人胚肺成纤维细胞株纤连蛋白结构域N─糖链结构研究

本文应用明胶、肝素亲和层析二步法首先纯化了人胚肺成纤维细胞培养液的纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｏｔｈｅ,Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,然后用胰糜蛋白酶消化纯化的Ｆｎ所获得的酶解波,经分离分别得到明胶结合片段和肝素结合片段,再应用凝集素－ＨＲＰ染色的Ｗｅｓｔｅｎ转移电泳法研究糖链结构,结果证实：１．Ｆｎ中明胶结合片段（４４ｋｄ）中含有二天线和多天线复杂型糖链,并接有平分型ｇｌｃＮＡｃ糖基、核心力Ｆｕｃ。２肝素结合片段（３０ｋｄ）只含有二天线复杂型糖链,不含平分型ＧｌｃＮＡｃ糖基及核心Ｆｕｃ．     

人肝癌中Lewis抗原,α1,3岩藻糖转移酶与转移倾向

为了测定人原发性肝癌中Ｌｅｗｉｓ抗原和α１,３岩灌糖转移酶（ＦｕｃＴ）亚型的表达,及其与癌栓形成和转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１表达的关系,用免疫组化法测Ｌｅｗｉｓ抗原,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法测ＦｕｃＴ和ＮＭ２３－Ｈ１的ｍＲＮＡ。结果表明,肝癌组织中ＳＬｅ＾ｘ、Ｌｅ＾ｘ、ＳＤＬｅ＾ｘ、ＳＬｅ＾ａ４和Ｌｅｗｉｓ抗原表达的 率均在８０％左右。其中ＳＬｅ＾ｘ表达较多,Ｌｅ＾ｘ和ＳＬｅ＾ａ较少,ＳＤＬｅ＾ｘ     

用凝集素和非同位素标记底物测定核心α－1，6－岩藻糖转移酶及其应用

报道了一个不需同位素和ＨＰＬＣ的α－１,６－岩藻糖转移酶（α１,６ＦｕＴ,又称核心岩藻糖转移酶）的测定法,包括从正常人血浆提纯运铁蛋白,消化成带有天冬酰胺（Ａｓｎ）的二天线Ｎ－糖链,去除外端唾液酸和半乳糖后,用生物素酰胺乙酰基团标记其Ａｓｎ,并以此生物素衍生物标记的Ａｓｎ－七糖的Ｎ－糖链为受体底物,ＧＤＰ－Ｌ－岩藻糖为供体底物,用ＬＣＡ柱吸附法分离岩藻糖化后的产物,再用ＨＲｐ－Ａｖｉｄｉｎ交联物与柱上带有生物素的产物结合,此ＨＲＰ－Ａｖｉｄｉｎ－生物素。岩藻糖化产物从柱上洗脱后测定ＨＲＰ活力可代表α１,６ＦｕＴ活力。此法在较宽的范围内,产物量与酶量和反应时间成正比．人肝细胞癌、亚硝胺诱发大鼠肝癌后期或用佛波酯（ＰＭＡ）处理人肝癌细胞后,α１,６ＦｕＴ增高,而用视黄酸或ｄｂ－ｃＡＭＰ处理人肝癌细胞后,则该酶活力降低。     

α-1,6岩藻糖基转移酶的研究进展

当细胞糖蛋白的糖链发生α-1,6岩藻糖基化时,这种改变直接关系到细胞一系列的生物学特性。本就α-1,6岩藻糖基转移酶编码基因及其蛋白质的结构与表达特征,其底物蛋白的糖链结构,与肿瘤及白细胞黏附缺陷症等疾病的关系诸方面予以综述。     

人胎肝唾液酸转移酶基因的克隆及测序

根据已克隆的唾液酸转移酶的保守区的序列,以人胎肝ｍＲＮＡ为模板扩增出１５０ｂｐ的片段并测序。其中一个片段（ｓ３８）与已克隆的唾液酸转移酶的活性中心有５７％～９７％的同源性。根据ｓ３８的序列合成寡核苷酸并标记后用作探针筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库。从文库中分离了一个编码α２,３唾液酸转移酶的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ序列含一个编码３４０个氨基酸的开放读框,推导的氨基酸序列与人颌下腺Ｇａｌβ１,３ＧａｌＮＡｃα２,３唾液酸转移酶相同,与猪颌下腺α２,３唾液酸转移酶有８３２％的同源性。表明从人胎肝ｃＤＮＡ文库中分离的ｃＤＮＡ所编码的蛋白为Ｇａｌβ１,３ＧａｌＮＡｃα２,３唾液酸转移酶     

