RAPD应用于遗传多样性和系统学研究中的问题

在研究银杉（Ｃａｔｈａｙａ ａｒｇｙｒｏｐｈｙｌｌａ）的遗传多样性时,对ＲＡＰＤ 产物的影响因素进行了大量的实验探索,结果表明：逐级纯化的ＤＮＡ 模板的ＲＡＰＤ结果一致, 因而模板制备过程中的很多纯化步骤是不必要的; ＲＮＡ 对扩增产物无影响; 模板浓度在一个相当大的范围内不影响扩增结果; 从干叶和鲜叶中提取的ＤＮＡ 可获得一致的扩增产物; 从而证明ＲＡＰＤ 产物具有很好的重复性。进而讨论了ＲＡＰＤ产物分析及数据分析中的一些问题。通过对升麻属（Ｃｉｍ ｉｃｉｆｕｇａ） ５ 种、类叶升麻（Ａｃｔａｅａ ａｓｉａｔｉｃａ）及松潘乌头（Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｕｎｇｐａｎｅｎｓｅ）的ＲＡＰＤ 结果分析,认为ＲＡＰＤ 方法可用于种间乃至近缘属间的系统学研究, 但有一定的局限性     

扩增条件对茶类植物RAPD带的影响

采用梯度分析的方法试验了模板ＤＮＡ、引物、镁离子、ｄＮＴＰ和Ｔａｑ酶的浓度对茶类植物进行ＲＡＰＤ分析中ＤＮＡ扩增结果的影响。实验表明这些条件的变化对扩增出来的ＲＡＰＤ带的数目和强弱会产生影响。经过比较分析,筛选出对于茶类植物进行ＲＡＰＤ分析较理想的扩增条件：２．０ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２,２００ｕｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ,１５ｎｇ引物／２０ｕｌ反应体积,４ｎｇ模板ＤＮＡ／ｕｌ反应体积,１ＵＴａｑ酶／２０ｕｌ反应体积。     

RAPD应用于蕈菌研究中的条件优化探讨

在进行鹅膏菌属蕈菌遗传多样性的ＲＡＰＤ分析时,对ＲＡＰＤ分析过程中的ＤＮＡ提取方法、ＤＮＡ纯度、模板ＤＮＡ和ｄＮＴＰ浓度、循环次数、ＤＮＡ不同来源等影响因素进行了大量的实验探索,结果表明：ＤＮＡ不同提取方法具有相同的扩增产物,ＤＮＡ模板中的ＲＮＡ对扩增产物无影响,模板浓度在一个相当大的范围内（５０～４００μｇ）不影响扩增结果．ｄＮＴＰ浓度达０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ时无带谱出现,引物浓度达１μｍｏｌ／Ｌ时出现非特异性带谱,从菌丝体和子实体中提取的ＤＮＡ可获得一致的扩增产物．扩增循环４０～４５周期条件下扩增效果较好,本实验证明了ＲＡＰＤ产物具有很好的重复性,建立了适合蕈菌ＲＡＰＤ分析的ＰＣＲ程序及条件,为ＲＡＰＤ应用于蕈菌的遗传研究打下了良好的基础．     

小麦耐盐突变体的RAPD分析

以冀麦２４和其耐盐的一代８９０１－１７为材料,用ＲＡＰＤ技术对其进行比较分析研究。在的用的２１５个引物中有５１个扩增出多态性,既有量的差异又有质的差异,初步断定此５１个引物扩增出的多态性与突变有关,为进一步用ＢＳＡ方法细筛出与耐盐突变体紧密连锁的ＲＡＰＤ分子标记下打下基础,同时,还分析了影响ＲＡＰＤ扩增结果的因素。     

鹅膏菌属真菌RAPD分析及亲缘关系的研究

本文对采自湖南莽山的２６种鹅膏菌属（Ａｍａｎｉｔａ）真菌进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析,４０个随机引物中筛选出扩增效果较好的６个引物,每个引物能产生１～１０条ＤＮＡ条带,获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态性ＯＰＧ１５、ＯＰＨ０４两个引物扩增的ＲＡＰＤ谱带能将２６种鹅膏菌完全区分开来,通过６个引物的ＲＡＰＤ分析获得的平均相似性系数表明种与种之间的相关系数在２０－６０％之间,平均链锁聚类分析     

