乙肝病毒表面抗原preS1与人肿瘤坏死因子α融合基因的表达

用ＰＣＲ法获得了ＨＢｓＡｇｐｒｅＳ１（１－６５）肽段基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦα）之后,插入表达载体ＰＳＢ－９２中,使融合基因的５′端直接置于大肠肝菌ＰＬ启动子下游,采用３０℃培养,４２℃诱导,获得了ＴＮＦ与ｐｒｅＳ１（１－６５）融合蛋白的表达产物。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示表达产物为２５ｋＤ,约占细菌总蛋白的３５％。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证,能分别特异地与ｈＴＮＦα抗体与ｐｒｅＳ１抗体结合,稀释复性后,该融合蛋白还具有ＴＮＦ的生理功能（对Ｌ９２９细胞的细胞毒活性）。经ＤＮＡ序列测定,ｐｒｅＳ１（１－６５）肽基因正确地融合在ｈＴＮＦα基因之后。该结果提供了一种制备ｐｒｅＳ１的新方法,为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。     

稻瘟病菌侵染诱导的水稻早期反应基因的cDNA片段克隆与序列分析

以稻瘟病菌感染水稻,利用ｍＲＮＡ 差异显示技术分离了稻瘟病菌侵染诱导的水稻早期反应基因ＥＲ１（ｅａｒｌｙ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｇｅｎｅ） 的ｃＤＮＡ 片段。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析表明,ＥＲ１ 基因在稻瘟病菌侵染水稻叶片６ ｈ 后开始表达,８ ｈ 最强,１０ ～１２ ｈ 开始减弱,１６ ｈ 消失。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析表明,ＥＲ１ 基因属于水稻基因组。对ＥＲ１ 基因片段（２１９ ｂｐ） 进行了克隆和序列分析。经查询,在ＧｅｎＢａｎｋ 中没有与ＥＲ１ 同源的基因序列。     

甜极碱醛脱氢酶（BADH）基因转化小麦及其表达

采用基因枪法将山菠菜甜菜碱醛脱氢酶（ＢＡＤＨ）基因导入小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．）品种,并且得以表达。该基因由玉米Ｕｂｉｌ启动子控制。在盐胁迫条件下,多数转基因植株叶片的ＢＡＤＨ活性比受体亲本提高１￣３倍,部分植株相对电导率比亲本明显低,表明转基因植株的细胞膜在胁迫时有受损较轻倾向。ＰＣＲ和Ｓｏｔｈｅｍ杂交分析证实外源ＢＡＤＨ基因已插入小麦基因组,平均转化频率为４．１％。     

一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素—1诱导的心肌细胞原癌基因c—fo …

在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨一氧化氮（ＮＯ）对血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）和内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的心肌细胞肥大和原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达的影响。用Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定心肌细胞总蛋白含量（作为心肌细胞肥大的指标）;用基因特异性引物和ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ一步法进行逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测大鼠心肌细胞原癌基因ｃ－ｆｏｓ的表达（以ＧＡＰＤＨ为内标）。结果显示,ＡⅡ和ＥＴ－１分别作     

衰老细胞转录因子AP1／CREB结合活性对EGF的可诱导性下降

转录因子与ＤＮＡ的结合是基因转录的关键环节,通过迁移性法分析季转录因子ＡＰ１、ｃＤＡＭＰ反应元件结合蛋白（ＣＲＥＢ）、糖皮质激素反应元件（ＧＲＥ）结合蛋白在衰老细胞中的结合活性,结果表明,ＡＰ１与ＣＲＥＢ的结合活性在衰老细胞中对表皮生长因子（ＥＧＦ）的反应性低于年轻细胞;而ＧＲＥ结合蛋白的结合活性在衰老细胞中对ＥＧＦ的反应性无明显变化,这提示ＥＧＦ不能有效刺激衰老细胞增殖可能与其转录因子结合活性的     

