草鱼垂体生长激素分离纯化及其抗体制备的研究

应用碱性抽提,亲和层析,凝胶过滤和离子交换层析等技术从草鱼垂体中分离提纯出纯度高的草鱼生长激素（ｇｃＧＨ）用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）检测表明草鱼ＧＨ与大马哈鱼ＧＨ抗血清具有明显的免疫交叉反应,而与大马哈鱼催乳素（ＰＲＬ）抗血清没有交叉反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳表明草鱼ＧＨ为单一蛋白带,其分子量约为２２５００道尔顿,等电聚焦揭示出草鱼ＧＨ主要由等电点为４．７和５．０的两条蛋白带组成,用纯化的草     

鱼类消化道具有吸收外源生长激素的能力

采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）,研究了重组鲤生长激素（ｒｃＧＨ）经胃或肠灌注后,胡子鲶、大口鲶和银鲫血清ＧＨ水平的变化规律。胡子鲶、大口鲶直肠分别灌注ｒｃＧＨ（１μｇ／ｇ和５μｇ／ｇ）后,血清ＧＨ水平迅速升高,而在对照组胡子鲶和大口鲶血清中未检测到内源性的ＧＨ,预示处理组血清ＧＨ水平的迅速升高是由ｒｃＧＨ从小肠内转移进血液引起的。胡子鲶胃内灌注ｒｃＧＨ（２５μｇ／ｇ）后,在     

识别未衍生化的13—羟化GAs及其葡萄糖苷的单克隆抗体

抗ＧＡ３ 及其葡萄糖苷的ＭＡＢ１０单克隆抗体源于以ＧＡ３ 中的３ 位羟基（３－ＯＨ）为偶联位点,人血清白蛋白（ＨＳＡ）为载体合成的ＧＡ３－３－ＨＳＡ 免疫原． 该抗体对１３－羟化ＧＡｓ（１３－ＯＨＧＡｓ、ＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡ５ 等）和ＧＡ３ 葡萄糖苷具有高亲和力． ７ 位羧基的甲酯化可显著降低ＭＡＢ１０ 对１３－ＯＨ ＧＡｓ的亲和力,而３－ＯＨ 的糖苷化却未降低其亲和力． 用该抗体建立的两种分别用于ＧＡ３ 及其葡萄糖苷测定的酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）,其检测线性范围均为０．２～２０ ｐｍ ｏｌ． 借助这两种ＥＬＩＳＡｓ,研究了羊蹄（Ｒｕｍ ｅｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）叶片中ＧＡ３ 及其类似ＧＡｓ和葡萄糖苷的动态变化．结果表明,叶片衰老与游离态ＧＡｓ的糖苷化有关;而６－ＢＡ 延缓衰老则可能与其减缓ＧＡｓ的糖苷化有关     

用于鱼类脑垂体内分泌研究的离体灌流培育系统

本实验建立了研究鲤鱼脑垂体碎片促性腺激素（ＧｔＨ）和生长激素（ＧＨ）分泌反应的离体灌流系统。性腺退化鲤鱼的脑垂体碎片可产生稳定和可测的ＧｔＨ和ＧＨ基础分泌;引入２ｍｉｎ脉冲式鲑鱼促性腺激素释放激素类似物（ｓＧｎＲＨＡ）可产生敏感的、恢复迅速和可再现的ＧｔＨ和ＧＨ分泌峰。该系统为鱼类脑垂体激素（ＧｔＨ和ＧＨ）分泌动力学和分泌调节机理的离体研究提供了可靠的手段。     

抗丙肝病毒核心抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

用基因工程重组技术获得的丙肝病毒（ＨＣＶ）核心蛋白抗原与鼠血清白蛋白交联后免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术成功地建立了４株稳定分泌抗核心抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞,试验结果表明,该４株ＭｃＡｂｓ与免疫抗原及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶ ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５无反应,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。４株ＭｃＡｂｓ中３株为ＩｇＧ２     