种质资源鉴定的一种分子遗传技术标准：随机扩增多态性DNA（RAPD）

ＲＡＰＤ（随机扩增多态性ＤＮＡ）变异越来越多地被用于种质样品的鉴定。由于在某些条件下,ＲＡＰＤ结果重性较差,限制这一技术的应用。本文综合了一些文献中引起片段变异的主要原因,分析了减少这些不需要变异的方法。由此提出了一个含有全部描述符的项目表,它包括ＲＡＰＤ必不可少的条件和再现植物材料ＲＡＰＤ结构的必须核对的程序。此标准程序和描述形式有促进类似材料在不同实验室所做结果进行比较,而且允许ＲＡＰＤ结果作     

鹅膏菌属真菌RAPD分析及亲缘关系的研究

本文对采自湖南莽山的２６种鹅膏菌属（Ａｍａｎｉｔａ）真菌进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析,４０个随机引物中筛选出扩增效果较好的６个引物,每个引物能产生１～１０条ＤＮＡ条带,获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态性ＯＰＧ１５、ＯＰＨ０４两个引物扩增的ＲＡＰＤ谱带能将２６种鹅膏菌完全区分开来,通过６个引物的ＲＡＰＤ分析获得的平均相似性系数表明种与种之间的相关系数在２０－６０％之间,平均链锁聚类分析可将２６种鹅膏菌分为二大类,且一些具菌环和苞状菌托的种类聚在一起,与形态分类基本相吻合。     

RAPD影响因素的研究及实验条件的优化进

针对叶种红松和阔叶树种蒙古栎为材料,研究了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）的影响因素,优化了各种实验条件。ＲＡＰＤ对模板浓度的适应范围比较广,从１０－８０ｎｇ／反应均可得到一致的效果。     

中国蝮属蛇类的RAPD分析

用ＲＡＰＤ技术研究了我国５种蝮属蛇类（中介蝮，蛇岛蝮，短尾蝮，高原蝮，乌苏里蝮）的系统发生关系，研究中使用了３３个蝮蛇标本和２个草原蝰标本，用１１个引物对样品分别作ＲＡＰＤ扩增，获得７２个扩增片段。     

RAPD分析氮离子注入甜菊种子后的幼苗基因组DNA变异

应用ＲＡＰＤ 技术检测经低能氮离子注入甜菊纯系种子引起的幼苗基因组ＤＮＡ 变异。筛选出ＯＰＪ系列中的１５ 种引物对实验及对照基因组ＤＮＡ 进行了ＰＣＲ 扩增,共获扩增片段１０３ 条,分子量在０．３ － ３ｋｂ 之间,其中５ 种引物ＯＰＪ－ １ ,７ ,９,１１ ,１２ 扩增出差异片段１２ 条。结果表明,低能氮离子注入甜菊种子可引起体内基因组ＤＮＡ 发生突变;ＲＡＰＤ 技术是检测基因组ＤＮＡ 发生诱变的一种简便、有效方法。本文同时探讨了离子强度和Ｔａｇ ＤＮＡ 聚合酶用量对甜菊ＲＡＰＤ 分析结果的影响,以及氮离子注入诱变效应的可能机制。     

应用RAPD技术对不同基因组组合生物型遗传多态性的研究(英文)