人胚肺成纤维细胞株纤连蛋白结构域N—糖链结构研究

本文应用明胶、肝素亲和层析二步法首先纯化了人胚肺成纤维细胞培养液的纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,然后用胰糜蛋白酶消化纯化的Ｆｎ所获得的酶解液,经分离分别得到明胶结合片段和肝素结合片段,再应用凝集素－ＨＲＰ染色的Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳法研究糖链结构,结果证实：１．Ｆｎ中明胶结合片段（４４ｋｄ）中含有二天线和多天线复杂型糖链,并接有平分型ＧｌｃＮＡｃ糖基、核     

综述: 糖基转移酶超家族在肿瘤转移中的作用

蛋白质的糖基化修饰主要包括N-连接糖基化、O-连接糖基化和糖基磷脂酰肌醇锚定连接．与核酸和蛋白质不同,糖链的合成过程并不遵循传统的基因信息传递的中心法则,主要由一系列催化糖苷键形成的糖基转移酶完成．异常糖基化修饰被认为与恶性肿瘤的发生发展和临床预后密切相关．研究表明,糖基转移酶的表达及其糖链结构的异常可通过调节肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用,继而影响肿瘤转移的关键步骤,如上皮间质转化(E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白)、细胞的移动性(整合素β1和α5)、侵袭(基质金属蛋白酶MMPs)、浸润(唾液酸化Lewis抗原sLeX和sLeA)．本文主要就唾液酰基转移酶、岩藻糖基转移酶和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶等三大糖基转移酶家族的结构和生物学功能及其在肿瘤转移中的作用作一综述,以期为肿瘤转移的预测和诊断提供新思路．     

糖基转移酶超家族在肿瘤转移中的作用

蛋白质的糖基化修饰主要包括N-连接糖基化、O-连接糖基化和糖基磷脂酰肌醇锚定连接.与核酸和蛋白质不同,糖链的合成过程并不遵循传统的基因信息传递的中心法则,主要由一系列催化糖苷键形成的糖基转移酶完成.异常糖基化修饰被认为与恶性肿瘤的发生发展和临床预后密切相关.研究表明,糖基转移酶的表达及其糖链结构的异常可通过调节肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用,继而影响肿瘤转移的关键步骤,如上皮间质转化(E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白)、细胞的移动性(整合素β1和α5)、侵袭(基质金属蛋白酶MMPs)、浸润(唾液酸化Lewis抗原sLeX和sLeA).本文主要就唾液酰基转移酶、岩藻糖基转移酶和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶等三大糖基转移酶家族的结构和生物学功能及其在肿瘤转移中的作用作一综述,以期为肿瘤转移的预测和诊断提供新思路.     

老兵又谱新传——新的糖基化方式、新的功能

在自然界中 ,糖类分子无所不在。虽然仍是那么一些单糖 ,但是在新的糖基转移酶作用下 ,以新的糖基化方式出现 ,就产生了新的功能。1.引子传统的概念是糖基转移酶定位在内质网和高尔基体中 ,它们的功能是合成糖苷键 ,在一组糖基转移酶的协同下 ,可以形成糖链。后来在哺乳动物精子的表面发现了半乳糖基转移酶 ,人们认识到糖基转移酶及其相关的糖链还可以参与细胞之间的识别和粘着。此后不仅在精子表面 ,而且在神经细胞表面也发现了一些糖基转移酶[1] 。在细胞质中发现Ｏ ＧｌｃＮＡｃ的糖基化及其对应的糖基转移酶和糖苷水解酶以后 ,极大地拓…     

Factors Affecting Electro－Fusion and Electro－Activation In Serial Nuclear Transplantation In Goat（Carpa hircus） Embryo

ＦａｃｔｏｒｓＡｆｆｅｃｔｉｎｇＥｌｅｃｔｒｏ－ＦｕｓｉｏｎａｎｄＥｌｅｃｔｒｏ－ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＩｎＳｅｒｉａｌＮｕｃｌｅａｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎＩｎＧｏａｔ（Ｃａｒｐａｈｉｒｃｕｓ）ＥｍｂｒｙｏＷＡＮＧＹｕ－ｇｅ（王玉阁）;ＺＯＵＸ...     