缩短的人巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）在大肠杆菌中…

本文用聚合酶链反应（ＰＣＲ）获得了一个缩短的人巨噬细胞集落刺激因子ｃＤＮＡ基因,并克隆在质粒ｐＡＥＴ３ｄ中,在Ｔ７启动子指导下,在大肠杆菌ＢＬ２ＬｙｓＥ中获得了和一个６组氨酸短肽标签的融合表达。重组的融合Ｍ－ＣＳＦ表达量占菌体总蛋白的１２％,表达产物一部分以不溶性包涵体形式存在,另一部分则以可溶性蛋白存在。经过金属螯合新和层析一步纯化,所得的融合（Ｈｉｓ）６－Ｍ－ＣＳＦ在还原型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上基     

利用PCR方法鉴定甲醇酵母转化子的表型

本文以含外源基因的甲醇酵母表达载体ｐＰＩＣ９／Ｅ２Ｆ－１－ＤＢ质粒ＤＮＡ电转化甲醇酵母ＧＳ１１５,小规模抽提所得转化子的总ＤＮＡ,并以其为模板,以乙醇氧化酶（ＡＯＸ１）５’端序列和３’端的ＴＴ序列为引物,进行ＰＣＲ反应。ＰＣＲ产物走０．８％Ａｇａｒｏｓｅ电泳,通过对ＰＣＲ产物的电泳带型分析,鉴定出甲醇酵母转化子的表型,即Ｍｕｔ＾＋或Ｍｕｔ＾ｓ。这一鉴定结果为转化子的诱导表达产物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图     

冷锻炼和ABA诱导水稻幼苗提高抗冷性期间膜保护系统的变化

冷锻炼和ＡＢＡ处理提高了水稻幼苗叶绿体ＳＯＤ和ＧＲ活性及叶片抗氧化剂ＡｓＡ和ＧＳＨ的含量,降低了膜电解质泄漏,增强了幼苗的抗冷性．等电聚焦电泳分析表明,冷锻炼和ＡＢＡ处理苗叶绿体ＳＯＤ三条同工酶带和ＧＲ１、２、３和６同工酶带都有不同程度的增强．低温胁迫后,处理和未处理首的ＳＯＤ、ＧＲ活性和ＡＳＡ、ＧＳＨ含量均有所下降．但处理苗的水平仍维持在未处理苗之上．亚胺环已酮可抑制因冷锻炼和ＡＢＡ诱导增加的ＳＯＤ和ＧＲ活性,并使叶片电解质泄漏增大．本试验结果表明冷锻炼或ＡＢＡ诱导水稻幼苗抗冷性提高时,对防御活性氧的保护系统有类似的影响。     

人肿瘤坏死因子受体I死亡域融合蛋白基因的克隆与表达

通过设计４个引物进行重叠ＰＣＲ,由此克服了人肿瘤坏死因子受体Ｉ死亡域与氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）的融合蛋白基因（ＤｄＬｃａｔ）。该融合蛋白基因经测序,证明与设计的序列相同。构建成的重组表达质粒ｐＬＴ１０ＤｄＬｃａｔ转化大肠杆菌后发酵,ＩＰＴＧ诱导２ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定ＤｄＬｃａｔ蛋白质的分子量为３９ｋＤ。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹实验进一步作了鉴定。表达产物大部分为包涵体。ＤｄＬｃａｔ经Ｑ－Ｓｅｐｈａ     

Epstein—Barr病毒BCRF1基因重组质粒的构建及其在真核细胞中的表达

应用基因重组技术,把编码ＥＢ病毒早期蛋白的ＢＣＲＦ１基因重组于真核表达载体ｐＳＧ５中,并使该基因在乳地鼠肾（ＢＨＫ）传代细胞中获得良好表达,表达率为０．５％。血清学实验证实,鼻咽癌、类风湿性关节炎病人和正常人血清中均不同程度地含有ＩｇＧ／ＢＣＲＦ１抗体,抗体阳性率分别为９２％、８６％和７７％,几何平均滴度（ＧＭＴ）分别是１：１６．３５、１：１４．７２和１：１０．１５。两组病人和正常人血清中ＩｇＡ／ＢＣＲＦ１抗体阳性率和滴度之间有较大差别,它们的阳性率分别是７４％、７１％和１２％,ＧＭＴ分别是１：１２．３２,１：１０．５６和１：２．３５。还证实,鼻咽癌和类风湿性关节炎病人血清中ＩｇＡ／ＢＣＲＦ１和ＩｇＡ／ＥＡ（早期抗原）抗体阳性率和滴度间有很好的相关性,此为首次报导。重组表达质粒ｐＳＧ５－ＢＣＲＦ１的构建和表达为进一步研究ＢＣＲＦ１基因在病毒感染和肿瘤免疫中的作用创造了条件。本文就质粒的构建和３组血清中ＩｇＡ／ＢＣＲＦ１、ＩｇＡ／ＢＣＲＦ１、ＩｇＡ／ＥＡ和ＩｇＧ／ＢＣＲＦ１抗体间的关系和有关问题进行了讨论。     