利用ＲＡＰＤ技术对不同基因组合的鱼类进行了基因组指纹图谱构建,在ＤＮＡ水平上对基因组成分进行了分析,探讨了其遗传多态性。ＲＡＰＤ结果发现,在２６个随机引物扩增的产物中,平均每个个体观察到约１４２个ＲＡＰＤ标记,单个引物获得的标记平均为５．４。其中４个引物扩增的图谱可将不同的生物型区分开：Ｓ－２６引物的扩增图谱（Ｆｉｇ．１）可将红鲫（ＲＡ）与其它组合区分开,还可将鲤鲫杂种一倍体（ＣＡ）与鲫鲤杂种三倍体（ＣＡＡ）和人工复合三倍体鲤（ＣＣＡ）区分开;Ｓ－８引物（Ｆｉｇ．２）可区分开红鲤（ＲＣ）和镜鲤（ＭＣ）;Ｓ－４５引物（Ｆｉｇ．３）可区分开ＲＣ和ＣＡ;Ｓ－２２引物则可区分开ＣＡＡ和ＣＣＡ。六种生物型均存在基因组特异性的图谱即各自独特的“诊断性”图谱,作者由此建立了详细的分子标记检索表（Ｔａｂｌｅ１）。通过对ＲＡＰＤ图谱的量化分析,利用ＵＰＧＭＡ构建了不同生物型的遗传关系树图;反映了鲤鲫及各种组合生物型之间的遗传相似关系：ＲＣ和ＭＣ属同一种系,聚为一族;ＣＡＡ和ＣＡ基因组类型相同,聚为一族;ＣＣＡ虽自成一体,但可与ＣＡＡ和ＣＡ聚为一族;而ＲＡ与其它组合遗传距离较远,自成一族。ＲＡＰＤ的结果也表明各种生物型内个体间     

冬虫夏草的随机扩增多态DNA及其遗传分化

本文对来自青藏高原３个区域５个具有代表性地方的１３个冬虫夏草样本进行随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析。１９个随机引物获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态,单个引物获得的ＲＡＰＤ片段数在３￣１０个之间。该１９个引物在每个样本中扩增的ＲＡＰＤ片段总数平均约为６５个。基于遗传距离分析,受试的１３个冬虫夏草样本中,来自同一地方的样本间遗传差异甚微,同一区域不同地方的样本间遗传差异较大,不同区域的样本间遗传差     

木根麦冬（Ophiopogon xylorrhizus）干叶提取DNA用于RAPD分析

木根麦冬（Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｘｙｌｏｒｒｈｉｚｕｓ）是我国珍稀濒危植物,分布仅限于云南西双版纳雨林,在植物系统学和保护生物学研究中具有独特的意义。随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法是揭示群体遗传多样性的高效、简便方法,但一般均以新鲜材料提取总ＤＮＡ,对一些分布边远地区物种难以采用此法。本文研究从木根麦冬干叶片中提取总ＤＮＡ,进行ＲＡＰＤ分析。样品取自４个居群、４９个个体。选取生长旺盛的叶片,在野外用硅胶快速干燥保存样品。采用高盐低ｐＨ值法提取总ＤＮＡ,每克鲜重所得的干叶可得８０～１６０μｇ。通过对模板ＤＮＡ的各种处理和ＰＣＲ扩增程序的调整,解决了扩增片段边缘弥散、界线模糊、产率低等问题,获得了理想的扩增带型。这一成果对其它从野外直接采样的干叶提取ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ研究具有指导意义     

小麦胞质突变型雄性不育系85EA与其保持系线粒体DNA的比较研究

８５ＥＡ是通过电子束辐照获得的胞质突变型小麦不育要用ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ技术对８５ＥＡ及春保持系的线粒体ＤＮＡ进行了比较研究。ＲＦＬＰ分析表明８５ＥＡ线粒体基因组中ｃｏｘⅡ基因的位置结构与保持系发生了变化；ＲＡＰＤ分析中引物ＯＰＤ－１５扩增产物在不育系和保持系间有明显差异，不育系的扩增产物比保持系多１条分子量为０．６ｋｂ的特展览 要带，用Ｔ－ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ克隆该不育系特异条带并命名为ＯＰＤ－     

从普通野生稻硅胶干燥的小量叶片中制备DNA用于RAPD分析和总DNA库的建立(英文)