毕赤酵母表达的重组乙肝表面抗原SS1的纯化及性质鉴定

对毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）表达的重组乙肝表面抗原ＳＳ１的纯化以及蛋白质的理化性质及免疫原性进行了进一步的研究。采用单抗亲和层析的方法,一步纯化即可得到纯度为９５％的纯化蛋白质。ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹鉴定表明,纯化的ＳＳ１融合蛋白同时具有良好的Ｓ和ＰｒｃＳ１抗原性。ＣｓＣ１密度梯度离心和电镜检测的结果则表明,这一重组抗原可以形成与ＨＢＶ亚病毒颗粒类似的颗粒结构。在ＢＡＬＢ／     

细胞外Ca^＋＋对脉冲式和持续性鲑GnRH类似物刺激鲤GtH分泌的影响

２ｍｉｎ脉冲式１０ｎｍｏｌ鲑ＧｎＲＨ高效类似物ｓＧｎＲＨ－Ａ（Ａｒｇ＾６Ｔｒｐ＾７Ｌｅｕ＾８Ｐｒｏ＾９ＮＥｔ－ＬＨＲＨ）刺激导致离体灌流培育的鲤脑垂体迅速产生显著的ＧｔＨ分泌峰,ＧｔＨ分泌在刺激后３０ｍｉｎ内恢复到基础水平。４ｈ１０ｎｍｏｌ／Ｌ ｓＧｎＲＨ－Ａ持续性刺激导致灌流培育的鲤脑垂体ＧｔＨ分泌出现脱敏反应,整个过程包括刺激后迅速的ＧｔＨ分泌峰相和随后持续低水平的ＧｔＨ分泌相。无Ｃａ＾＋＋的     

产后鳗鲡生殖生理学的研究

产卵后的鳗鲡（Ａｎｇｕｉｌｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ）可分为顺产鳗鲡（Ｓｍｏｏｔｈｌｙ ｏｖｕｌａｔｅｄ ｅｅｌｓ,ＳＯＥ）和部分产鳗鲡（Ｐａｒｔｌｙ ｏｖｕｌａｔｅｄ ｅｅｌｓ,ＰＯＥ）两种类型,经组织学检查发现,ＳＯＥ性腺中第Ⅳ＾＋＋＋和第Ⅴ时相的卵细胞较多,而ＰＯＥ性腺中第Ⅳ＾＋＋和第Ⅵ时相的卵细胞较多。ＳＯＥ脑部的ｍＧｎＲＨ、血清ＧｔＨ和雌二醇（Ｅ２）的含量均显著高于ＰＯＥ,但ＳＯＥ脑部ｃＧｎＲＨ－Ⅱ及血清睾酮（Ｔ）含量与ＰＯＥ无显著差异。     

CLONING AND CHARACTERIZATION OF A NOVEL NITRIC OXIDE SYNTHASE(NOS) FROM MOLLUSCAN CENTRAL GANGLIA

ＣＬＯＮＩＮＧＡＮＤＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮＯＦＡＮＯＶＥＬＮＩＴＲＩＣＯＸＩＤＥＳＹＮＴＨＡＳＥ（ＮＯＳ）ＦＲＯＭＭＯＬＬＵＳＣＡＮＣＥＮＴＲＡＬＧＡＮＧＬＩＡＨｕａｎｇＳｈｉｌｅ１ＨｕｂｅｒｔＨ．Ｋｅｒｓｃｈｂａｕｍ２ＥｄｗｉｎＥｎｇｅｌ...     

Existence and Functions of Neurotens in Human Early Placental Villi

ＥｘｉｓｔｅｎｃｅａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆＮｅｕｒｏｔｅｎｓｉｎＨｕｍａｎＥａｒｌｙＰｌａｃｅｎｔａｌＶｉｌｌｉＺＨＡＮＧＣｈｏｎｇ－ｌｉ（张崇理）;ＣＨＥＮＧＬｉ－ｒｅｎ（程丽仁）,ＳＨＥＮＷｅｉ－ｂｉｎ（沈卫斌）;ＹＩＮＨｏｎｇ（殷红）;ＨＵ...     

