用凝集素和非同位素标记底物测定核心α－1，6－岩藻糖转移酶及其应用

报道了一个不需同位素和ＨＰＬＣ的α－１,６－岩藻糖转移酶（α１,６ＦｕＴ,又称核心岩藻糖转移酶）的测定法,包括从正常人血浆提纯运铁蛋白,消化成带有天冬酰胺（Ａｓｎ）的二天线Ｎ－糖链,去除外端唾液酸和半乳糖后,用生物素酰胺乙酰基团标记其Ａｓｎ,并以此生物素衍生物标记的Ａｓｎ－七糖的Ｎ－糖链为受体底物,ＧＤＰ－Ｌ－岩藻糖为供体底物,用ＬＣＡ柱吸附法分离岩藻糖化后的产物,再用ＨＲｐ－Ａｖｉｄｉｎ交联物与柱上带有生物素的产物结合,此ＨＲＰ－Ａｖｉｄｉｎ－生物素。岩藻糖化产物从柱上洗脱后测定ＨＲＰ活力可代表α１,６ＦｕＴ活力。此法在较宽的范围内,产物量与酶量和反应时间成正比．人肝细胞癌、亚硝胺诱发大鼠肝癌后期或用佛波酯（ＰＭＡ）处理人肝癌细胞后,α１,６ＦｕＴ增高,而用视黄酸或ｄｂ－ｃＡＭＰ处理人肝癌细胞后,则该酶活力降低。     

α1,3—岩藻糖基转移酶及其相关产物

α１,３┐岩藻糖基转移酶及其相关产物陈继华陈惠黎（上海医科大学卫生部糖复合物重点实验室,上海２０００３２）关键词α１,３－岩藻糖基转移酶Ｌｅｗｉｓ（Ｌｅ）系抗原细胞表面的糖蛋白或糖脂的一部分含有外链岩藻糖（Ｆｕｃｏｓｅ,Ｆｕｃ）化的乙酰乳糖胺糖链,常...     

神经节苷脂（Gangliosides）对人红细胞膜Ca~（2＋）－Mg~（2＋）ATPase的影响

神经节苷脂（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）是红细胞膜Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的一种激活剂,这种激活作用也是依赖于Ｃａ~（２＋）存在。在２００μｍｏｌ／ＬＣａ~（２＋）存在的反应体系中,１００μｇ／ｍＬＧａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的激活作用最大,为基本酶活性的１５０％以上。实验还发现ＣａＭ拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）、粉防已碱（Ｔｅｔ）等也同样抑制Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ的这种激活作用。其抑制的ＩＣ_（５０）值为２５μｍｏｌ／Ｌ和３０μｍｏ１／Ｌ;而此浓度下抑制剂存在的反应体系中,对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的基本活性影响不大。     

GM_3、GD_3作用下SMMC－7721肝癌细胞内磷脂酰肌醇（1，4，5）三

外源性ＧＭ３（１０ｎｍｏｌ／ｍＬ）、ＧＤ３（１ｎｍｏｌ／ｍＬ）可使ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌培养细胞内钙浓度呈快速的短暂升高,其到达峰值时间为４５秒,一次作用后,内钙水平于２－３ｍｉｎ内恢复至对照水平。在一定时间间隔中连续几次加入ＧＭ３或ＧＤ３后内钙水平的变化表明,ＧＭ３所引起的［Ｃａ２＋］ｉ的增加依赖于内质网钙贮的释放和细胞外钙的流入;而ＧＤ３增加［Ｃａ２＋］ｉ与此二系统无关。进一步研究表明,在细胞内钙达峰值时,１０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＭ３可使ＩＰ３（１,４,５）浓度增加９．３倍,ｃＡＭＰ浓度增加８２％;１ｎｍｏｌ／ｍＬＧＤ３反使Ｉｐ３浓度增加１．２倍,提示ＧＭ３、ＧＤ３升高内钙的不同机制。     