普通野生稻（ Ｏｒｙｚａｒｕｆｉｐｏｇｏｎ Ｇｒｉｆｆ．）的基因资源对水稻的育种起着至关重要的作用。报道了从其硅胶干燥的小量叶片中制备ＤＮＡ的方法。用此方法制备的ＤＮＡ分子量大（４０～４５ ｋｂ） ,产率也较高（５０ ～２００ μｇ／ｇ） ,且成功地进行了ＲＡＰＤ扩增。用制备的４４ 个居群,１１６８ 个个体的总ＤＮＡ 建立了中国普通野生稻的总ＤＮＡ 库作长期冷冻保存,可用于基于ＰＣＲ 的ＤＮＡ水平上的各种目的的研究。根据实验结果,从在室温下贮存１ 周、３ 个月、６ 个月、１ 年的硅胶干燥的叶片中提取的ＤＮＡ 用于ＲＡＰＤ扩增所得的扩增产物没有差异;模板ＤＮＡ浓度在３ ．１ ～５０ ｎｇ 的范围内均得到很好的ＲＡＰＤ扩增结果。这说明了从硅胶干燥的叶片中提取的普通野生稻的ＤＮＡ 用于ＲＡＰＤ扩增的产物很稳定,将其用于群体遗传分析具有很好的可比性和可靠性。同时也讨论了模板ＤＮＡ的纯度和浓度对ＲＡＰＤ扩增的影响     

红豆杉科植物RAPD分析及其系统学意义

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术分析了红豆杉科（Ｔａｘａｃｅａｅ）红豆杉属（Ｔａｘｕｓ）、白豆杉属（Ｐｓｅｕｄｏｔａｘｕｓ）、穗花杉属（Ａｍｅｎｔｏｔａｘｕｓ）和榧树属（Ｔｏｒｒｅｙａ）的６种植物：红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ （Ｐｉｌｇｅｒ）Ｒｅｈｄ）、南方红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｖａｒ．ｍａｉｒｅｉ（Ｌｅｍｅｅ ｅｔＬｅｖｌ．）Ｃｈｅｎｇ ｅｔＭａｉｒｅＹｅｗ     

随机扩增多态性DNA技术在林业中的应用

１ＲＡＰＤ的原理随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ）系１９９０年由美国科学家采用ＰＣＲ技术发展起来的。在发现ＲＡＰＤ多态性的同时,也证明了ＲＡＰＤ标记的分离符合孟德尔独立分配规律,从而确立了ＲＡ...     

白鲢和镛鱼的扩增多态DNA分析

根据鱼类外周血细胞都有核的特点,采用从冷冻和低渗双重处理分离的细胞核的取基因组ＤＮＡ。以此法获得的白鲢和镛鱼的基因组ＤＮＡ为模板,和Ｏｐｅｒｏｎ公司生产的ＯＰＮ和ＯＰＭ两个组共４０个随机引物,对这两种鱼进行了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析;确定了对这两种鱼基因组相关区域可进行随机ＰＣＲ扩增的有效引物,特别是哪些可产生种群内或群体的ＲＡＰＤ遗传标记即可产生个体特异性和群体特异性ＲＡＰＤ带谱的引物     

烟草黑胫病菌株亲缘关系的RAPD分析

从２２０个ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡｓ）随机引物中所选出的多态扩增性强的２１个引物对来源不同的３３个烟草黑胫病菌株进行全基因组ＤＮＡ遗传多样性分析和指纹构建。选用引物对受试菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,共产生２４３条ＤＮＡ标记图带,其中１９１条为多态性图带,多态检测率为７８．６％。利用ＵＰＧＭＡ（Ｕｎｗｅｉｇｔｈｔｅｄ Ｐａｉｒ－ｇｒｏｕｐ Ｍｅｔｈ     

RAPD技术在系统与进化植物学中的应用

随着ＲＡＰＤ技术的发展,这一在ＤＮＡ分子水平上检测遗传多样性的方法被广泛用于植物系统与进化的研究之中,利用ＲＡＰＤ的分析结果,不仅可以探讨 物种间的亲缘演化关系,检测种内的遗传分化,而且还可以为属、种的分类提供强有力的证据。事实证明,ＲＡＰＤ在系统与进化植物学的研究中具有重要的参考价值,并已取得了可喜的成果。