发根农杆菌A4菌株转化苜蓿悬浮培养物

将苜蓿无菌苗下胚轴切割后,在附加２ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织。愈伤组织在附加０５ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ的ＳＨ培养基中悬浮培养。悬浮培养物在用于转化之前,用０４５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇处理１ｈ,然后用０１６ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ洗涤两次。预处理后的悬浮培养物用ＳＨ培养基悬浮（１０ｍｌ／ｇ悬浮培养物）,再加０２ｍｌ农杆菌悬浮液,于２５±２℃共培养２ｄ。共培养的悬浮培养物洗涤后在附加０５ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素的无激素培养基上选择培养。悬浮培养天数、悬浮培养基激素组成和选择培养基种类明显影响转化频率。纸电泳分析表明７０％的转化体可以合成农杆碱和甘露碱。染色体观察显示转化组织细胞存在严重的数目和结构变异     

诸葛菜叶柄原生质体培养再生植株

本文首次报道用诸葛菜(Orychophragmus violaceus)试管苗叶牺为材料分离原生质体,经培养再生了植株。用于原生质体培养的基本培养基为Nitsch培养基,附加1OOmg／L丝氨酸,800mg／L谷氨酰胺和13％的蔗糖,激素成分为0.5mg／L BA,0．5mg／L NAA和lmg／L2,4一D(或0．5mg／L BA和2mg／L 2,4-D)。原生质体的培养密度为2×10⁵／ml。培葬7天的原生质体分裂频率约为40％。在附加O．05mg／L NAA和3mg／L BA的MS分化培养基上,愈伤组织可分化出大量的芽和苗,分化频率为100％。     

草木樨状黄芪甲硫氨酸抗性系的原生质体培养及植株再生

建立了草木樨状黄芪(Astragalus melilotoides Pall．)甲硫氨酸抗性系原生质体再生植株的实验体系。以茎切段诱导的松软愈伤组织为材料,通过酶法分离出大量有活力的原生质体。原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并高频率地分化出再生苗。比较了不同培养基、培养方法和培养密度对原生质体分裂和再生的影响。结果表明,原生质体以3×10⁵/mL的植板密度,采用琼脂糖岛法培养在附加1．0mg／L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0．5mg／L 6-苄氨基嘌呤(6BA)、500mg／L水解酪蛋白、3％蔗糖、0．3mol／L甘露醇的KM_8p培养基中,可获得最佳效果,其细胞分裂频率达38％左右。原生质体培养后仍然保持对甲硫氨酸的抗性,同时对乙硫氨酸表现交叉抗性。     

盾叶薯蓣组织培养技术的优化

以盾叶薯蓣的根状茎、茎段、叶柄、幼叶为材料,进行愈伤组织诱导、分化及再生植株形成的研究。结果表明：盾叶薯蓣不同外植体均能诱导出愈伤组织,其中茎段愈伤组织的诱导率最高;不同激素配比的培养基对愈伤组织的形成有很大的影响：以LS为基本培养基,2,4-D浓度为4．0mg／L、6-BA浓度为1．0mg／L的激素配比诱导率最高,达62．5％;以改良MS为基本培养基,2,4-D浓度为2．0mg／L、6-BA浓度为0．5mg／L的激素配比诱导率最高,达71．4％。筛选到优化的分化培养基为改良MS附加2．0mg／L的6-BA和0．5mg／L的Vc,且能直接诱导出根,并形成完整植株。     

植物生长调节剂对白头翁叶片培养的影响

以白头翁试管苗叶片为外植体,以MS为基础培养基,探讨不同细胞分裂素和生长素对叶片不定芽诱导、愈伤组织的诱导、增殖、再分化的影响。实验结果表明：细胞分裂素TDZ适合于白头翁叶片培养,与生长素搭配使用使叶片发生分化;2,4-D对愈伤组织的诱导能力相对较强。叶片直接诱导不定芽的激素组合为TDZ0．3mg／L＋NAA0．1mg／L;愈伤组织增殖的激素组合为TDZ0．2mg／L＋2,4-D0．2mg／L,将愈伤组织转接到TDZ和NAA组合的培养基上时会再分化。     

