几种因素对山茶属植物RAPD分析的DNA扩增的影响

多种因素会影响ＲＡＰＤ扩增,本研究试验了引物、Ｍｇ２＋和ｄＮＴＰ的浓度以及Ｔａｑ酶来源对山茶属植物进行ＲＡＰＤ分析的ＤＮＡ扩增的影响。结果表明这些因素对扩增结果都会产生影响,通过比较分析,得到了一个对于山茶属植物进行ＲＡＰＤ分析较理想的扩增条件。     

RAPD影响因素的研究及实验条件的优化进

针对叶种红松和阔叶树种蒙古栎为材料,研究了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）的影响因素,优化了各种实验条件。ＲＡＰＤ对模板浓度的适应范围比较广,从１０－８０ｎｇ／反应均可得到一致的效果。     

RAPD应用于蕈菌研究中的条件优化探讨

在进行鹅膏菌属蕈菌遗传多样性的ＲＡＰＤ分析时,对ＲＡＰＤ分析过程中的ＤＮＡ提取方法、ＤＮＡ纯度、模板ＤＮＡ和ｄＮＴＰ浓度、循环次数、ＤＮＡ不同来源等影响因素进行了大量的实验探索,结果表明：ＤＮＡ不同提取方法具有相同的扩增产物,ＤＮＡ模板中的ＲＮＡ对扩增产物无影响,模板浓度在一个相当大的范围内（５０～４００μｇ）不影响扩增结果．ｄＮＴＰ浓度达０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ时无带谱出现,引物浓度达１μｍｏｌ／Ｌ时出现非特异性带谱,从菌丝体和子实体中提取的ＤＮＡ可获得一致的扩增产物．扩增循环４０～４５周期条件下扩增效果较好,本实验证明了ＲＡＰＤ产物具有很好的重复性,建立了适合蕈菌ＲＡＰＤ分析的ＰＣＲ程序及条件,为ＲＡＰＤ应用于蕈菌的遗传研究打下了良好的基础．     

随机扩增多态DNA影响因素的研究

随机拉多态ＤＮＡ分析受诸多因素的影响,我们发现不同厂家制造的ＰＣＲ扩增仪,不同厂家出品的ＴａｑＤＮＡ聚合酶和ＰＣＲ缓冲液,ＲＡＰＤ反应体系中的引物浓度,Ｍｇ＾２＋浓度,ｄＮＴＰ浓度,ＢＳＡ和明胶,以及模板ＤＮＡ的量等均可能对ＲＡＰＤ结果有不同程度的影响。     

应用引物延预扩增提高微量DNA拷贝数

采用引物延伸预扩增方法,可普遍提高微量模板ＤＮＡ的考贝数,便于进行基因分析时克服标本时少、来源困难的制约,采用常规扩增、检测２４８ｂｐ的ＤＹＺ１片段体系为观察对象,其最小模板量需１．５ｎｇ／２０μｌ体系。以１５个碱基随机寡核苷酸为引物,对最小模板量进行预扩增,再以其产和１／１０为模板,特异扩增ＤＹＺ１片段。进行了相对定量分析,判断源模板ＤＮＡ拷贝数增加的程度。结果１．５ｎｇ男性ＤＮＡ,经随机扩增后     

鹅膏菌属真菌RAPD分析及亲缘关系的研究

本文对采自湖南莽山的２６种鹅膏菌属（Ａｍａｎｉｔａ）真菌进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析,４０个随机引物中筛选出扩增效果较好的６个引物,每个引物能产生１～１０条ＤＮＡ条带,获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态性ＯＰＧ１５、ＯＰＨ０４两个引物扩增的ＲＡＰＤ谱带能将２６种鹅膏菌完全区分开来,通过６个引物的ＲＡＰＤ分析获得的平均相似性系数表明种与种之间的相关系数在２０－６０％之间,平均链锁聚类分析     

从普通野生稻硅胶干燥的小量叶片中制备DNA用于RAPD分析和总DNA库的建立(英文)

普通野生稻（ Ｏｒｙｚａｒｕｆｉｐｏｇｏｎ Ｇｒｉｆｆ．）的基因资源对水稻的育种起着至关重要的作用。报道了从其硅胶干燥的小量叶片中制备ＤＮＡ的方法。用此方法制备的ＤＮＡ分子量大（４０～４５ ｋｂ） ,产率也较高（５０ ～２００ μｇ／ｇ） ,且成功地进行了ＲＡＰＤ扩增。用制备的４４ 个居群,１１６８ 个个体的总ＤＮＡ 建立了中国普通野生稻的总ＤＮＡ 库作长期冷冻保存,可用于基于ＰＣＲ 的ＤＮＡ水平上的各种目的的研究。根据实验结果,从在室温下贮存１ 周、３ 个月、６ 个月、１ 年的硅胶干燥的叶片中提取的ＤＮＡ 用于ＲＡＰＤ扩增所得的扩增产物没有差异;模板ＤＮＡ浓度在３ ．１ ～５０ ｎｇ 的范围内均得到很好的ＲＡＰＤ扩增结果。这说明了从硅胶干燥的叶片中提取的普通野生稻的ＤＮＡ 用于ＲＡＰＤ扩增的产物很稳定,将其用于群体遗传分析具有很好的可比性和可靠性。同时也讨论了模板ＤＮＡ的纯度和浓度对ＲＡＰＤ扩增的影响     