高血压大鼠红细胞膜Ca~（2＋），Mg~（2＋）─ATP酶对Ca~（2＋）反应的变化及Mg~（2＋）的作用

本实验观察了正常及高血压大鼠红细胞膜Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶对不同浓度Ｃａ２＋及Ｍｇ２＋的反应。结果表明：（１）在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）,此酶最适反应的Ｃａ２＋浓度为１０－６ｍｏｌ／Ｌ;ＷＫＹ大鼠为１０－４ｍｏｌ／Ｌ;两肾一环型肾性高血压大鼠（ＲＨＲ）为１０－７ｍｏｌ／Ｌ,Ｗｉｓｔａｒ大鼠为１０－４ｍｏｌ／Ｌ,Ｃａ２＋高于以上各相应浓度时该酶活性受到抑制;（２）作为该酶激动剂的Ｍｇ２＋有其最适激活浓度,在ＷＫＹ大鼠、ＲＨＲ及Ｗｉｓｔａｒ大鼠均为４．５ｍｏｌ／Ｌ;（３）高浓度Ｍｇ２＋（３６．０ｍｏｌ／Ｌ）可以逆转高浓度Ｃａ２＋对该酶的抑制作用。以上结果表明,底物Ｃａ２＋浓度的变化对Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的催化活性影响极大,该酶活性的促发及维持必须有适宜浓度的Ｍｇ２＋。高血压时此酶对Ｃａ２＋的敏感性增高,且Ｍｇ２＋对酶保护作用更为明显。本结果提示,胞内高浓度Ｃａ２＋不仅是高血压发生的原因之一,并可能与其发展及恶化有关。     

人肝癌中Lewis抗原,α1,3岩藻糖转移酶与转移倾向

为了测定人原发性肝癌中Ｌｅｗｉｓ抗原和α１,３岩灌糖转移酶（ＦｕｃＴ）亚型的表达,及其与癌栓形成和转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１表达的关系,用免疫组化法测Ｌｅｗｉｓ抗原,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法测ＦｕｃＴ和ＮＭ２３－Ｈ１的ｍＲＮＡ。结果表明,肝癌组织中ＳＬｅ＾ｘ、Ｌｅ＾ｘ、ＳＤＬｅ＾ｘ、ＳＬｅ＾ａ４和Ｌｅｗｉｓ抗原表达的 率均在８０％左右。其中ＳＬｅ＾ｘ表达较多,Ｌｅ＾ｘ和ＳＬｅ＾ａ较少,ＳＤＬｅ＾ｘ     

RU486对兔输卵管平滑肌的收缩效应

应用肌肉机械－电换能器和Ｇｉｌｓｏｎ生理记录仪,观察ＲＵ４８６对假孕４ｄ兔离体输卵管平滑肌的收缩效应。结果显示：（１）ＲＵ４８６可直接作用输卵管平滑肌,使其收缩频率增加,而未明显改变收缩张力及振幅,与在体肌内注射ＲＵ４８６观察到的结果相似;（２）ＲＵ４８６部分抑制ｃａ~（２＋）诱发的平滑肌收缩活动,它还与Ｖｅｒａｐａｍｉｌ诱发的抑制效应有协同作用,与ＮＥ诱发的收缩张力有拮抗作用,而对Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ诱发的效应未产生任何影响。以上结果表明,ＲＵ４８６对输卵管平滑肌的作用似乎是改变细胞内游离Ｃａ（２＋）的结果,可能干扰Ｃａ（２＋）的流入、或／和内质网Ｃａ（２＋）释放以及Ｃａ（２＋）－Ｉｐ３信息传递机制。     

