用核酸斑点杂交法比较油桐尺蠖核型多角体病毒与某些昆虫杆状病毒的同源性

有关核型多角体病毒基因同源性的研究报道不多,结果也不甚一致。目前,国内外普遍用SDS-PAGE法分析昆虫杆状病毒结构多肽,以限制性内切酶谱法测定基因组大小,借此区分来自不同宿主的病毒株,和基因组密切相关     

两株水生呼肠孤病毒部分特性的比较

水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体,隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属.草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原,鮁鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)是引起海水养殖鮁鱼病毒病病原.本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究.结果表明,GCRV与TFV均能感染CIK细胞,但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异.此外,凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示,GCRV与TFV核酸属不同的基因型.在多肽特性上,证实了GCRV的5条主要结构多肽具有与FTV及水生呼肠孤病毒相似的特性.Western blot 检测显示,草鱼呼肠孤病毒与TFV结构蛋白拥有部分相同的抗原决定簇.     

草鱼呼肠孤病毒RNA聚合酶基因的表达与产物纯化

草鱼呼肠孤病毒是引起草鱼出血病的主要病原,隶属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属.序列分析表明,GCRV S2 片段长为3 877核苷酸,编码一个分子量为138kDa 的蛋白VP2,具有RNA聚合酶性质.为进一步了解该病毒 RNA聚合酶特性,本研究在对GCRV RNA聚合酶基因(GCRV-RdRp)保守区(约1.5kb)重组质粒pR/RRp高效表达的基础上,分别构建了编码GCRV RNA聚合酶保守区N端与C端部分基因的 pR/RRpN及pR/RRpC重组表达载体,并在原核细胞中获得成功表达.筛选的重组表达菌株经IPTG诱导培养,得到分子量分别为98kDa、103kDa的目的表达融合蛋白.Western blot分析表明,该表达产物与兔抗GCRV-VP2血清呈阳性反应.通过ProBond柱亲和层析,纯化了融合有6个组氨酸的重组表达产物,并获得约90%纯的目的蛋白.上述结果为GCRV RNA聚合酶特性分析提供了依据.     

有机盐对基因启动子的σ因子选择性的影响

用σ￣（７０）或σ￣（３８）和核心酶（Ｅ）组成的大肠杆菌ＲＮＡ聚合酶全酶（Ｅσ）对四种启动子进行了体外转录。结果表明：ｌａｃＵＶ５,ｒｐｌＪ主要被Ｅσ￣（７０）识别,ｋａｔＥ主要被Ｅσ￣（３８）识别,ｆｉｃ在低盐浓度时被Ｅσ￣（７０）识别,在高浓度盐时被Ｅσ￣（３８）识别;Ｅσ￣（３８）转录特异性启动子所需酶量大于Ｅσ￣（７０）转录特异性启动子的酶量;在含有分别对σ￣（７０）或σ￣（３８）亲和性大的混和启动子的体外转录中,启动子之间不存在干扰和竞争,转录水平与启动子浓度成正相关。     

草鱼出血病病毒对其它鱼的感染性研究

用草鱼出血病病鱼分离出的草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)感染其它常见鱼并用ELISA方法检查感染鱼组织提取液,结果表明:青鱼、鲢鱼、布氏鳌条对GCHV抗体呈阳性反应;鲤鱼、鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、泥鳅则呈阴性反应。综合感染鱼发病症状及死亡特征,初步认为:青鱼对GCHV是易感的,GCHV能在鲢鱼、布氏蟹条体内增值,但毒力较低,鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、鲤鱼、泥鳅能抗GCHV感染。     

温度对草鱼出血病影响的初步探讨

将鱼呼肠孤病毒(FRV)感染的草鱼饲养在人工控温的水族箱内,水温在24—30℃恒温时其死亡率无显著差异(P>0.05),而在20℃和33℃恒温时死亡率则明显降低,与24℃—30℃恒温相比死亡率有非常显著差异(P<0.01)。人工感染恒温饲养期间,死亡高峰期随水温降低而推迟,缓慢改变水温能降低死亡率,在低于20℃攻毒并维持一星期左右,即使逐步升温至30℃也不会导致感染鱼的大批死亡。     

草鱼出血病病毒研究成果在武汉通过鉴定

草鱼出血病是严重危害草鱼的一种病毒性传染病,每年3—10月为发病季节,流行于长江流域及广东、广西、福建等省市。中国科学院武汉病毒研究所分子病毒室在原有病毒病原研究的基础上,于七五计划期间对该病毒的形态结构、基因组和多肽、生物学及血清学特征、理化因素的影响、流行病学等方面进行了深入的研究。 1990年11月2日,由农业部委托中国科学院武汉分院主持召开了草鱼出血病病毒的研究(含国家七五计划科技攻关75-06-03-11子专题1、4项)成果鉴定会,由著名病毒学家向近敏教授,学部委员、著名鱼类学家刘建康研究员等专家组成的鉴定委员会对该项研究提供的资料进行了认真评议,专家们一致认为:根据国际病毒学分类原则,草鱼出血病病毒的主要特性符合呼肠孤病     

草鱼呼肠孤病毒新分离株(GCRV991)的病毒学特性分析

从湖南长沙分离到一株致病性强的草鱼呼肠孤病毒(GCRV991),该病毒能使草鱼CIK,肥头鲤FHM细胞产生明显的CPE,对水生动物BF2,EPC及哺乳动物BHK,VERO细胞株不敏感.中和实验显示,GCRV873抗体能有效地中和GCRV991病毒颗粒,形成抗原抗体免疫复合物.纯化的病毒核酸与蛋白经SDS-PAGE分离,分别呈现11条清晰的核酸带及5条主要与2条微量结构多肽图谱,其核酸蛋白分子量大小与GCRV873相近似.该毒株基因组总分子量为14.48×106kD,大小范围是0.55～2.61×106kD;5条主要与两条微量结构多肽分子量近似值分别为136kD、132kD、65kD、43kD、34kD及138kD、82kD.上述结果提示,新分离的GCRV991与GCRV873具有相似的抗原性.     

乙肝病毒DNA检测药盒在汉通过鉴定

乙肝病毒(HBV)引起的乙型肝炎是人们普遍关注的传染病,目前一般采用血清学方法进行临床检测。中国科学院武汉病毒研究所分子病毒室用α~(32)P—dCTP标记克隆化的HBVDNA片段作分子杂交探针,制备检测药盒,研究HBVDNA在人血清、体液和组织中存在的状态。以HBVDNA作为传染性的指标比血清学方法更为直接可靠。该药盒不需特殊试剂和设备,能在一般科研、医疗、卫生和防疫等部门应用。两年     

α—~(32)P HBV DNA探针的制备及其在血清检测中的应用

采用缺口转移(Nick-translation)方法标记克隆化的乙型肝炎病毒(HBV)DNA制备探针,能特异地与HBV DNA杂交,在本实验条件下,其最低检测量为0.2pg,同位素参入率为23.5—67.0％,使用100μCi ~(32)P dCTP,比放射活性为10~8cpm//μg DNA左右。临床血清检测统计分析表明:HBV DNA与HBsAg、HBeAg、HBcAg、DNAP的阳性符合率分别为53.3％、69.7％、78.6％、81.7％,其灵敏性和特异性均比免疫学检测法高。