中华结缕草(Zoysia sinica Hance)组织培养和再生植株研究

以中华结缕草(Zoysia sinica Hance)成熟种子为外植体在附加2．5mg／L2,4-D、0．25mg／L 6-BA和1～2mg／L VB1的改良MS培养基(MSm)上愈伤组织的诱导率最高为43．0％。愈伤组织的最佳继代培养基为MSm附加0．1mg／L 6-BA和2．0mg／L 2,4-D。在无生长调节物质的MS培养基(MS0)上,外观呈白色到淡黄色、含有密实颗粒的愈伤组织再生率为30％～60％。     

野牛草幼穗愈伤组织的诱导及植株再生

以野牛草[Buchloe dactyloides(Nutt．)Engelm．]幼穗为外植体,建立了愈伤组织诱导、继代培养和植株再生体系。结果表明,雌穗比雄穗难以脱分化形成愈伤组织;小于8mm雄幼穗在2mg／L2,4-D培养基上的愈伤组织诱导率为80．0％～86．8％;添加10mg／L AgNO3对愈伤组织诱导率影响不明显,但可改善愈伤组织质量。2mg／L 2,4-D结合0．1mg／L 6-BA的培养基有利于愈伤组织的继代培养;继代超过3次、继代间隔超过3周,愈伤组织分化能力明显下降。雄穗愈伤组织在含1．0mg／L 6-BA培养基上,弱光条件下分化出芽的频率较高,达31．8％～35．0％;附加3％麦芽糖既可减轻褐化程度,又利于丛生芽的分化。分化苗在1/2MS 0．3mg／L IBA培养基上的生根率为62．5％。     

山茱英的组织培养与植株再生

目的：建立山茱萸的组织培养及植株再生体系。方法：分别以山茱萸的叶片、花柄和花托为材料,进行山茱萸不同外植体的离体培养研究,筛选最佳培养基组成。结果：适宜山茱萸叶片愈伤组织诱导的培养基组合为1／2MS,附加BA2．0mg/L、IBA0,5—1．0mg／L;适宜山茱萸花柄、花托愈伤组织诱导的培养基组合为1／2MS,附加BA1．0mg／L、2,4-D0．5mg／L;在1／2MS附加BA2．0mg／L、IBA0．05mg／L的培养基上,可诱导不定芽的产生;1／2MS附加IBA2．0mg／L的培养基有利于山茱萸试管苗生根。讨论：山茱萸的花托是进行组织培养的最适外植体,白色或翠绿色、结构致密的愈伤组织较易分化产生不定芽。     

影响油菜萝卜胞质不育系恢复材料花药培养的若干因素*

对OguCMS×Ad一6(F₄)的TCF₂代进行了花药离体培养。目的是诱导单倍体植株和纯合的二倍体植株。采集含单核靠边期的花芽,一部分放在4℃条件下黑暗贮存5d,一部分直接解剖培养。探讨了培养基和培养温度对花药培养的影响。结果表明经过5d的4℃低温预处理的花芽,再经过33℃,2d和30℃,6d的培养后花药出愈率明显高于其他条件。另外以B5作为基本培养基附加10％或8％的蔗糖以及0．5mg／L 2,4-D、O 2m/LBA和0．2mg／LNAA对诱导花药出愈有促进作用,在附加5m/L BA和3％蔗糖的MS培养基上,诱导形成了丛生芽。     

牡丹子叶离体再生体系研究

以日本牡丹品种“太阳”为试验材料,研究不同激素组合对牡丹胚初代培养、愈伤组织诱导、分化及植株再生的影响。结果表明：牡丹胚初代培养在1．0mg／L6-BA＋0．25mg／LTDZ的MS培养基上,牡丹胚诱导率最高可达96．1％;剪取无菌子叶转接到附加含有2．0mg／L6-BA＋2．0mg／L2,4-D＋0．2mg／LTDZ的MS培基养上进行愈伤组织培养．诱导率可达100％;愈伤组织在MS＋0．5mg／LKT培养基上分化出芽,分化率达26．6％：不定芽在1／2MS＋1．0mg／LNAA＋4．0mg／LIBA生根培养基上的生根率达27％．     

