鼠白细胞介素12（mIL—12）在昆虫细胞中的表达

Since human IL-12 is species-specific in its functions and elicits little biological responses from mouse lymphocytes, it is necessary to express recombinant murine IL-12 for the usage in studying the effects of this cytokine in various rodent models. Thereby, we can investigate the role of IL-12 in immune response in vivo and evaluate its potential clinical utility. Thus, we firstly constructed two expression vectors, pVL1393-mp40 and pVL1393-mp35. They were used to co-transfect the insect cells(Sf9) separately with linearized polyhedrosis virus genomic DNA. Two kinds of recombinant viruses AcNPV-mp40 and AcNPV-mp35 were visually screened out, and mp40 and mp35 were co-expressed in the insect cells co-infected by AcNPV-mp40 and AcNPV-mp35. The results of real-time Biomolecular Interaction Analysis (BIA) and Northern blot demonstrated that the recombinant mIL-12 was expressed successfully in the insect cells. The molecular weights of recombinant mp40 and mp35 were 40 KDa and 22 KDa on SDS-PAGE under reducing conditions, respectively. The apparent molecular weight of recombinant mIL-12 is 80 KDa under non-reducing conditions of Western blot. Biological activity of the recombinant product was detected in conditional medium using antibody-capture bioassay. The expression level of recombinant mIL-12 was about 10-15 micrograms/10(6) cells, as compared with the calibration curve of mIL-12.     

人绒毛膜促性腺激素β－亚基在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

本文以哺乳动物细胞表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ为运载体，构建了受控于ＳＶ４０早期启动子β－ｈＣＧ基因的表达载体，转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞后，挑选ＣＨＯ（ｄｈｆｒ－）细胞，结果表明β－ｈＣＧ不仅在细胞中表达，还分泌到培养液中。通过氨甲喋呤（ＭＴＸ）加压后，表达量逐渐提高，０．１μｍｏｌ／ＬＭＴＸ条件下培养液中β－ｈＣＧ最高表达量可达到１．５μｇ／１０６细胞·２４小时。经亲和层析获得纯的重组β－ｈＣＧ，其分子量与天然制品一致，放射免疫测定的免疫原性为天然制品的８４．９％。     

IFN-g促进LPS对小鼠抑制性巨噬细胞IL-12 p40/p35的表达

IL-12是由p35和p40两个亚基组成的可诱导细胞因子, 其重要的生物学功能是促进Th1细胞分化, 调节细胞免疫的抗病毒和抗肿瘤作用. 用半定量RT-PCR结合银染对LPS, LPS/IFN-γ作用下小鼠抑制性巨噬细胞IL-12 p40 和 p35两个基因mRNA的表达及NF-κB信号与表达的相互关系进行了研究, 发现IFN-γ不仅能显著促进LPS诱导的IL-12 p40 mRNA 的表达, 同样能明显上调IL-12 p35 mRNA水平, 两者表达水平大致相当, 而且IFN-γ 相应地促进了IL-12 p70的分泌. 蛋白酶小体抑制剂PSI显著抑制了LPS, IFN-γ , LPS/IFN-γ 诱导的IL-12 p40, p35mRNA的表达, 并对LPS, LPS/IFN-γ 诱导的Ik Ba 降解也有明显的抑制效应. LPS单独处理可增强NF-κB与小鼠p40基因启动子-146 ～-112区DNA特异序列的结合, 但IFN-gγ并不能加强LPS诱导的NF-k B与DNA的结合, 也不能促进LPS诱导的Ik Ba 降解. 以上结果提示: (ⅰ) IFN-/LPS共同作用, 可促使IL-12 p40和p35 两基因mRNA高水平表达并相互协调. 这种高表达和IL-12 p70的分泌增加相一致. (ⅱ) NF-B是LPS, IFN-g /LPS诱导的IL-12 mRNA表达的基本信号通路. (ⅲ) 蛋白酶小体抑制剂PSI通过抑制Ik Ba 降解, 进而抑制LPS和LPS/IFN-g 诱导的IL-12 p40与p35 mRNA的表达. (ⅳ) IFN-γ 通过非NF-κB信号途径增强LPS诱导的p35/p40 mRNA表达.     