苍术DNA分离及RAPD遗传多样性分析

用新鲜的或－７５℃保存的苍术〔Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓｌａｎｃｅａ（Ｔｈｕｎｂ．）ＤＣ．〕叶片提取ＤＮＡ,产量分别为４０ｎｇ／ｍｇ鲜重和１０ｎｇ／ｍｇ鲜重左右,分离出的ＤＮＡ的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０值均大于１９,可用于ＲＡＰＤ试验。用８种引物对苍术４个居群的ＤＮＡ进行扩增,单个１０碱基的引物扩增出的ＲＡＰＤ标记在１～１５之间,多态位点百分率南苍术为４７５０％,北苍术为４５４０％,遗传相似度值南苍术为０８５,北苍术为０８７。结果表明,南苍术的遗传多样性略高于北苍术。     

白鲢和镛鱼的扩增多态DNA分析

根据鱼类外周血细胞都有核的特点,采用从冷冻和低渗双重处理分离的细胞核的取基因组ＤＮＡ。以此法获得的白鲢和镛鱼的基因组ＤＮＡ为模板,和Ｏｐｅｒｏｎ公司生产的ＯＰＮ和ＯＰＭ两个组共４０个随机引物,对这两种鱼进行了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析;确定了对这两种鱼基因组相关区域可进行随机ＰＣＲ扩增的有效引物,特别是哪些可产生种群内或群体的ＲＡＰＤ遗传标记即可产生个体特异性和群体特异性ＲＡＰＤ带谱的引物     

红树DNA的十六烷基三甲基溴化铵法提取及其随机扩增多态DNA反应

采用ＣＴＡＢ法提取了耐盐植物红树ＤＮＡ,所得ＤＮＡ样品的紫外吸收Ａ２５８／Ａ２８０比值为１．８９,纯度能符合限制性内切酶酶切、ＰＣＲ反应以及ＤＮＡ重组克隆等分子生物学操作的要求．方法简便,容易掌握,较普通的酚－氯仿法有明显的优点．还探讨了以ＣＴＡＢ法制备的红树ＤＮＡ为模板进行ＲＡＰＤ反应参数的优化组合     

曼地亚红豆杉RAPD反应体系与程序的优化

以曼地亚红豆杉为研究对象,采用L16(45)正交组合实验和单因素梯度实验对MgCl2、dNTP、随机引物、Taq酶、模板DNA浓度和退火温度、循环次数等影响RAPD扩增的重要因素进行优化,以期建立最优的RAPD反应体系与程序。实验结果表明,各因素最适条件为:25μLPCR反应体系中10×Buffer2.5μL,MgCl21.5mmol/L,dNTP0.2mmol/L,随机引物0.6μmol/L,Taq酶1.0U,模板DNA80ng;退火温度为37℃,循环次数为45次。     

荔枝DNA提取及RAPD扩增条件优化

为应用RAPD技术开展对荔枝种质资源的分析,以S43(GTCGCCGTCA)为引物,通过试验设计,分别研究了退火温度、模板浓度、引物浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶用量对荔枝RAPD-PCR反应的影响。建立并优化了适宜荔枝RAPD分析的扩增体系:20μL的反应体系,30ng的模板DNA度,0.25μmol/LRAPD引物、1.0UTaqDNA聚合酶,0.2μmol/LdNTP为荔枝适宜的RAPD-PCR扩增条件。     

桔梗RAPD反应体系的优化

以通化桔梗为材料,用改进的CTAB法提取桔梗叶片的总DNA,通过对不同镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA含量、引物浓度、DNA聚合酶量条件下的RAPD扩增反应的效果,建立了一个适合桔梗的比较稳定的RAPD反应体系,用于桔梗遗传多样性分析。结果表明,桔梗RAPD扩增反应的最佳体系为:模板DNA20ng,dNTP150μmol/L,引物0.3μmol/L,Mg2+浓度2.0mmol/L,TaqDNA聚合酶1Unit,10×Buff-er2.0μL,PCR反应总体积为20μL。按此优化RAPD条件进行实验,重现性良好。     

西伯利亚蝗基因组DNA提取及RAPD分析条件的优化

以西伯利亚蝗Gomphocerus sibiricus(L.)为研究材料,利用改良的SDS法提取高质量的DNA,分别测试了dNTP浓度、镁离子浓度、TaqDNA聚合酶用量、模板DNA的量等因素对反应结果的影响。通过各因子的组合比较,建立了西伯利亚蝗RAPD优化体系:25μLPCR反应体系,10×buffer2·5μL;dNTP0·24mmol/L;MgCl22·0mmol/L;Taq DNA聚合酶1U;DNA模板45ng;引物30ng。扩增程序为:94℃预变性1min45s、94℃变性30s、35℃退火1min30s、72℃延伸2min,45个循环、72℃延伸10min。结果表明,利用优化的反应条件进行西伯利亚蝗基因组DNA分析,实验有着良好的重复性和稳定性。     