日本续断中新五糖皂甙的结构及其核磁共振光谱

从日本续断（Ｄｉｐｓａｃｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ Ｍｉｑ．）根的乙醇提取物中分得一个新的三萜皂甙,其结构被鉴定为３．－Ｏ－〖β－Ｄ－吡喃葡萄糖（１→）〗〖α－吡喃鼠李糖（１→３）〗－β－Ｄ－吡喃葡萄３９糖（１→３）－α－Ｌ吡喃鼠李糖（１→２）－α－吡喃阿拉伯糖－齐墩酸。采用一维ＳＥＭＤＹ谱和转坐标ＮＯＥ差谱核磁共振新技术相结合的方法,对糖体间和９糖体与甙元间的连接顺连接位置进行了研究。该方法的结果     

滇重楼地上部分的配糖体

从滇重楼ＰａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａＳｍ．ｖａｒ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ（Ｆｒ．）Ｈ－Ｍ,地上部分,分离出４个微量的配糖体,经光谱分析和化学降解证明其化学结构分别为２５Ｓ－异钮替皂甙元－３－Ｏ－α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→２）［α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→４）］－β－Ｄ－葡萄吡喃甙（Ａ）,２６－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基－纽替皂甙元－３－Ｏ－α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→２）［α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→４）－β－Ｄ－葡萄吡喃糖甙（Ｂ）,山奈酚－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→６）－β－Ｄ－葡萄吡喃甙（Ｃ）,７－Ｏ－α－Ｌ－鼠李吡喃糖基－山奈酚－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→６）－β－Ｄ－葡萄糖甙（Ｄ）。     

人胎盘纤连蛋白N糖链结构研究

分离纯化了人胎盘纤连蛋白（Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,纯化Ｆｎ仍保持其搞原性,得率为３８．７％。根据植物凝集素识别专一糖链结构的原理,应用斑点印迹法,亲和层析法和Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳研究糖链结构,结果证实：１．人胎盘Ｆｎ分子中含有复杂型Ｎ糖链（包括二天线和大于二天线的结构）以及高甘露糖型和／或杂合型Ｎ糖链;复杂型Ｎ糖链中含有平分型ＧｌｃＮＡｃ,糖链末端也可连有唾液酸;２．胰糜蛋白酶水解而获得的明胶结合片段（４４ｋＤ）含有二天线和多天线复杂型糖链,也可接有平分型ＧｌｃＮＡｃ;３．肝素结合片段（３０ｋＤ）以及明胶、肝素均不结合的Ｆｎ片段不含有多天线复杂型Ｎ糖链。     

洞庭湖滩血吸虫易感地带保水生态灭螺的试验研究

洞庭湖滩血吸虫易感地带保水生态灭螺的试验研究张元培,朱南屏（湖南省水产科学研究所沅江４１３１００）（湖南省华容县血防站４１４２００）ＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＥＩｉｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＳｎａｉｌ（Ｏｎｃｏｍｅｌａｎｉａ）ｂｙＲｃｔａｉｎｉｎｇＷａｔｅｒｉｎＢｌｏｏｄＦｌｕｋｅ（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ）Ｓｕｓｃｅｐｔｉ－ｂｌｅＲｅｇｉｏｎｓＡｒｏｕｎｄＤｏｎｇｔｉｎｇＬａｋｅ￥．ＺｈａｎｇＹｕａｎｐｅｉ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｉｓｈｅｒｉｅｓＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＨｕｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ,Ｙｕａｎｊｉａｎｇ４１３１００）,ＺｈｕＮａｎｂｉｎｇ（ＳｔａｔｉｏｎｏｆＳｎａｉｌＦｅｖｅｒＣｏｎｔｒｏｌｏｆＨｕａｒｏｎｇＣｏｕｎｔｙ,ＨｕｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ,４１４２００）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｌｏｇｙ,１９９３,１２（３）：２３－２５．Ｉｎｂｌｏｏｄｆｌｕｋｅ（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ）ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅｒｅｇｉｏｎｓｏｆｔｈｅｌａｋｅｂｅａｃｈ,ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｏｆｗａｔｅｒｉｎｕｎｄａｔｅｄｅｌｉｍｉ－ｎａｔｉｎｇｓｎａｉｌ（Ｏｎｃｏｍｅｌａｎｉａ）ａｒｅｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｂｙｂｕｉｌ     

