白色念珠菌菌丝相培养条件及RAPD反应体系优化的研究

目的优化门色念珠菌菌丝相培养条件,为白色念珠菌菌丝相的分子生物学研究提供必要条件;建立白色念珠菌菌丝相RAPD的最佳反应体系,应用于其基因组DNA扩增。方法在RPM11640培养基的基础上,通过单因素试验研究了小牛血清用量、培养液pH值、培养温度和转种次数等对白色念珠菌菌丝相形成的影响。采用单因素试验,分别研究了Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、Taq酶的浓度、引物浓度和模板DNA浓度对白色念珠菌菌丝相RAPD反应的影响;应用L16（4^5）正交试验对RAPD反应条件进行了优化。结果白色念珠菌菌丝相诱导的最佳条件为：每100ml培养液中的小牛血清用量为10ml,培养液pH值为7．5,培养温度为36℃,转种次数为12次。白色念珠菌菌丝相的最适RAPD反应体系为：Mg^2＋ 1．25mmol／L、dNTPs 0．4mmol／L、随机引物0．1μmol／L、TaqDNA聚合酶5U／50μl、模板DNA495ng／50μl。结论通过单因素和正交试验,获得了较适白色念珠菌菌丝相培养条件和其基因组RAPD扩增条件。     

凝集素及其受体相互作用对人红细胞变形性的影响

研究红细胞变形性,无论在理论研究还是临床实践中均具重要意义。它对于认识不同因素如外界物质、细胞膜及骨架、不同病理状态等对细胞结构及功能的影响有一定帮助,也为深入研究不同因素对细胞作用的机制及某些疾病的诊断提供线索和依据。     

伴刀豆蛋白A与巨噬细胞膜上受体结合后对微丝组装的影响

本文采用流式细胞术(FCM)和荧光显微术研究ConA与巨噬细胞膜上受体结合后细胞骨架微丝组装的变化,实验证明ConA与膜受体结合后巨噬细胞内微丝含量增多,并且与ConA的浓度有关。荧光显微镜下还可见细胞面积增大。本实验成功地用流式细胞术定量研究活细胞内细胞骨架的变化情况。     

汉防己多糖的研究

从汉防己根热水提取液中,分离得到两种葡聚糖,高效液相色谱法测得分子量为９．３×１０３和２．０×１０６,经甲基化分析、过碘酸盐氧化、Ｓｍｉｔｈ降解和部分酸水解确定两种多糖可能均以ａ（１→４）连接形成主链,在６－Ｏ上有分枝,两者分枝的类型和数目有所不同。     

一种简便实用的限制性核酸内切酶定量测活方法

对限制性核酸内切酶进行酶学研究,无论 在理论上或应用上都有着重要的意义。准确而 简便的定量测活方法,是进行酶学研究的前提 之一。目前这类酶的定量侧活,多采用同位素 标记法或微光密度扫描法。一”,但前者受到标记 底物来源、同位素半衰期和比强度的影响;后者 需要昂贵的仪器,故它们的使用范围受到一定限制。下面介绍我们建立的一个简便实用的方 法,即对酶切凉脂糖凝胶电泳拍照记录,其负片置测微光度计上进行测定,以此来对酶活力进 行定量。     

限制性核酸内切酶Bsp 63I特性的研究

Ⅱ型限制性核酸内切酶的发现和应用,革命性地推动了分子生物学和遗传工程的发展。不管从酶本身的理论研究或从工具酶的应用研究方面来说,都必须首先确定酶促反应系统的最适条件以及各种因素对酶活性的影响,但是目前关于这类酶促反应条件的确定,多数是根据定性实验和经验,很少是根据定量实验作动力学描述。     

斜链拟青霉多糖活性组分的分离及其清除自由基活性

对斜链拟青霉胞外多糖进行体外清除自由基活性研究。利用醇沉法从斜链拟青霉发酵液中醇沉获得斜链拟青霉胞外多糖,经DEAE-纤维素-52柱层析后得到1个主峰P3和2个小峰P1与P2,对主峰P3进行Sephadex G-100柱层析,表明P3为纯化物; 应用DPPH-酶标法和化学发光法分别对P3进行清除DPPH·、·OH和O-2·能力测试。结果表明：P3对DPPH·、·OH和O-2·均具有明显的清除能力,且与浓度呈量效关系,IC50分别为0.083、0.121和0.214 mg/mL。     

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜上受体作用下膜变形性及细胞吞噬能力变化

本文采用图像分析、相差显微、生物活性测定等技术,研究ConA与巨噬细胞膜受体结合后对细胞行为与功能的影响. ConA与受体结合后巨噬细胞膜面积增大、变形性和吞噬能力增强、细胞产热量增加,表明细胞膜结构与功能发生变化.本实验是将图像分析技术用来研究相对图像采集速度要慢得多的活细胞特性的一次成功尝试.     

限制性核酸内切酶Bsp 631特性的研究

11型限制性核酸内切酶的发现和应用,革 命性地推动了分子生物学和遗传工程的发展。 不管从酶本身的理论研究或从工具酶的应用研 究方面来说,都必须首先确定酶促反应系统的 最适条件以及各种因素对酶活性的影响,但是 目前关于这类酶促反应条件的确定,多数是根 据定性实验和经验,很少是根据定量实验作动 力学描述。 限制性核酸内切酶Bsp 631是我国自己分 离的菌种和发现的新酶Ci]。已测定其识别序列, 并确定它是Pst I酶的异源同功酶。根据我们 对这两个异源同功酶的比较研究,我们认为 Bsp 631比PsA有较多的优点：酶含量较高,且 比较稳定,易于纯化。因此,估计可用Bsp 631 取代PstIo但对Bsp 631酶性质的研究,国内 外尚未见报道。因此我们采用本实验室自己纯 化的Bsp 631酶,用定量测活的方法,对其最适 反应条件,二价阳离子及一价阳离子对其活性 的影响,以及酶的Km值等进行了初步的研究, 从而为今后对该酶的动力学研究结构分析及其 作为工具酶的应用提供了必要的资料。     

锌酵母中酵母甘露多糖组分的特征和结构

本文研究从锌酵母中分离出的酵母甘露多糖ＸＰ的特征和结构。ＸＰ经全水解和＾１３ＣＮＭＲ谱显示除甘露糖基外,还有少量Ｌ－鼠李糖基和甲氧基。甲基化分析、过碘酸盐氧化、Ｓｍｉｔｈ降解、乙酰解和部分酸水解显示ＸＰ的主链是１→６连接的甘露糖,侧链是１→２连接的甘露糖。＾１Ｈ及＾１３Ｃ ＮＭＲ谱表明所有糖苷键均为α型,结合元素分析ＸＰ基本是酵母甘露多糖和蛋白质以及锌的络合物。