白色念珠菌菌丝相培养条件及RAPD反应体系优化的研究

目的优化门色念珠菌菌丝相培养条件,为白色念珠菌菌丝相的分子生物学研究提供必要条件;建立白色念珠菌菌丝相RAPD的最佳反应体系,应用于其基因组DNA扩增。方法在RPM11640培养基的基础上,通过单因素试验研究了小牛血清用量、培养液pH值、培养温度和转种次数等对白色念珠菌菌丝相形成的影响。采用单因素试验,分别研究了Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、Taq酶的浓度、引物浓度和模板DNA浓度对白色念珠菌菌丝相RAPD反应的影响;应用L16（4^5）正交试验对RAPD反应条件进行了优化。结果白色念珠菌菌丝相诱导的最佳条件为：每100ml培养液中的小牛血清用量为10ml,培养液pH值为7．5,培养温度为36℃,转种次数为12次。白色念珠菌菌丝相的最适RAPD反应体系为：Mg^2＋ 1．25mmol／L、dNTPs 0．4mmol／L、随机引物0．1μmol／L、TaqDNA聚合酶5U／50μl、模板DNA495ng／50μl。结论通过单因素和正交试验,获得了较适白色念珠菌菌丝相培养条件和其基因组RAPD扩增条件。     

濒危植物七子花RAPD条件的优化

以改进SDS法抽提濒危植物七子花嫩叶总DNA,进行随机扩增多态DNA（RAPD）分析,分别测试了镁离子, dNTP,模板DNA含量,引物和DNA聚合酶量对反应结果的影响,通过各因子的组合研究,可知七子花RAPD分析较适宜的扩增条件是：15 μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液（10 mmol/L Tris·HCl pH 9.0, 50 mmol/L KCl, 0.1% Triton X_100）,2.5 mmol/L MgCl2,2U Taq酶（上海华美公司）,10 ng模板DNA,20 pmol引物（上海Sangon公司）;dATP、dCTP 、dGTP 、dTTP 各0.1 mmol/L。     

苏铁属植物RAPD反应体系的优化及部分种类亲缘关系的探索

通过优化苏铁属植物的RAPD反应体系,进而探讨苏铁属部分种类的亲缘关系。结果表明,Mg~(2+)、dNTP、Taq酶及随机引物浓度在RAPD反应中有重要影响,而模板DNA浓度有一个很大的适应范围。适合苏铁属植物RAPD分析的反应体系:20μL反应体系中,含有10 mmol/L Tris-HCl(pH8.3)、50 mmol/L KCl、2.0mmol/L MgCl_2、200μmol/L dNTP、0.3μmol/L随机引物、模板DNA 50ng、Taq酶1.0 U。聚类分析结果基本反应了苏铁属各个种间的亲缘关系,证明了RAPD适用于苏铁属种间亲缘关系分析。RAPD聚类分析结合形态学研究表明:海南苏铁、台湾苏铁、广东苏铁、滇南苏铁和仙湖苏铁之间的亲缘关系较远,支持各自成为独立的种。     

多倍体罗汉果PCR-RFLP参数的优化与应用

以多倍体罗汉果DNA为材料,采用L16(4~5)正交组合试验和单因素梯度试验,研究Mg~(2+)、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA浓度和退火温度、循环次数等对PCR扩增结果以及内切酶量、酶切时间对酶切反应的影响。结果表明,多倍体罗汉果RFLP最优PCR反应体系和扩增参数为:在25μL扩增反应体系中,10×Buffer 2.5μL,MgCl_2 1.5 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,引物0.1μmol/L,Taq DNA聚合酶2.0 U,模板DNA 60 ng;退火温度为56℃,循环次数为35次。酶切反应体系:内切酶10×Buffer 2.0μL,内切酶5.0U,PCR产物15μL,超纯水补至20μL;酶切时间2 h。     

齿裂菌属和皮下盘菌属ISSR-PCR最佳反应条件的研究

在利用ISSR技术分析齿裂菌属和皮下盘菌属遗传多样性的研究中,为获得条带清晰、重复性好的ISSR扩增结果,对影响ISSR-PCR的条件进行了筛选,确定了此类菌物ISSR-PCR反应的最适宜条件:在15μLPCR反应体系中,10倍Taq酶缓冲液1.5μL,DNA模板8ng/μL,MgCl22.5mmol/L,dNTP0.15mmol/L,引物浓度0.4μmol/L,Taq酶1.00U,ddH2O9.0μL。最佳退火温度因不同的引物而定,最佳循环次数为35次。