H2O2诱发人成纤维细胞衰老样变化的基因表达谱

以 5 0 μmol/LH2 O2 作用体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞 4次 ,使之出现不可逆的衰老表型 .提取年轻细胞及H2 O2 处理早老细胞的mRNA ,以荧光物Cy3标记年轻细胞cDNA ,Cy5标记H2 O2 处理的细胞cDNA ,并与点有 40 96条人类基因的芯片杂交 ,利用计算机数据处理判断基因是否存在表达差异 .结果显示 :有 12 3种基因的表达变化较显著 ,这些基因参与细胞周期进程、细胞代谢及蛋白质修饰、细胞外基质及细胞骨架蛋白的形成和调节、炎症反应、调节受体酪氨酸蛋白激酶和G蛋白耦联受体信号转导 .     

Sp1和Sp3介导的转录调控

基本转录因子Sp1和Sp3对转录调控区GC盒有很强的亲和力,参与几乎所有细胞功能,包括细胞增殖、凋亡、分化和新生物的转化.但在同一细胞中Sp1和Sp3对不同基因的作用并不相同,二者对基因特异性的转录调控是Sp1和Sp3研究领域的重要问题.近年来发现,Sp1和Sp3自身表达水平、结合的靶序列、磷酸化、糖基化等翻译后修饰,其他蛋白质的结合以及染色质结构与修饰等方面均可影响Sp1和Sp3的转录活性.本文从Sp1和Sp3蛋白参与转录调节的机制以及影响其基因特异性转录活性的诸方面因素这两大侧面,介绍了近年来的最新进展.     

衰老过程中原癌基因及抑癌基因的表达谱

细胞衰老时增殖能力逐渐减退,实质细胞不断减少,是脏器功能衰退的原因之一。原癌基因及抑癌基因与细胞增殖调控密切相关,因而它们与细胞衰老的关系早已引起人们的关注。本文就此进行了概括介绍。总的看来,衰老时多数原癌基因表达降低,抑癌基因表达增强,但亦因细胞的类型而有所差异。     

人胚肺二倍体成纤维细胞端区长度的代龄变化

以体外培养的不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞为实验对象,ＨｅＬａ细胞为对照,分别观察其端区长度随代龄的变化。结果显示年轻２ＢＳ细胞端区长度约９．１３ｋｂ;衰老２ＢＳ细胞端区长度约７ｋｂ,丢失约２ｋｂ。２ＢＳ细胞端区长度随代的增长而缩短。     

小鼠再生肝、Hca腹水型肝癌与正常肝组织核内非组蛋白的电泳比较研究

核内非组蛋白蛋白质(简称NHP)是一类极不均一的蛋白质,代谢上不稳定,转换率较快。有人认为 NHP 与基因表达的调控有关,而癌变过程可能是基因表达的调控失常所致,因此当正常细胞转化为癌细胞时,NHP会发生改变。据文献报道,某些分化旺盛的组织,其NHP亦会发生变化,那么,癌变过程中NHP的变化是否与组织增殖者相同。换言之,癌细胞中NHP的变化是特异的,还是非特异的,似有研究的必要。本文以小鼠 Hca 腹水型肝癌为模型,小鼠正常肝为本底,小鼠再生肝为对照,用十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳——等电聚焦双向电泳为手段,观察比较了三组 NHP 的异同。同时还作了三组     

外源p21~(WAF1)转染对人成纤维细胞凋亡的影响

构建了有义和反义ｐ２１ＷＡＦ１ 逆转录病毒表达载体, 分别经脂质体包裹后转染人胚肺二倍体成纤维细胞（２ＢＳ）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交证实转染细胞中外源ｐ２１ ＷＡＦ１ｃＤＮＡ 已整合入基因组中。与空载体转染细胞相比, 有义转染细胞的ｐ２１ＷＡＦ１ ｍ ＲＮＡ 表达上升; 细胞增殖速度明显减慢; 对丁酸钠诱导凋亡的敏感性降低, 表现在细胞存活率升高, 核ＤＮＡ 梯状断裂片段出现的时间滞后, 断裂片段浓度下降, 流式细胞计检测的凋亡峰面积缩小。而反义转染细胞的ｐ２１ＷＡＦ１ ｍ ＲＮＡ表达下降; 细胞增殖速度较快; 对丁酸钠诱导凋亡的敏感性上升, 有关表现与有义转染细胞相反。说明２ＢＳ细胞内ｐ２１ＷＡＦ１ 的表达量与其被丁酸钠诱导凋亡的能力呈负相关。     