钙调素拮抗剂对人肺癌细胞增殖抑制及与cAMP信号系统相关性之初探

对钙调素（ＣａＭ）拮抗剂—三氟拉嗪（ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ,ＴＦＰ）在人肺癌细胞ＰＬＡ８０１的增殖抑制中的作用和ＣａＭ与ｃＡＭＰ信号系统水平的变化进行了研究．用５、１０、１５和２０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理人肺癌细胞时观察到ＴＦＰ在抑制细胞内ＣａＭ活性的同时,抑制了细胞的增殖．药物处理的细胞在软琼脂中形成的集落数减少且明显小于对照组细胞．使用流式细胞光度术分析细胞周期的结果表明：１０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理抑制了Ｇ１期细胞向Ｓ期的转移．当用１０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ作用细胞５ｍｉｎ时,细胞内ｃＡＭＰ水平达到正常水平的１．８倍,直到３ｈ仍明显高于正常水平．同时,ｃＡＭＰ依赖的ＰＫＡ的活性在加药后１５ｍｉｎ上升到正常水平的２．８倍,直到加药３ｈ．活性仍保持较高水平,结果表明：钙调素功能的抑制,提高了ＰＬＡ－８０１细胞内ｃＡＭＰ系统的水平,Ｃａ２＋－ＣａＭ和ｃＡＭＰ－ＰＫＡ两个信号系统的协调作用,抑制了细胞的增殖     

PAF对肺内小动脉平滑肌细胞TXA_2，PGI_2乃Ca~（2＋）－ATPase的影响

本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ），观察了外源性血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）、ＢＮ５２０２１（ＰＡＦ受体拮抗剂）、吲哚美辛、维拉帕米对ＰＡＳＭＣｓ产生血栓素Ａ_２（ＴｘＡ_２）、前列环素（ＰＧＩ_２）及对细胞膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的影响。结果表明：（１）基础状态下ＰＡＳＭＣｓ存在花生四烯酸（ＡＡ）代谢。（２）外源性ＰＡＦ通过受体后途径激活环加氧酶促进ＡＡ代谢致ＴＸＡ_２及ＰＧＩ－２增加，ＴＸＡ_２／ＰＧＩ_２比值无明显变化。（３）外源性ＰＡＦ能直接抑制Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力。（４）维拉帕米可逆转ＰＡＦ抑制ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的效应。     

外源性神经节苷脂对人－肝癌培养细胞内钙的作用及其方式

本工作采用荧光探针Ｆｕｒａ－２ＡＭ观察了外源性神经节苷脂ＧＭ３和ＧＤ３对ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌培养细胞钙的影响,证明ＧＭ３和ＧＤ３均能升高细胞内钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）,但程度上有极大差异。１０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＭ３或１．０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＤ３可使［Ｃａ２＋］ｉ上升高是明显,与对照相比［Ｃａ２＋］ｉ分别增加２１５～２５０％和４２％。进一步用Ｖｅｒａｐａｍｉｌ阻断钙通道和内质网钙释放、去除细胞外Ｎａ＋以抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换以及去除细胞外Ｃａ２＋在无外钙内流等系统观察了ＧＭ３和ＧＤ３的作用方式,结果提示ＧＭ３升高［Ｃａ２＋］ｉ的机制是一个同时增加内质网钙释放、激活钙通道并伴有质膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶激活的综合结果;而ＧＤ３则主要抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换系统。     

慢性低氧性肺动脉高压鼠原代培养肺动脉平滑肌细胞内钙的检定

用共聚焦激光扫描显微镜观察经Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ负荷的慢性低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）大鼠原代培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）的形态与内游离Ｃａ２＋浓度的动态变化。结果表明：原代培养的（ＨＰＨ）大鼠的ＰＡＳＭＣ与正常大鼠相比,①细胞内游离Ｃａ２＋浓度增加,但其收缩性减弱;②随培养日数增加,咖啡因（Ｃａｆｅｉｎ）所致的细胞内储钙池－肌浆网的Ｃａ２＋释放作用逐渐减弱,直至消失;③血管紧张素Ⅱ（ＡＴ－Ⅱ）升高细胞内钙作用明显增强;④部分呈大红色细胞对多种缩血管物质敏感性增强。结果提示,ＨＰＨ大鼠的ＰＡＳＭＣ的内钙明显增加,其调节机制处于紊乱状态。     

