鱼类垂体腺苷酸环化酶激活多肽的研究进展

垂体腺苷酸环化酶激活多肽 (Pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide ,PACAP)是 1 989年首次在绵羊下丘脑发现的具有广泛生物活性的多肽 ,是促胰液素 /胰高血糖素家族新成员[1 ] 。在哺乳类 ,分离出两种活性的PACAP ,即PACAP 38和 2 7;PACAP 38由 38个氨基酸组成 ,PACAP 2 7是PACAP 38氨基端的 2 7个氨基酸残基 ,哺乳类PACAP 38和 2 7产生于同一前体分子 ;组织中PACAP 2 7的含量要比PACAP 38少的多[2 ] 。在哺乳类 ,PACAP及其受体分布十分广泛 ,具有多种生理功能。在低等脊椎动物尤其鱼类 ,最初PACAP研究…     

PLAC1特异性TCR基因修饰T细胞对乳腺癌的抗肿瘤作用

目的研究胎盘特异性基因1(PLAC1)特异性T细胞受体(TCR)基因修饰T细胞对乳腺癌的抗肿瘤作用。方法磁珠分选人类白细胞抗原分型为A2(HLA-A2)的志愿者外周血单个核细胞(PBMC)中的CD8~+T细胞,流式检测CD8~+T细胞的表型。通过慢病毒载体构建、包装,将可识别乳腺癌肿瘤抗原PLAC1的HLA-A2限制性的TCR基因导入CD8~+T细胞(称为TCR-T细胞),以慢病毒空载体包装、感染的CD8~+T细胞(NC-T细胞)作为对照细胞,通过流式细胞术检测PLAC1特异性TCR的表达效率。免疫荧光和流式细胞术检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231(三阴性乳腺癌细胞)的PLAC1和HLA-A2血清型的表达。WST-1法检测不同效靶比(5:1、10:1和20:1)TCR-T细胞或NC-T细胞与乳腺癌细胞MCF-7或MDA-MB-231作用后的细胞毒性,并通过ELISA检测共培养后T细胞IFN-γ的释放量。通过裸鼠皮下人乳腺癌移植瘤模型检测TCR-T细胞以及NC-T细胞的抗肿瘤作用。采用单因素方差分析及独立t检验进行统计学分析。结果磁珠分选出的CD8~+T细胞CD3~+CD8~+比例达到(98.89±0.30)﹪。经慢病毒感染、五聚体检测,TCR-T细胞中PLAC1特异性TCR的正确表达率为(24.58±0.82)﹪,NC-T细胞不表达PLAC1特异性TCR。免疫荧光和流式结果显示乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231为HLA-A2和PLAC1双阳性表达细胞。其中流式检测结果显示,MCF-7和MDA-MB-231细胞中HLA-A2的表达效率分别为(93.04±1.36)﹪和(98.72±0.12)﹪。在效靶比为20:1时,TCR-T细胞对MCF-7杀伤率为(51.5±1.37)﹪,高于NC-T细胞对MCF-7的杀伤率(5.93±2.40)﹪,t=15.507,P0.01;TCR-T细胞对MDAMB-231杀伤率为(44.34±2.20)﹪,高于NC-T细胞对MDA-MB-231杀伤率(5.15±2.40)﹪(t=10.694,P0.01)。在相同效靶比情况下,TCR-T细胞对MCF-7或MDA-MB-231细胞的细胞毒性高于NC-T细胞,且随着效靶比的增加杀伤效果增强。在效靶比为20:1时,与MCF-7共培养后TCR-T细胞IFN-γ的分泌水平[(347.49±4.10)pg/ml]高于NC-T细胞[(18.14±6.22)pg/ml](t=-76.638,P0.01);与MDA-MB-231共培养后TCR-T细胞IFN-γ的分泌水平为(255.25±6.85)pg/ml,高于NC-T细胞[(14.70±6.38)pg/ml](t=-44.526,P0.01),且随着效靶比的增加分泌量升高。在裸鼠皮下人乳腺癌移植瘤实验中,生理盐水组和NC-T细胞移植组小鼠的肿瘤生长迅速,TCR-T细胞治疗组小鼠肿瘤生长相对缓慢,在移植后第35天,生理盐水组、NC-T细胞组和TCR-T细胞组小鼠肿瘤的平均体积分别为(5 636.96±2 879.55)mm~3、(5 522.12±3 391.48)mm~3和(1 403.85±1 394.31)mm~3,TCR-T细胞治疗组小鼠肿瘤体积明显小于生理盐水组(F=0.1813,P0.05)和NC-T细胞组(F=0.1307,P0.05)。结论 PLAC1特异性TCR基因修饰T细胞对乳腺癌细胞具有较强的抗肿瘤作用,PLAC1可作为乳腺癌治疗的潜在靶标;PLAC1特异性TCR基因修饰T细胞治疗是PLAC1表达阳性的乳腺癌治疗的新策略。     