贯叶金丝桃组织培养的研究

分别以甘肃天水贯叶金丝桃的幼根、幼茎、幼叶为外植体．在1／2MS培养基上附加各类激素,进行贯叶金丝桃的组培实验。研究发现各外植体的增殖速率由高到低分别为幼茎、幼根、幼叶,且得到贯叶金丝桃组培各阶段的最佳培养基成分。诱导愈伤组织的培养基为1／2MS 1．3～1．6mg／L BA 0．2mg／L NAA;培养基1／2MS 1．3～1．6mg／L BA 0．15mg／L NAA有利于不定芽的形成;诱导不定根的培养基为l／2MS IBA0．5～O．8mg／L 蔗糖2．0％。向1／2MS培养基中添加不同的生长素(IAA,IBA,NAA,2．4-D)．在不同浓度梯度的培养基上进行诱导贯叶金丝桃的愈伤组织及不定根的试验,结果表明：生长素IAA,IBA既可诱导愈伤组织,又可以诱导不定根的产生。生长素NAA,2,4-D可诱导产生愈伤组织,但对不定根的诱导作用较差。     

小麦外稃和内稃愈伤组织直接再生小穗和雌蕊状结构的研究

以小麦稃片为外植体,在MS附加不同外源激素的培养基上,成功地从愈伤组织上直接诱导了小穗和雌蕊状结构的再生。实验表明,附加2,4-D 2mg/L和6-BAP 0.1mg/L有利于外植体形成愈伤组织;附加2,4-D 1.0mg/L和6-BAP 2mg/L有利于外稃和内稃愈伤组织直接再生小穗;附加2,4-D 0.01mg/L和6-BAP 1.0mg/L有利于内稃愈伤组织直接再生雌蕊状结构。本文还观察了小穗和雌蕊状结构再生过程的形态学变化,并对诱导花芽和性器官再生的某些要点进行了讨论。     

吉粳88高效再生体系的建立

以吉粳88为材料,通过对不同培养基和激素的筛选,确定最佳的再生体系。结果表明:NMB培养基为吉粳88最适的愈伤组织诱导培养基。通过L₉(3³)正交实验研究最适激素浓度配比,筛选出吉粳88愈伤组织诱导的最佳激素配比为2.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA。在添加2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA的NMB基本培养基条件下,吉粳88的分化率最高,成培苗率也最高。     

2,4-D、BA对人参体细胞胚胎发生过程的影响研究

以人参芽胞、二年生人参根、实生苗（茎、叶）为外植体研究了体细胞胚的发生条件,并对其发生过程中可溶性蛋白、相关酶活性及内源激素的变化等进行了研究。结果表明,诱导愈伤组织的培养基为MS＋2,4-D4．0mg／L＋BA0．2mg／L;在MS＋2,4-D1．0mg／L＋KT0．2mg／L培养基上继代培养,可获得胚性愈伤组织;在无2,4-D的培养基上可诱导出胚状体。将胚状体转入无任何激素的MS培养基上继续培养,之后转入1／2MS培养基上获得再生植株。在体细胞胚胎发生过程中,可溶性多糖和可溶性淀粉含量在早期胚时较低,可溶性蛋白含量、POD及PPO活性在早期胚时最高;IAA在早期胚时期含量最高,在成熟胚时期ABA含量最高,而ABA／IAA比值在成熟胚时较高,利于体细胞胚的发育成熟。     

三叶半夏悬浮培养下的体细胞胚胎发生及植株再生

用三叶半夏幼嫩叶片诱导产生的胚性愈伤组织建立了胚性细胞悬浮系,研究了悬浮培养下体细胞胚胎的发生及植株的再生。结果表明,胚性悬浮细胞在附加1．0mg／L2,4-D、0．2 mg／LBA和300mg／L LH的MS液体培养基中产生大量的球形胚,转入液体分化培养基(MS 0．1 mg／LNAA 0．2 mg／L BA 300 mg／L LH)中进一步发育成心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚。收集成熟胚转移到MS固体分化培养基上培养获得了再生植株。另外还观察到某些成熟胚上产生了许多次生胚。     

