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重组可溶性TRAIL的表达与生物学活性 总被引:7,自引:0,他引:7
研究重组可溶性TRAIL的抗肿瘤生物学活性。采用基因分子生物学方法构建重组可溶性TRAIL的表达载体,建立大肠杆菌表达菌株,采用柱层析等方法获得纯化的重组可溶性TRAIL;采用流式细胞术、细胞活性测定法和体内药效学实验分析重组可溶性TRAIL杀伤肿瘤细胞的生物学活性。结果表明重组可溶性TRAIL在体外可诱导人白血病细胞和肝癌细胞凋亡,凋亡率达50%以上。中枢神经系统的肿瘤细胞对重组可溶性TRAIL不敏感。重组可溶性TRAIL在体内能显著抑制人非小细胞肺癌细胞在小鼠体内生长,抑制率达70%以上。结论为研究制备的重组可溶性TRAIL能在体内外杀死多种肿瘤细胞,具有显著的临床应用前景。 相似文献
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CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了CD3ε和PMA对细胞凋亡基因fas的转录调控作用.根据已知的人fas基因5'上游序列设计引物,用PCR法从人胸腺细胞基因组DNA中扩增出fas5'上游长为446bp的启动子片段.将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体pXP2中.经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒DNA的结构和序列正确.用此质粒(pXP2-fasup)瞬时转染人JurkatT淋巴细胞,分析报告基因的表达水平.结果表明fas基因上游-506到-60的区域有弱启动子活性,约是阴性对照的1.5倍.抗CD3ε抗体和PMA处理均可增强fas启动子的活性,促进报告基因的表达,其虫荧光素酶活性分别是未经处理的pXP2-fasup转染细胞的1.7倍和3.3倍,但二者没有协同作用.PKC的抑制剂staurosporine和PTK的抑制剂herbimycinA可抑制PMA诱导的fas基因转录,使虫荧光素酶基因的表达降至未用PMA处理的水平.但PTK的另一种抑制剂genistein可与PMA发挥协同作用,上调fas基因的转录,使虫荧光素酶活性增加到5倍.这些结果为阐明CD3ε及PMA介导T淋巴细胞激活和凋亡的分子机制 相似文献
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本文报告利用pWR590质粒为载体,构建了含1ac启动子、β-半乳糖苷酶(1—590)基因、Xa因子的四肽识别位点和HBV preS1、preS2编码序列的表达质粒,并成功地在大肠杆菌中获得稳定表达。融合蛋白经Xa因子消化和高效液相层析,得到了preS1(1—91)纯肽。此肽特异性地与人肝细胞质膜结合,从而为肝细胞上存在preS1受体提供了直接的实验依据,也为分离和鉴定肝细胞上preS1受体打下了良好的基础。 相似文献
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蛋白激酶B的研究进展 总被引:3,自引:1,他引:2
蛋白激酶B(PKB)发现于1991年,因其激酶活性区的氨基酸组成与蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)高度同源而得名。初步研究表明,PKB激酶活性的调节与细胞的生命活动密切相关,如PKB参与某些生长因子或淋巴因子诱导的靶细胞应答,影响胞内糖类的转运、糖原的合成及蛋白质的合成,抑制细胞凋亡等。PKB是机体维持正常生命活动的一个重要调节子。1.PKB的结构与分类1991年三个不同的研究小组同时发现PKB蛋白,并证明其激酶活性区的氨基酸组成与PKCε和PKA的同源性分别为73%和68%,因此将其命名为PKB或RACPK(re… 相似文献
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本文用酶标免疫电镜技术对猪外周淋巴细胞E受体在细胞表面的分布以及在细胞内合成代谢的状况进行了研究。实验结果表明:E受体在淋巴细胞表面呈点状均匀分布。胰蛋白酶处理使细胞表面E受体消失,经培养后可逐渐自发重建;正常情况下静止的淋巴细胞内E受体的合成水平很低;小牛胸腺肽制剂处理可以促进E受体在细胞质内的合成,加速其表达过程;更生霉素及嘌呤霉素等RNA合成抑制剂可抑制E受体的再生;以ConA活化的猪淋巴细胞内可见E受体活跃的合成;E受体合成部位是在粗面内质网上及散在的核蛋白体上。 相似文献
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郑德先 《中国生物工程杂志》1996,16(5):40-50
免疫系统中编程性细胞死亡的分子机制郑德先(中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室,血液学研究所实验血液学国家重点实验室)免疫细胞从其前体细胞发育成熟到抗原应答反应过程中,始终伴随着编程性细胞死亡(programmedcelldeath,PCD)或细胞凋亡(apoptosis)。没有免疫细胞的编程性死亡,机体就没有健全的免疫防御体系。 相似文献
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人胎盘c-fms胞外功能区基因片段的扩增 总被引:1,自引:0,他引:1
人胎盘c┐fms胞外功能区基因片段的扩增*王昕蔡辉国陈佩珍吴克复郑德先(中国医学科学院,中国协和医科大学血液学研究所,天津300020)Amplificationofc┐fmsExtracelularDomainfromHumanPlacentaWa... 相似文献
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研究了PKCα、β1和β2亚型对多药耐药基因mdr1转录的调控作用.以mdr1基因上游调控序列驱动的虫荧光素酶报告基因表达载体和PKC基因表达载体共同转染COS7细胞后,测定虫荧光素酶报告基因表达水平.实验结果表明,PKCα、β1及β2对mdr1基因的转录有下调作用,PMA可进一步加强这一作用;在此转染体系中,PKC抑制剂staurosporine也可抑制mdr1基因的转录,但在只转染mdrluc的细胞中,staurosporine对mdr1的转录则没有影响,提示staurosporine仅在PKC过量表达的细胞中抑制mdr1基因的转录. 相似文献
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肿瘤靶向药物是指与肿瘤发生、生长、转移和凋亡密切相关的分子或基因为靶点而设计的药物,应用肿瘤靶向药物治疗肿瘤是肿瘤治疗的首选策略。 相似文献
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在磷酸化蛋白质组学研究中,根据是否需要对待富集样品进行甲酯化处理,可将固化金属离子亲和层析(IMAC)方法分为两类,即需要甲酯化处理的IMAC方法(ME—IMAC)和不需要甲酯化处理的IMAC方法(Non—ME—IMAC)。要实现对磷酸化多肽的有效富集和鉴定,就必须对富集方法进行选择和优化。利用基质辅助激光解析离子化串联飞行时间质谱(MALDI—TOF—MS)对两种方法富集的磷酸化多肽进行了比较研究。结果表明,ME—IMAC方法容易发生样品丢失,质谱结果的分析也比较复杂,而Non—ME—IMAC方法则不仅操作简单而且富集效果理想。另外,优化了Non—ME—IMAC方法的实验条件,指出最佳的结合溶液是8%ACN/0.3%TFA,最佳的洗脱溶液是0.1mol/LEDTA(pH值8.0),从而建立了一套完整而简单有效的磷酸化多肽富集方法。 相似文献