鱼类消化道具有吸收外源生长激素的能力

采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）,研究了重组鲤生长激素（ｒｃＧＨ）经胃或肠灌注后,胡子鲶、大口鲶和银鲫血清ＧＨ水平的变化规律。胡子鲶、大口鲶直肠分别灌注ｒｃＧＨ（１μｇ／ｇ和５μｇ／ｇ）后,血清ＧＨ水平迅速升高,而在对照组胡子鲶和大口鲶血清中未检测到内源性的ＧＨ,预示处理组血清ＧＨ水平的迅速升高是由ｒｃＧＨ从小肠内转移进血液引起的。胡子鲶胃内灌注ｒｃＧＨ（２５μｇ／ｇ）后,在     

丹心Ⅲ号对大鼠急性心肌梗死的保护作用

采用大鼠冠状动脉前降支结扎造成急性心肌梗死模型,丹心Ⅲ号能缩小大鼠心肌梗死范围,降低大鼠血清ＣＰＫ和ＬＤＨ水平以及ＳＴ,保护心肌ＳＯＤ活性,并能明显减轻缺血心肌超微结构的病理改变。结果表明,丹心Ⅲ号对大鼠心肌梗死有明显的保护作用,这种作用可能与其抗心肌脂质过氧化有关。     

榄香烯对急性血瘀模型大鼠血液流变性的影响

本文观察了榄香烯对急性血瘀模型大鼠血液流变性的影响。实验结果表明：榄香烯６．２５－２５ｍｇ／ｋｇ／ｄ,ｉｐ×７ｄ,可使血瘀模型鼠的高低切变率全血粘度和还原粘度、血浆粘度、血沉、红细胞聚集指数、纤维蛋白原及红细胞电泳时间等显著降低（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）。提示榄香烯有活血化瘀作用     

慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠

目的利用慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白（mRFP）转基因小鼠,并建立转基因小鼠的技术平台。方法将携带mRFP基因的慢病毒注入ICR鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔代鼠,然后应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等鉴定并获得mRFP转基因鼠。结果移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎40枚给2只假孕母鼠,共获得仔鼠6只;利用体视荧光显微镜检测mRFP表达,在蛋白水平证实6只F0代中,2只（R3和R4）鼠耳高表达mRFP,其余的弱表达mRFP（R1、R2和R5）或荧光强度（R6）与野生型ICR鼠无明显差别,而DNA水平检测证实,6只F0代中,5只（R1、R2、R3、R4和R5）基因组中整合有外源转基因hUb-mRFP,预示基因型鉴定结果很好验证了体视荧光显微镜鉴定结果。此外,mRFP转基因首建鼠基因组中整合的mRFP基因可稳定遗传和表达。结论建立了慢病毒法快速制备转基因小鼠的技术平台,这为针对不同基因建立相应转基因小鼠以实现恒定或条件性的转基因过表达或RNA干涉（RNAi）,并进而在体内解析相应基因功能和建立人类疾病模型等奠定了坚实基础。     

槲皮素的抗肿瘤作用与相关基因的调控

本文主要综述了槲皮素抗肿瘤作用与相关基因调控的最新进展,探讨了槲皮素对相关基因的调控机理,指出对新的抗癌剂槲皮素的研究,具有重要的理论意义和应用前景     

慢病毒载体法制备遗传工程猴和小型猪的现状及应用前景展望

较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用。而制备遗传工程大动物可以更深入地解析人类疾病,并可为器官移植和新药研发提供更充分的实验材料。基于慢病毒介导的转基因方法近几年已越来越多地被用来制备遗传工程猴和小型猪。与传统的原核显微注射方法和体细胞核移植法相比,慢病毒介导的转基因方法转基因效率高,操作更简单。因此,构筑基于慢病毒介导的转基因方法制备遗传工程猴和小型猪的技术平台将对生物医学研究产生巨大推动作用。     

西藏小型猪细胞色素b基因序列的比较

目的对西藏小型猪Cyt b-基因序列进行分析,研究其遗传背景及其与国内家猪的亲缘关系。方法提取西藏小型猪和巴马小型猪、贵州香猪、五指山猪的全基因组DNA,设计引物扩增Cyt b基因,测序后进行碱基序列比对,建立亲缘关系树,分析西藏小型猪的遗传背景。结果西藏小型猪等国内部分品种猪的Cyt b基因序列与欧洲猪相比有14个变异位点;但是西藏小型猪与国内品种猪相比存在两个特殊碱基位点即在420位点T→C转换的同时在883位点存在G→A转换。结论西藏小型猪与巴马小型猪、贵州香猪、五指山猪等国内家猪有很近的亲缘关系。同时进一步证实西藏小型猪群体内存在一定的遗传分化。