麻疯树悬浮细胞系的建立与优化

以麻疯树无菌幼苗为外植体,研究疏松愈伤组织诱导方案及不同培养条件对麻疯树悬浮细胞生长的影响,旨在建立麻疯树悬浮细胞体系.结果表明,麻疯树疏松愈伤组织诱导的最适培养基及激素组合为:MS+2,4-D0.6mg/L+BA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L,此培养基上诱导出的愈伤组织湿润松散,颜色鲜艳.接种愈伤组织进行悬浮培养的液体培养基最适激素组合为:NAA 0.2mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+BA 0.5 mg/L.初代愈伤组织适宜用于悬浮培养,摇床转速应低于120 r/min为宜,这样培养的悬浮细胞分散度最高.培养基中添加500 mg/L水解酪蛋白能有效地促进悬浮细胞的生长.悬浮细胞振荡培养过程中悬浮细胞生长的时间进程为起始培养的第5天前,细胞增殖十分缓慢;第5-11天期间生长迅速;第13天后基本停止生长.在上述优化培养条件下,麻疯树悬浮细胞系增长速率最快,细胞生长状态最佳.     

人参培养细胞的单细胞克隆

培养基组成成分能影响人参培养细胞单细胞克隆的植板率。Ms培养基中2,4－D和KT需要一个适合的浓度比才能有效地促进细胞克隆的形成,其最佳浓度组合是2,4－D1．5mg／L和KT O．5mg／L。适合人参细胞克隆形成的NH₄N0₃浓度是400mg／L,CaCl₂.2H₂O浓度是750mg／L。向培养基中补加适量的琥珀酸、精氨酸和维生素等都能明显提高植板率。通过优化培养基的组成成分,细胞克隆的植板率可增加到2.34倍。悬浮培养两周左右的细胞平板培养最有利克隆形成,当细胞植板密度低于4×10³个细胞／ml时,几乎没有克隆形成。     

黄连细胞培养物中小檗碱的分离与鉴定

用黄连幼叶切块,接种在含1．0～2．0mg／L 2,4-D和0．1mg／LKT的6．7-v固体培养基上,诱导形成愈伤组织。选择较松散的愈伤组织转入液体悬浮培养,获得游离细胞和细胞聚集体。通过平板培养和细胞株的筛选．选择小檗碱含量较高的细胞株。经35次转代培养后,进行固体、液体培养。收集悬浮培养细胞进行化学提取和分离,获得黄色晶体,经TLc、UV、IR、MS鉴定分析为小檗碱,与天然植物提取分离的小檗碱具有相同的生理活性。     

两种茄子子叶诱导胚状体和植株再生

植物名称:茄子(Solanum melongena)品种:远景茄,荷兰茄。材料类别:子叶、下胚轴。培养条件:(1)种子培养基:1/2 SH+1％蔗糖,(2)发生愈伤组织的培养基:MS+2,4-D1mg/L(单位下同),(3)愈伤组织分化培养基:MS附加各种激素,(4)胚状体苗培养基:无激素的MS培养基。培养温度25±2℃,光照强度1200～1400lx,每天照光10～12小时。生长与分化情况:1.愈伤组织的诱导:经常规消毒的种子播于培     

费尔干猪毛菜愈伤组织的诱导、分化及植株再生体系的建立

探讨了植物生长调节剂、外植体等因子对费尔干猪毛菜（Salsola fergartica Drob．）愈伤组织诱导、分化与植株再生的影响。结果表明：2,4-D与6-BA组合使用时,在一定浓度范围内均有愈伤组织产生,最佳的诱导培养基为MS＋2,4-D2．0mg／L＋6-BA0．2mg／L,下胚轴为诱导愈伤组织的最佳材料;愈伤组织继代培养较好的培养基为MS＋NAA0．1mg／L＋6-BA1．0mg／L;愈伤组织不定芽分化培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．05mg／L;根分化的培养基为1／2MS＋IBA0．2mg／L,且生根率可达72％。以带柄子叶为外植体,诱导丛生芽的最佳分化培养基为MS＋6-BA1．0mg／L,再生频率可达90．74％。