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由SDS及梯度胶电泳测得油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)多角体蛋白天然状态及亚基分子量分别为363kD与31.5kD,从而推断此蛋白为十二聚体,亚基间无二硫键作用.BsNPV多角体蛋白的远紫外圆二色谱显示,它的二级结构含有31.7%的α螺旋,23.8%的β折叠及44.5%的无规卷曲,与二级结构预测结果相符.通过荧光光谱实验推知,BsNPV多角体蛋白的表面疏水性弱,其色氨酸残基位于蛋白疏水核内部. 相似文献
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7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶晶体结构研究 总被引:1,自引:0,他引:1
7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶(SDXyI).19nm分辨率晶体结构已经解出.晶体空间群为I222,晶胞参数为a=9.884nm,b=9.393nm,c=8.798nm.参考锈赤链霉菌木糖异构酶(SRXyI)的晶体结构模型,通过分析晶体密堆积关系和晶体学R因子搜索,获得了SDXyI晶体结构的初始模型.采用PROLSQ软件包使用0.60~0.19nm分辨率衍射数据对模型进行了修正.最终模型的晶体学R因子为0.177,键长键角均方根偏差分别为0.0019nm和2.1°.与SRXyI相比较,SDXyI整体构象未发生明显变化,活性中心构象有显著差异. 相似文献
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从皖南尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus)毒液中经DEAE-Sepharose和SephacrylS-200两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量出血毒素(简称AaHⅣ).经SDS-PAGE和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为44kD,等电点为pH5.0.从500mg粗毒中可获得20mgAaHⅣ纯品.AaHⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量(MHD)为0.4μg. 相似文献
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以双引物法对葡萄糖异构酶(GI)基因进行定点突变,将突变体基因于大肠杆菌中表达,获得了GI双点突变体GIK253RA198C.研究K253R和A198C双点突变对GI的结构和性质的作用,结果表明GIK253RA198C的热稳定性明显下降,最适反应温度降低5℃.文章从结构和机制上解释了为何同是K253R突变,对SM33 GI和密苏里游动放线菌GI的热稳定性产生不同的影响,认为这是由于Lys253在两种GI结构的位置上存在微小差异,从而使引入的Arg对亚基间的相互作用产生了相反效应所引起. 相似文献
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The crystal structures of Streptomyces diastaticus No. 7 strain M1033 xylose isomerase (SDXyI) have been analysed and refined at 0.19nm. The crystal space group is I222, with unit cell dimensions of a=9.884 ran, b=9.393nm and c=8.798nm. Based on the coordinates of the Streptomyces rubiginosus xylose isomerase (SRXyI), the initial model of SDXyl was built up by the dose packing analysing and R-factor searching and refined by PROLSQ to a final R-factor of 0.177 with the rms deviations of bond lengths and bond angles of 0.001 9nm and 2.1°, respectively. No significant global conformation change existed between SRXyI and SDXyI except the local conformation in the active site. 相似文献
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单点突变葡萄糖异构酶(GIG138P)基因在变铅青链霉菌中的高效表达及其稳定性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过三步亚克隆 ,将单点突变葡萄糖异构酶 ( GIG1 38P)基因及其调控序列插入链霉菌质粒p IJ40 83,构建重组表达质粒 p IJ40 83- GI1 .用重组质粒转化变铅青链霉菌 TK54原生质体 ,经硫链丝菌素抗性 ( Th R)筛选 ,获得重组菌株 TK54/p IJ40 83- GI1 .酶活力测定和 SDS- PAGE分析表明 ,GIG1 38P基因在变铅青链霉菌中得到高效表达 ,GI1粗酶液比活力为 1 5U/mg,GI1表达量约占菌体可溶性蛋白的 2 5% .同时也研究了重组质粒的遗传稳定性 .重组菌株在无选择压力条件下经液体连续传代培养 ,GI1比活力和 GI1表达量在 2 0 0 h传代时间中呈平缓下降趋势 相似文献
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7号淀粉酶链霉菌M1033木糖异构酶基因的启动子活性检测、转录起始点的确定 总被引:1,自引:0,他引:1
分别从重组质粒pUB1及其M(13)亚克隆S1中将7号淀粉酶链霉菌(StreptomycesdiastaticusNo.7)M1033(以下简称S.di.M1033)木糖异构酶基因的-192-+581bp片段克隆入链霉菌启动子探测质粒pIJ4083中,转化变铅青链霉菌(S.lividans)TK24。通过对其邻苯二酚加双氧酶活性的检测表明,该片段具有启动子活性。应用M13亚克隆S1和合成引物P6延伸制备放射性标记的单链DNA探针;通过S.di.M1033的总RNA的S1核酸酶保护实验,确定了其转录的起始位点,并由此探讨了与木糖异构酶基因表达有关的一些因素。 相似文献
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为了发展优良的链霉菌宿主系统 ,以带有硫链丝菌素抗性的同源重组葡萄糖异构酶 (GI)缺陷型菌株M10 33XW78,M10 33XW194为出发菌株 ,利用摇瓶、影印和负筛的方法 ,获得一株既无GI活性又对硫链丝菌素敏感的回复菌株 ,命名为淀粉酶链霉菌M5 3.通过染色体PCR检测、酶切图谱鉴定、序列分析等方法 ,确认M5 3含有和M10 33一致的 1 2kb葡萄糖异构酶基因 ,但在结构基因345~ 10 95bp片段内有 17个碱基发生突变 .这说明在染色体内自发同源重组过程中 ,有低频率的突变位点引入 .酶活力测定和SDS PAGE分析表明 ,该突变的GI基因不表达 4 2 5KD葡萄糖异构酶 ,这为M5 3菌株发展成为优良的链霉菌宿主提供了足够的表达空间 .一系列的转化实验也证明了M5 3菌株很可能是一种新型链霉菌克隆受体 相似文献
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链霉菌M1033染色体DNA经BamH Ⅰ酶解后电泳,Southern转移。根据自测的链霉菌M1033 D-木糖异构酶氨基酸序列设计合成寡聚核苷酸探针x-2、x-3,以x-2、x-3及Am-pullariella sp3876 D-木糖异构酶基因(1.17kb)为探针进行杂交,确定与上述探针杂交最强处在15kb左右。从胶上分离出g-20kb大小的片段,克隆到EMBL 3载体中,经杂交筛选后,得到0.6%的阳性噬斑,其插人大小为13kh。将插入DNA的saIⅠ酶解片段(2.5kb)进一步亚克隆于pucl8,得到重组质粒puB l,经酶解图谱、部分序列分析和互补实验确定puBl含有完整的M1033 D-木糖异构酶基因 相似文献
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