草鱼GH单克隆抗体对9种硬骨鱼的免疫细胞化学定位

研究结果表明：１）鳜和鲇的胰岛中有大量的ＧＨ免疫活性内分泌细胞存在;８种有胃硬骨鱼的消化道中均未见到阳性特异性反应。２）草鱼的中腺,前腺垂体中均发现有ＧＨ和Ｓｏｍ两种免疫活性肉发泌细胞存在。     

Production, characterization and applications of mouse anti-grass carp (Ctenopharyngodon idellus) growth hormone monoclonal antibodies

Mouse anti-grass carp growth hormone (gcGH) monoclonal antibody (MAb) secretors were produced by PEG-mediated fusion of NS-1 myeloma cells and splenic B-lymphocytes of gcGH hyper-immunized mice. Positive secretors were screened by direct ELISA and cloned by limiting dilution. Three positive secretors, 21D3, 22G5 and 23B3, were obtained in a single fusion trial. Anti-gcGH MAbs were produced by growing hybridomas in the peritoneal cavity of pristane-primed mouse. The three MAbs were isotyped to be IgG2a, IgG2b and IgM, respectively. IgG MAbs were purified from ascitic fluid by Hitrap protein G column and IgM MAb was purified by gel filtration chromatography. The purified MAbs were highly specific and had moderate binding affinity. The MAbs were successfully used for the purification of native gcGH from mature grass carp pituitary extract by one-step immunoaffinity chromatography, for the quantification of gcGH by competitive sandwich ELISA, and for the probing of somatotropes in grass carp pituitary by immunohistochemistry.     

青鱼生长激素的重组表达及其多克隆抗体的制备

以含有的青鱼生长激素编码区cDNA的重组质粒pbcGHc为模板,高保真PCR扩增青鱼生长激素（GH）成熟肽cDNA序列,定向插入原核表达载体pET-28a,构建青鱼GH原核表达质粒pET-bcGH。将pET-bcGH转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导青鱼GH基因在大肠杆菌中的融合表达,SDS-PAGE凝胶电泳结果显示一条23 kDa的诱导表达重组青鱼GH带。以草鱼GH多克隆抗体为一抗,Western Blot证明,该重组青鱼GH具有免疫学活性。将经过亲和层析、透析纯化后的重组青鱼GH作为抗原,采用改进的方法对家兔进行皮下免疫注射,获得青鱼GH多克隆抗血清。以该多抗为一抗,Western Blot 可以检测出4 ng的抗原量;并且在青鱼垂体组织抽提液中和血清中检测到一种能与该抗血清作用的大小为21 kDa的蛋白质。这些结果表明本研究得到的青鱼GH多克隆抗血清具有较好的免疫特性。     

多马胺能药物对鲇鱼促性腺激素（GtH）分泌活动的影响

以珠江流域鲇鱼（silurus asotus)为实验材料,研究了多巴胺（DA）能药物（DA及其D－2型受体拮抗物 ,DOM）对鲇鱼促性腺激素（GtH)释放的影响,结果表明,在性腺发育的各个时期,单独注射DOM（5ug/g)均不能显著提高鲇鱼血液基础GtH水平,当DOM与LHRH－A联合注射时能显著增强LHRH－A刺激GtH释放的作用;DA只能抑制GnRH诱导的GtH释放,对基础GtH释放无抑制作用,这种生殖内分泌调节方式与鲇形目的革胡子鲇（Clarias gariepinus)和大鳍Hu（Mystus macropterus)相似,而与鲤形目的鲁科（Cyrpindiae)鱼类不同。     

草鱼垂体催乳素的分离、纯化与鉴定的研究

 草鱼垂体催乳素的分离、纯化与鉴定的研究陈松林,邓文涛,陈细华,夏盛芹（中国水产科学研究院长江水产研究所淡水鱼类种质资源与生物技术国家重点实验室,沙市４３４０００）催乳素（ＰＲＬ）是由动物脑垂体合成与分泌的一种多肽激素,其在鱼类的主要功能是调节鱼体渗透...     