人绒毛膜促性腺激素β亚基(β-hCG)cDNA在昆虫细胞中的表达及其产物对离体小鼠淋巴细胞的影响(简报)

人绒毛膜促性腺激素(human chorionicgonadotroPin,简称hCG)是由胎盘滋养层细胞合成的一种糖蛋白激素,在早期妊娠中具有重要作用。hCG由α、β两个亚基组成,α     

大鼠卵巢促黄体激素受体膜外微区(1-341)在昆虫细胞中的表达及其性质的初步研究

促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)N端膜外微区341个氨基酸残基(简称R341)与激素有很高的亲和力。本文报道编码R341的cDNA在昆虫细胞中的表达及其产物性质的初步研究。SDS-PAGE银染和免疫印迹结果显示,表达产物呈两条带:分子量为38.5Kd的主带和分子量为40.0Kd的次带。配基结合免疫印迹和~(125)IhCG结合印迹分析表明,表达产物R341具有与配基专一性结合的生物活力。竞争性配基结合曲线和Scatchard分析结果显示,重组受体R341和配基hCG有较高的亲和力,与hCG反应的Kd为5.68×10~(-10)mol/L。     

从噬菌体文库中筛选与表皮生长因子结合的多肽

与许多疾病相关的血管生成作用是由一些血管生成因子介导的 ,其中就包括表皮生长因子 .在肿瘤生长、关节炎等疾病中 ,表皮生长因子参与了其中的血管生成作用 ,拮抗表皮生长因子介导的血管生成就有可能对与其相关的疾病起到治疗作用 ,因此 ,表皮生长因子的拮抗剂可能具有重要的临床价值 .拮抗表皮生长因子的作用可以通过许多途径 ,其中之一就是找到能与表皮生长因子结合并能干预其与受体结合的分子 ,因而表皮生长因子可作为药物靶分子 .从噬菌体文库中筛选药物靶分子的拮抗剂和激动剂已被证明是一种有效的方法 .以表皮生长因子作为药物靶分子 ,从多肽噬菌体文库中筛选与表皮生长因子结合的噬菌体多肽 ,这些潜在的表皮生长因子拮抗剂先导分子经过优化可能具有重要的临床价值 .     

鼠白细胞介素12(mIL-12)在昆虫细胞中的表达

人IL-12的作用具有种属特异性,无法对鼠淋巴细胞起作用。因此,为了在啮齿动物模型上研究该细胞因子的免疫学效应,并评价其临床应用前景,就很有必要获得重组鼠IL-12(mIL-12)。为此,我们首先构建了两个表达载体pVL1393-mp40和pVL1393-mp35,并分别与线性化多角体病毒基因组DNA共转染昆虫细胞株Sf9,用目视法筛选出重组病毒AcNPV-mp40和AcNPV-mp35,然后共感染昆虫细胞,使mp40和mp35在昆虫细胞中共表达。经实时BIA和Northern blot分析,表明重组mIL-12在昆虫细胞中表达成功。经还原条件下的SDS-PAGE分析,重组mp40和mp35的分子量分别为40KDa和22KDa。非还原条件下的Western blot结果显示,重组mIL-12的表观分子量为80KDa。用抗体捕获法在条件培液中测到了重组产物的生物活性,经与参照标准相比照,重组mIL-12的表达量约为10-15μg/10~6细胞。     

烫伤对小鼠腹腔巨噬细胞LPS/Toll信号通路的影响—— c-fos基因表达、AP-1和NF-κB的DNA结合活性及IL-12 p40基因表达的抑制

烫伤能够引起机体免疫系统功能的抑制, 其机制目前还不很清楚. 巨噬细胞在机体防御系统的调节中居重要地位, 因此研究烫伤对巨噬细胞的效应就显得非常必要. 转录因子AP-1和NF-κB是Toll样受体介导的信号通路中的重要成员, 对于多种参与免疫反应的基因尤其是细胞因子基因的诱导表达必不可少[1]. 应用小鼠烫伤模型, 研究了烫伤对于上述两个重要转录因子的效应. 发现烫伤后, 小鼠腹腔巨噬细胞中LPS介导的c-fos基因表达, AP-1和NF-κB的DNA结合活性及IL-12 p40基因表达均被显著地抑制. 这一结果提示, 巨噬细胞Toll信号通路的变化与烫伤引起的机体免疫功能紊乱密切相关.