P16降低二倍体成纤维细胞的凋亡敏感性

脂质体介导法分别介导正、反义p16逆转录病毒表达载体转染人胚肺二倍体成纤维细胞 ,经鉴定后 ,分别用Hoechst33342 PI双染、TUNEL、DNAladder分析检测各转染细胞对H2 O2 的敏感性 .结果显示 ,反义p16重组体转染细胞较易凋亡 ,而正义p16重组体转染细胞不易凋亡 .Western印迹检测显示 ,正义p16重组体转染细胞中P2 1表达增强 ,caspase 3的表达减弱 .H2 O2 作用后 ,正义p16重组体转染细胞Bcl 2蛋白水平显著高于反义p16重组体转染细胞 .     

Balb/c小鼠增龄过程中不同脏器线粒体DNA损伤及损伤修复相关基因的变化

为探讨Balb/c小鼠增龄过程中线粒体DNA损伤及其修复基因表达与衰老之间的关系,采用逆转录 多聚酶链反应（RT PCR）方法,检测年轻与老年Balb/c小鼠脑、肝脏和脾脏中线粒体自身编码基因细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ基因（coⅠ）和细胞色素氧化酶亚单位Ⅲ基因（coⅢ）及8 氧鸟嘌呤糖基化酶基因（ogg1）、DNA聚合酶γ（DNA polymeraseγ）基因、胸腺嘧啶乙二醇DNA糖基化酶基因（nth1）等碱基切除修复基因在mRNA水平的变化.用Western印迹方法检测小鼠脾脏中COⅢ和OGG1的蛋白质水平的变化.结果发现,老年小鼠脾脏中coⅠ和coⅢ的mRNA水平比年轻小鼠显著增加（P<0.05）,CO Ⅲ的蛋白质水平亦比年轻小鼠显著升高（P<0.05）;老年小鼠脾脏OGG1的mRNA和蛋白水平上均比年轻小鼠显著增加（P<0.05）.老年小鼠肝脏和脾脏DNA聚合酶γ和NTH1的mRNA水平比年轻小鼠显著升高（P<0.05）.提示线粒体DNA自身编码的基因及碱基切除修复基因的表达失衡可能是Balb/c小鼠衰老的原因之     

基因调控——非组蛋白染色体蛋白质的一种作用

真核细胞基因表达与否受核内非组蛋白染色体蛋白质(NHCP)的调控。核内非组蛋白染色体蛋白质约有450种甚或500种,起调控基因表达的仅是其中磷酸化了的那部分NHCP。在正常细胞转化为癌细胞时,可观察到NHCP的变化。NHCP调控基因表达的机理模式之一,可能是去除组蛋白的阻遏作用。     

正常小鼠肝和腹水型肝癌细胞核内酸溶性蛋白质磷酸化的比较研究

染色质的组成成分,组蛋白和非组蛋白在特异的蛋白激酶作用下可以发生磷酸化修饰,组蛋白和非组蛋白的磷酸化和脱磷酸化可能在染色质的结构,基因表达以及DNA复制中起着重要的作用。本文比较是小鼠腹水型肝癌细胞核和正常小鼠肝细胞核内酸溶性蛋白质及其磷酸化的差异。正常小鼠肝细胞核酸溶性蛋白质的电泳染色图谱有一条明显可见的组蛋白H_1~0蛋白带,而对小鼠腹水型肝癌来说,此带极浅,但在腹水型肝癌细胞核酸溶性蛋白质的电泳染色图谱上可见到表观分子量约为68K的一条蛋白带,而正常小鼠肝未见此带。此外,从电泳胶片~(32)P放射自显影图谱可见腹水型肝癌组蛋白H_1,H_2A和非组蛋白带Ⅱ(MW43K),带Ⅲ(MW.67K)带Ⅳ(M.w.97K)磷酸化程度明显高于正常小鼠肝。