油桐尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白的理化性质及二级结构预测

由SDS及梯度胶电泳测得油桐尺蠖核型多角体病毒（BsNPV）多角体蛋白天然状态及亚基分子量分别为363kD与31.5kD,从而推断此蛋白为十二聚体,亚基间无二硫键作用．BsNPV多角体蛋白的远紫外圆二色谱显示,它的二级结构含有31．7％的α螺旋,23．8％的β折叠及44．5％的无规卷曲,与二级结构预测结果相符．通过荧光光谱实验推知,BsNPV多角体蛋白的表面疏水性弱,其色氨酸残基位于蛋白疏水核内部．     

7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶晶体结构研究

7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶(SDXyI).19nm分辨率晶体结构已经解出.晶体空间群为I222,晶胞参数为a=9.884nm,b=9.393nm,c=8.798nm.参考锈赤链霉菌木糖异构酶(SRXyI)的晶体结构模型,通过分析晶体密堆积关系和晶体学R因子搜索,获得了SDXyI晶体结构的初始模型.采用PROLSQ软件包使用0.60～0.19nm分辨率衍射数据对模型进行了修正.最终模型的晶体学R因子为0.177,键长键角均方根偏差分别为0.0019nm和2.1°.与SRXyI相比较,SDXyI整体构象未发生明显变化,活性中心构象有显著差异.     

皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素IV的纯化与初步鉴定

从皖南尖吻蝮蛇毒液中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量血毒素（简称ＡａＨⅣ）。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为４４ｋＤ,等电点为ｐＨ５．０。从５００ｍｇ粗毒中可获得２０ｍｇ ＡａＨⅣ纯品。ＡａＨⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量（ＭＨＤ）为０．４μｇ。     

皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素Ⅳ的纯化与初步鉴定

从皖南尖吻蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）毒液中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量出血毒素（简称ＡａＨⅣ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为４４ｋＤ,等电点为ｐＨ５．０．从５００ｍｇ粗毒中可获得２０ｍｇＡａＨⅣ纯品．ＡａＨⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量（ＭＨＤ）为０．４μｇ．     

Crystal structure of Streptomyces diastaticus No. 7 strain M1033 xylose isomerase

The crystal structures of Streptomyces diastaticus No. 7 strain M1033 xylose isomerase (SDXyI) have been analysed and refined at 0.19nm. The crystal space group is I222, with unit cell dimensions of a=9.884 ran, b=9.393nm and c=8.798nm. Based on the coordinates of the Streptomyces rubiginosus xylose isomerase (SRXyI), the initial model of SDXyl was built up by the dose packing analysing and R-factor searching and refined by PROLSQ to a final R-factor of 0.177 with the rms deviations of bond lengths and bond angles of 0.001 9nm and 2.1°, respectively. No significant global conformation change existed between SRXyI and SDXyI except the local conformation in the active site.     

人口腔癌症缺失相关蛋白（DOC-1R）的表达、纯化和晶体生长

口腔癌缺失(DeletedinOralCancer-1,DOC-1)基因是近年来被证实的口腔癌中具有抑癌作用的基因。1999年,研究人员通过酵母双杂交实验又发现了与DOC-1相关的另一候选抑癌基因DOC-1R(DOC-1related)。以往的很多实验表明,这两个蛋白无论序列还是功能上都非常相似。然而,其三维结构以及与其他重要蛋白相互作用的机制一直还不清楚,PDB库中也未见其相关同源结构的报道。作者将人DOC-1R基因的cDNA片段克隆至原核表达载体pET-22b( )中,通过IPTG诱导获得高效表达,再经过Ni-NTA亲和层析和Superdex75层析柱纯化,获得了纯度达到96%以上的蛋白。质谱分子量测定显示DOC-1R的分子量为14091.23Da,与理论分子量基本一致;动态光散射实验显示蛋白均一性高达99.0%,可用于晶体生长;采用悬滴气相扩散法筛选,在多个条件下得到了DOC-1R的微晶。为DOC-1R的三维结构解析奠定了坚实的基础。     

真菌漆酶的结构与功能

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,能催化氧化酚类和芳香类化合物,同时伴随4个电子的转移,并将分子氧还原成水。漆酶结构的解析是阐明其催化作用机理、了解蛋白质结构与功能关系的基础。综述近年来对真菌漆酶蛋白结构及其功能研究的进展。     

蛋白质结构研究

生物大分子的功能主要取决于它们的三维结构、运动及相互作用。对蛋白质结构的解析可以从根本上阐明蛋白质功能的分子机制和基础,同时也是研究蛋白质功能的一个重途径。本文简述了当前蛋白质结构研究的主要手段,如X射线晶体学、核磁共振波谱学和三维电镜重构方法学等及其优缺点和适用性,总结了目前蛋白质结构研究进展并对将来的发展方向进行了一些探讨。尽管上述三种主要的研究方法已经比较成熟,而且在适用对象和实验方法上有很好的相互补充,但还是有相当多的生物学问题在结构水平上得不到解释和支持。因此,本文对目前蛋白质结构研究的热点和难点——膜蛋白和蛋白质复合物的研究现状和方法做了简要的概述,希望能够引起广大同行的关注。     

皖南尖吻蝮蛇出血毒素生物学活性与圆二色性关系的研究

用远紫外ＣＤ谱研究了皖南尖吻蝮蛇蛇毒３个出血毒素ＡａＨⅠ、ＡａＨⅢ和ＡａＨⅣ的溶液构象,ＡａＨⅠ的α螺旋、β折叠、β转角和无规卷曲的含量分别为２５．８％、１２．７％、２６．８％和３４．７％;ＡａＨⅢ的二级结构含量分别为２３．９％、２０．６％、２３．７％和３１．８％;而ＡａＨⅣ分别为１８．２％、３１．０％、１７．２％和３３．６％。当ｐＨ小于４．０或ｐＨ大于１１．０时,３种出血毒素α螺旋减少而β折叠增多,同时３种出血毒素的酪蛋白水解活性显著下降。ＥＤＴＡ抑制酪蛋白水解活性,表明３种出血毒素均是金属蛋白酶。ＥＤＴＡ、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋和Ｍｇ２＋能改变３种出血毒素的二级结构,并影响酪蛋白水解活性。     

Crystal structure determination of alkaline haemorrhagin AaHⅢ from snake venom of Agkistrodon acutus

The haemorrhagin AaH Ⅲ isolated from the snake venom of Agkistrodon acutus is one of the few al-kaline ones in snake venoms. Its crystals belong to space group P212121 with a = 9. 573 4 nm, b = 4. 996 7 nm and c = 4. 728 8 nm. Its crystal structure was determined by the molecular replacement method according to the model of metalloproteinase Adamalysin n from eastern rattlesnake venom. The AaHⅢ structure has been refined by PROLSQ. The final R factor was 0.254 and the RMS deviations of bond lengths and angles were 0. 001 8 nm and 1.5°. The structure comparison suggested that AaHⅢ has a similar structure to other snake venom zinc-metalloproteinases. They all belong to matrix metalloproteinases super-family.