDS-PAGE上测定均为60kD,酶反应的最适pH在5.8附近,最适温度为60℃。该酶分解对硝基苯基-α-半乳糖苷的K_m值为3.7×10 ̄(-4)mol/L,V_m值为2.1×10 ̄(-4)mol/L。银离子、汞离子显著抑制酶活力,D-半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α-D-半乳糖苷的活力,根据Dixon作图求得其K_i值分别为0.92×10 ̄(-3)mol/L和1.98×10 ̄(-3)mol/L。2-脱氧-D-半乳糖和L-岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰 相似文献
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从皖南尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus)毒液中经DEAE-Sepharose和SephacrylS-200两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量出血毒素(简称AaHⅣ).经SDS-PAGE和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为44kD,等电点为pH5.0.从500mg粗毒中可获得20mgAaHⅣ纯品.AaHⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量(MHD)为0.4μg. 相似文献
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本文以哺乳动物细胞表达载体pSV2-dhfr为运载体,构建了受控于SV40早期启动子β-hCG基因的表达载体,转染CHO-dhfr-细胞后,挑选CHO(dhfr-)细胞,结果表明β-hCG不仅在细胞中表达,还分泌到培养液中。通过氨甲喋呤(MTX)加压后,表达量逐渐提高,0.1μmol/LMTX条件下培养液中β-hCG最高表达量可达到1.5μg/106细胞·24小时。经亲和层析获得纯的重组β-hCG,其分子量与天然制品一致,放射免疫测定的免疫原性为天然制品的84.9%。 相似文献
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乙肝病毒表面抗原preS1与人肿瘤坏死因子α融合基因的表达 总被引:6,自引:0,他引:6
用PCR法获得了HBsAgpreS1(1-65)肽段基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子(hTNFα)之后,插入表达载体PSB-92中,使融合基因的5′端直接置于大肠肝菌PL启动子下游,采用30℃培养,42℃诱导,获得了TNF与preS1(1-65)融合蛋白的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为25kD,约占细菌总蛋白的35%。表达产物经Westernblot验证,能分别特异地与hTNFα抗体与preS1抗体结合,稀释复性后,该融合蛋白还具有TNF的生理功能(对L929细胞的细胞毒活性)。经DNA序列测定,preS1(1-65)肽基因正确地融合在hTNFα基因之后。该结果提供了一种制备preS1的新方法,为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。 相似文献
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本文从含ArgRS306KR基因args306KR的pUC18重组质粒的大肠杆菌TG1转化子中经DEAE-Sephacel和Blue-Sepharose两步柱层析,得到电泳一条带的ArgRS306KR。纯酶的比活为2790单位/毫克。该酶氨酰化和ATP~PPi交换活力的最适pH分别为pH8.3和pH7.5。氨酰化活力对ATP、Arg和tRNA的Km分别为2.6mmol/L、14.0μmol/L和5.0μmol/L:Vmax为7630单位/毫克;koat为9S-1。ATP~PPi交换活力对ATP和Arg的Km分别为8.3mmol/L和99μmol/L;Vmax为16320单位/毫克;kcat为18S-1。 相似文献