冷锻炼对水稻和黄瓜幼苗SOD,GR活性及GSH,AsA含量的影响

水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）和黄瓜（Ｃｕｃｕｍ ｉｓｍ ｅｌｏ Ｌ．）幼苗在昼夜温度为１５ ℃／１０ ℃、白天光照１２ ｈ,光强为２５０ μｍ ｏｌ·ｍ － ２·ｓ－ １的条件下锻炼３ ｄ,明显地提高幼苗叶片中膜保护酶——超氧物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽还原酶（ＧＲ）活性和内源抗氧化剂——还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）、抗坏血酸（ＡｓＡ）的含量。经冷锻炼和未锻炼的幼苗移置４ ℃、光强为２５０ μｍ ｏｌ·ｍ － ２·ｓ－ １下胁迫处理２ ｄ,未锻炼苗叶片中ＳＯＤ、ＧＲ 活性和ＧＳＨ、ＡｓＡ 含量明显下降,而经冷锻炼的苗则相对比较稳定。从脂质过氧化产物——丙二醛（ＭＤＡ）含量及幼苗的存活率亦看出：冷锻炼苗具有较低的脂质过氧化水平和较高的幼苗存活率。由此认为：冷锻炼能提高水稻和黄瓜幼苗细胞膜的稳定性,从而增强了耐低温光胁迫的能力     

玉米转座因子Ac／Ds导入水稻花药悬浮细胞并再生成植株

使用电激法将分别含玉米转座因子Ａｃ或Ｄｓ因子的质粒ＤＮＡ同时导入水稻花药悬浮系细胞团,得到转化抗性愈伤组织,并分化成可育植株。对一些植株的ＤＮＡ进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析和ＰＣＲ扩增,发现导入的外源ＤＮＡ已整合到了水稻染色体上而且Ｄｓ因子已发生了转座。抗性测定表明转化植株Ｆ１代和Ｆ２代种子中的大多数仍有Ｄｓ因子存在。     

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子／白细胞介素—3融合蛋白的表达研究

利用ＰＣＲ扩增得到粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素－３（ＩＬ－３）完整基因片段,将其分别克隆ｐＧＥＭ－Ｔ构建成ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合蛋白基因,ＤＮＡ序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对７２ＲＮＡ聚合酶表达载体ｐＴ７ｚｚ,得到表达质粒ｐＦｕ,经转化至表达宿主Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）,在ＩＰＴＧ诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴     

牛生长激素释放因子的融合表达及其产物的化学加工

通过寡核苷酸引导的定位突变,在人工全合成的第２７位为Ｉｌｅ的牛生长激素释放因子［Ｉｌｅ２７］ｂＧＲＦ（１－４４）ＯＨ基因的５＇端ＡＴＧ后插入Ｔｒｐ密码子序列,并分别了构建了Ｐｌ ｐｒｏｍｏｔｅｒ控制下、以β－半乳糖苷酶和ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ结合ＩｇＧ ｄｏｍａｉｎＢ、Ｃ为载体蛋白的融合型基因表达质粒ｐＢＬＥ３１０和ｐＢＬＰＡＥ２Ｄ,在大肠杆菌中得到高效表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,表达产物β－Ｇａｌ     