表皮生长因子，生长抑素对人早孕胎盘hCG分泌及基因表达的影响

观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）,生长抑素（ＳＳ）对体外培养的人早孕绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ含量的影响。发现ＥＧＦ可明显刺激绒毛分泌ｈＣＧ,显著增加ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ含量,生长抑素虽然对绒毛ｈＣＧ分泌及ｈＣＧ　β－ｍＲＮＡ含量无明显影响,但可抑制ＥＧＦ,ＧｎＲＨ刺激的ｈＣＧ分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ水平。提示ＥＧＦ,ＳＳ在妊娠早期参与了ｈＣＧ分泌的调节。     

脑缺血诱导Ca~（2＋）／CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ自身磷酸化的抑制作用

脑缺血诱导Ｃａ~（２＋）／ＣａＭ依赖性蛋白激酶Ⅱ自身磷酸化的抑制作用张光毅,唐放鸣,赵昇皓（徐州医学院生化教研室,２２１００２）关键词脑缺血;Ｃａ~（２＋）／ＣａＭ依赖性蛋白激酶Ⅱ;自身磷酸化兴奋住氨基酸通过其突触后膜受体导致ｏｄｅ内流,不仅具有诱导和...     

细菌还原Au3+制备金催化剂的研究

从不同来源的细菌菌株筛选获得一株吸附还原Ａｕ３＋较强的菌株Ｄ０１,经鉴定为巨大芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｍｅｇａｔｈｅｒｉｕｍ）Ｄ０１。菌株Ｄ０１在Ａｕ^３＋浓度６００ｍｇ／Ｌ下仍能较好生长。从电化学反应表明,该菌具有较强的还原力,它能将金催化剂的前驱体Ａｕ^３＋／αＦｅ２Ｏ３还原成具有催化ＣＯ＋Ｏ２→ＣＯ２的高分散度的Ａｕ０／αＦｅ２Ｏ３催化剂     

缺氧心肌收缩蛋白Ca~（2＋），Mg~（2＋）－ATP酶活性研究

将大鼠置于模拟海拔８ｋｍ高度的低压舱内缺氧１周及缺氧后空气中常氧恢复１周和２周,观察了左右心室功能、心肌肥厚、心肌收缩蛋白含量及其Ｃａ￣（２＋）,Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰ酶活性的动态变化。结果表明,８ｋｍ缺氧１周后肺动脉压及右心室收缩压明显升高,左右心室±ｄｐ／ｄｔｍａｘ及收缩指数明显降低。左右心室肌明显肥厚,心肌收缩蛋白Ｃａ￣（２＋）,Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰ酶活性明显减低。缺氧后常氧恢复１和２周后,左右心室功能逐渐恢复达到或接近正常水平,心肌肥厚逐渐减轻或恢复正常,心肌收缩蛋白Ｃａ￣（２＋）,Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰ酶活性也逐渐升高。因此说明：心肌收缩蛋白Ｃａ￣（２＋）,Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰ酶活性的改变是心功能变化的重要生化基础之一,它的减低是缺氧心肌对环境的代偿适应。     

用ELISA法检测2.5S鼠神经生长因子

鼠颌下腺提纯的２５ＳＮＧＦ免疫家兔,获得兔抗ＮＧＦ抗体,研制出鼠２５ＳＮＧＦＥＬＩＳＡ检测试剂盒,该试剂盒灵敏度小于１ｎｇ／ｍｌ,在６７０～０８４ｎｇ／ｍｌ范围内,线性良好,ｒ＝０９９。与大鼠、小鼠及人血浆无非特异反应,在大鼠血浆中,ＮＧＦ样品回收率在９１％～１０７％之间,变异系数小于１０％（ｎ＝４）。结果表明：本试剂盒操作简便,灵敏度高,特异性强,适合药代动力学研究及生产过程中的ＮＧＦ检测。     