草鱼出血病病毒对其它鱼的感染性研究

用草鱼出血病病鱼分离出的草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)感染其它常见鱼并用ELISA方法检查感染鱼组织提取液,结果表明:青鱼、鲢鱼、布氏鳌条对GCHV抗体呈阳性反应;鲤鱼、鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、泥鳅则呈阴性反应。综合感染鱼发病症状及死亡特征,初步认为:青鱼对GCHV是易感的,GCHV能在鲢鱼、布氏蟹条体内增值,但毒力较低,鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、鲤鱼、泥鳅能抗GCHV感染。     

Chemical identification of catfish growth hormone and prolactin.

Isolation and primary structure of growth hormone (GH) and prolactin (PRL) from the pituitary gland of catfish (Ictalurus punctatus) are described. Alkaline extract of the pituitary glands was fractionated by gel filtration on Sephadex G-75, ion-exchange chromatography on DEAE-cellulose, and reversed-phase high-performance liquid chromatography on Octadecyl silica ODS. Catfish GH and PRL were identified by Western blotting with antisera against chum salmon GH and PRL. The catfish GH consists of 178 residues and is the most similar to carp GH, with sequence identity of 77%, although there is an uninterrupted deletion of 10 amino acid residues that corresponds to carp GH (90-99). The PRL is composed of 187 residues, which also exhibits the highest identity (79%) with carp PRL. Sequence identity between catfish GH and PRL is only 27%.     

草鱼催乳素抗血清的制备与鉴定

应用从草鱼垂体中分离纯化的催乳素免疫兔子制备了特异抗血清。用常规酶联免疫吸附测定法检测表明该抗血清与马哈鱼生长激素及促性腺激素完全没有交叉反应，而与草鱼生长湟级向弱交叉反应。免疫细胞化学染色表明该抗血清主要与草鱼垂体前叶催乳素细胞发生结合反应，与垂体间叶细胞有微弱染色反应，但与神经垂体琢垂体后叶细胞则完全没有免疫结合反应。     

饲料营养成分对草鱼,团头鲂和青鱼鱼种阶段的饲料可消化能值的影响

为了探讨饲料可消化能值同饲料营养成分之间的关系,用Ｃｒ２Ｏ３作指示物,分别测定了鱼粉和大豆粕等饲料原料的草鱼（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ　ｉｄｅｌｌａ）团头鲂（Ｍｅｇａｌｏｂｒａｍａ ａｍｂｌｙｏｃｅｐｈａｌａ　Ｙｉｈ）青鱼（Ｍｙｌｏｐａｒｙｎｇｏｄｏｎ　ｐｉｃｅｕｓ）鱼种饲料的可消化能,用微机计算分析测试结果,发现饲料可消化能值随饲料蛋白质和／或脂肪食量增加而增加;随饲料无氮浸出物和／或纤维含量增加而降低。同时,“优选”出了有一定实用价值的估算草鱼、团头鲂和青鱼鱼种饲料可消化能值的回归方程。     

饥饿状态下草鱼生长激素的分泌

以两种规模草鱼为对象,研究了饥饿对其生长激素的影响。检测由背大动脉导管抽取的连续血样的结果表明;饥饿状态下草鱼（体重为0．5－1．0kg）生长激素分泌仍是间歇性的,但饥饿明显提高其总体生长激素平均值、基础生长激素平均值和其最大峰值。对于草鱼鱼种（体重为25．30g）,饥饿也明显提高其血液中生长激素水平,但草鱼种的肥满度系数和血糖浓度却。在体外灌流实验中,饥饿的草鱼种脑垂体碎片生长激素基础分泌值明显高于正常投喂的对照组。这些结果表明：饥饿状态下草鱼生长激素分泌增强。