萝卜抗真菌蛋白1（Rs—AFP1）在大肠杆菌中的融合表达及其对大丽轮 …

利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）获得了萝卜（Ｒａｑｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）抗真菌蛋白１（Ｒｓ－ＡＦＰ１）基因编码区核苷酸序列。将整个阅读框架片段和云除了Ｎ－端信号肽序列的片段分别装入原核表达载体ｐＥＴ－３２ｇ（＋）中,在大肠杆菌中表达,发现带有信号 的Ｒｓ－ＡＦＰ１不能在大肠杆菌中表达,而当这一序列去除后,表达出约２７ｋＤ的Ｒｓ－ＡＦＰ１的融合蛋白。用凝血酶处理融合蛋白以云除Ｎ－端Ｈｉｓ．ｔ     

缩短的人巨噬细胞集落刺激因子（M－CSF）在大肠杆菌中的表达

本文用聚合酶链反应（ＰＣＲ）获得了一个缩短的人巨噬细胞集落刺激因子（编码３～１４９氨基酸）ｃＤＮＡ基因,并克隆在质粒ｐＥＴ３ｄ中,在Ｔ７启动子指导下,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ＬｙｓＥ中获得了和一个６组氨酸短肽标签的融合表达。重组的融合ｍ－ＣＳＦ表达量占菌体总蛋白的１２％,表达产物一部分以不溶性包涵体形式存在,另一部分则以可溶性蛋白存在。经过金属螫合亲和层析一步纯化,所得的融合（Ｈｉｓ）６－Ｍ－ＣＳＦ在还原型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上基本呈一条均一的蛋白质条带。     

mRNA差异展示PCR的进展

ｍＲＮＡ差异展示ＰＣＲ的进展崔大祥闫小君苏成芝（第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所,西安７１００３２）关键词ｍＲＮＡ差异展示聚合酶链反应ｍＲＮＡ差异展示（ｍＲＮＡｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ,ＤＤ）是目前筛选差异表达基因最有效的方法,自１...     

水分胁迫下湖北海棠根系脂氧合酶活性与ABA积累的关系

采用无细胞体系（ｃｅｌｌ－ｆｒｅｅ ｓｙｓｔｓｍ）及非离体根,研究了湖北海棠（Ｍａｌｕｓ ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ（Ｐａｍｐａｎ．）Ｒｅｈｄ．）实生幼苗根中脂氧合酶（ＬＯＸ）活性和脱落酸（ＡＢＡ）生物合成及胁迫诱导ＡＢＡ积累的关系。结果表明,水分胁迫（３０％ＰＥＧ处理或０．６ｍｏｌ／Ｌ甘露醇处理）及盐胁迫（０．２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）诱导ＡＢＡ积累的同时,ＬＯＸ活性也上升,两者呈一致关系。ＬＯＸ专一抑制     

橡胶延伸因子基因及3′端非编码区的克隆与序列分析

橡胶延伸因子ＲＥＦ（Ｒｕｂｂｅｒ Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ）是橡胶生物合成中最重要的酶之一,作者利用ＲＥＦ基因序列设计并合成引物。通过提取胶乳总ＲＮＡ用ＲＴ法合成ｃＤＮＡ后,通过ＰＣＲ技术坟民并克隆了ＲＥＦ基因和３′端非编码区,序列测定结果表明,ＲＥＦ基因全长４１４个碱基,编码１３８个氨基酸,３′端非编码区长１１２ｂｐ．与ＧｏｙｖａｅｒｔｓＥ等人发表的序列比较：ＲＥＦ基因同源率为１００％     

r－干扰素对喉癌细胞系HEP－2HLA－DR抗原和增殖细胞核抗原表达的影响

本实验用人重组ｒ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ）作用ＨＥＰ－２细胞后ＨＬＡ－ＤＲ抗原和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的检测来探讨ｒ－干扰素对ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体ＣＲ３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ）和Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ）。以链霉素一生物素技术（ＬＳＡＢ）检测ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原和ＰＣＮＡ表达,结果显示：ｒ－ＩＥＮ诱导ＨＬＡ－ＤＲ抗原和抑制ＰＣＮＡ表达其强弱与ｒ－ＩＦＮ剂量有关。资料提示：ｒ－ＩＦＮ不仅对ＨＥＰ－２细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。