Ca~（2＋）与含β－桐酸磷脂脂质体的相互作用

通过测定含β－桐酸（β－ＥＳＡ）的双棕榈酰磷脂酰胆碱（ＤＰＰＣ）脂质体在加入Ｃａ（２＋）后浊度,粒度及内包荧光物释放的变化,研究了Ｃａ（２＋）与ＤＰＰＣ／β－ＥＳＡ脂质体的相互作用,结果表明,ＤＰＰＣ／β－ＥＳＡ脂质体是一类对外加Ｃａ（２＋）敏感的脂质体,Ｃａ（２＋）的作用首先是引起脂质体间的集聚然后使脂质体融合;此时加速脂质体内包荧光物的释放。     

脂蛋白（a）的研究进展──生物化学与分子生物学方面

脂蛋白（ａ）［Ｌｐ（ａ）］是一种与低密度脂蛋白类似的脂蛋白,其特殊处在于多含一种具明显多态性的糖蛋白──载脂蛋白（ａ）［Ａｐｏ（ａ）］。Ａｐｏ（ａ）与血浆纤溶酶原有很大同源性。Ｌｐ（ａ）由肝合成,其分解可能主要经非特异途径。Ａｐｏ（ａ）大小及血浆Ｌｐ（ａ）浓度主要由Ａｐｏ（ａ）基因决定。Ｌｐ（ａ）易沉积于血管壁,并可促进平滑肌细胞生长及抑制纤维蛋白溶解,这可能是其促动脉粥样硬化和血栓形成的机理所在。Ｌｐ（ａ）的生理功能尚不清楚。     

急性毛细支气管炎并心衰患儿血小板活化因子，血小板源生长因子的表达及临床意义

目的：探讨血小板活化因子（PAF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及血小板源生长因子（PDGF）水平变化在毛细支气管炎并急性心衰的变化,探讨它们在该病的发病中的作用。方法：58例心衰组患儿分别于治疗前和临床症状消失后采用双抗体夹心ABC．ELISA法检测PAF、TNF-α及PDGF血清含量,设正常对照组40例比较。结果：心衰组PAF治疗前为370．57±23．6ng／L,明显高于对照组的56．78±19．6ng／L,组间比较差异具有非常显著性意义（t=15．95,P〈0．001）;治疗后恢复至49．63±14．5ng／L,与正常对照差异不明显;治疗前后比较,差异具有非常显著性意义（t=3．70,P〈0．001）。TNF-α治疗前为457．4±40．5ng／L,明显高于对照组的148．8±21．6ng／L,组间比较差异具有显著性意义（t=2．135,P〈0．05）;治疗后恢复至162．6±37．61ng／L,与正常对照差异不明显;治疗前后比较,差异具有非常显著性意义（t=7．25,P〈0．01）。PDGF治疗前为596．23±199．43）ng／L,较对照组259．76±69．58ng／L增高,组间比较,差异具有非常显著性意义（t=-25．52,P〈0．01）;治疗后降为272．83±116．96ng／L,较治疗前明显恢复,组间比较差异均具有显著性意义（t=7．66,P〈0．01）。结论：结果表明,PAF、TNF-α、PDGF作为炎症介质不仅参与心衰的发病过程,还提示细胞外基质的异常在心衰发病学中的重要地位。     

钙离子对辣根过氧化物酶同工酶C的溶液构象的影响

运用荧光光谱方法研究了脱辅基的辣根过氧化物酶同工酶Ｃ。结果表明：（１）ａｐｏ－ＨＲＰ（Ｃ）与其他“Ｂ”类蛋白质不同,有明显的Ｔｙｒ荧光;（２）低浓度变性剂（〈２ｍｏｌ／Ｌ脲或０．２ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍）能增强酶的Ｔｒｐ荧光,但并不改变光谱特性;（３）进一步增加变性剂浓度则使Ｔｒｐ残基暴露于水溶液中,荧光强度略有降低,荧光谱红移;（４）Ｃａ＾２＋络合剂ＥＤＴＡ对色氨酸荧光的影响与低浓度变性剂相同。有意思