基于单细胞超高通量筛选的α-1,2-岩藻糖基转移酶定向进化

2’-岩藻糖基乳糖在婴幼儿配方奶粉、保健品和医药等产品开发方面极具应用价值。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori NCTC11639)来源的α-1,2-岩藻糖基转移酶(FutC)是目前合成2’-岩藻糖基乳糖的重要生物催化剂,但是天然酶存在异源表达量低、催化活性差等缺陷。针对α-1,2-岩藻糖基转移酶定向进化过程中缺少高通量筛选方法的问题,发展了基于荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)的FutC超高通量筛选方法。对FutC进行了定向进化实验,通过对FutC的随机突变库进行了3轮筛选,从库容量为5.4×10⁵突变文库中成功筛选出活力提高2.6倍、2.7倍、3倍的3种突变体(K282E,K102E,R105C),证明了此筛选方法的有效性。本研究为α-1,2-岩藻糖基转移酶的分子活性改造奠定了良好基础。     

基于单细胞超高通量筛选的α-1,2-岩藻糖基转移酶定向进化

2’-岩藻糖基乳糖在婴幼儿配方奶粉、保健品和医药等产品开发方面极具应用价值。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori NCTC11639)来源的α-1,2-岩藻糖基转移酶(FutC)是目前合成2’-岩藻糖基乳糖的重要生物催化剂,但是天然酶存在异源表达量低、催化活性差等缺陷。针对α-1,2-岩藻糖基转移酶定向进化过程中缺少高通量筛选方法的问题,发展了基于荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)的FutC超高通量筛选方法。对FutC进行了定向进化实验,通过对FutC的随机突变库进行了3轮筛选,从库容量为5.4×10⁵突变文库中成功筛选出活力提高2.6倍、2.7倍、3倍的3种突变体(K282E,K102E,R105C),证明了此筛选方法的有效性。本研究为α-1,2-岩藻糖基转移酶的分子活性改造奠定了良好基础。     

小鼠α1，2岩藻糖基转移酶基因的克隆及表达

本文报告小鼠GDP岩藻糖：β半乳糖苷α1,2-岩藻糖基转移酶（α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT）基因的克隆,并进行功能鉴定。利用RT—PCR方法克隆小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因编码区MFUT-II,测序后将其插入表达载体pcDNA3．1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3．1-MFUT-II;采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过对底物特异性比较研究酶的性质;应用Northern印迹杂交法研究基因在小鼠组织中的表达情况;应用Southern印迹杂交法分析基因存在状态。结果证实MFUT-II为小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因家族的新成员。含有一个完整的开放读码框。可编码347个氨基酸。其估计分子质量为39kDa,和小鼠日及Sec1基因具有序列同源性。分别与人类Se基因（79．O％）、大鼠Ratrrs（89％）基因、兔Rabbit FT-III基因（77％）具有较高的序列同源性。用MFUT-II基因转染的COS-7细胞具有α1,2-FT活性。MFUT-II可在多种组织中产生3．5kb大小的mRNA转录产物。基因Southern印迹杂交分析结果显示：基因MFUT-II仅为一个拷贝。这些结果证明MFUT-II为小鼠的Se基因。     

仙茅根茎中的配糖体

从仙茅（ Ｃｕｒｃｕｌｉｇｏ ｏｒｃｈｉｏｉｄｅｓＧａｅｒｔｎ） 根茎中分离到７ 个化合物, 经光谱分析推定其化学结构分别为： ２, ６ － 二甲氧基苯甲酸（Ａ） ; 苔黑酚葡萄糖甙（Ｂ） ; 仙茅素Ａ （Ｃ） ; 仙茅甙（Ｄ） ; ２４ｓ, ３β, １１α, １６β, ２４ － 四羟基环阿尔廷醇－ ３ － Ｏ－ α－ Ｌ－ 鼠李吡喃糖基（１ →２） － β－Ｄ－ 葡萄吡喃糖甙（Ｅ） ; ２４ｓ, ３β, １１α, １６β, ２４ － 四羟基环阿尔廷醇－ ３－ Ｏ－ β－ Ｄ－ 葡萄吡喃糖基（１ →２） － β－ Ｄ－ 葡萄吡喃糖甙（Ｆ） 和胡萝卜甙（Ｇ） 。Ｆ为一新甙。     

生态农业与乡村经济持续发展

生态农业与乡村经济持续发展张壬午,计文瑛,孙鸿良（天津农业部环境保护研究所,３００１９１）（中国农科院,北京１０００８１）ＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＳｕｓｔａｉｎａｂｌｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＲｕｒａｌＥｃｏｎｏｍｙ￥．ＺｈａｎｇＲｅｎｗｕ;ＪｉＷｅｎｙｉｎｇ（Ａｇｒｏ－ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＰｒｏｔｅｃｌｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅ,Ｔｉａｎｊｉｎ３００１９１）,ＳｕｎＨｏｎｇｌｉａｎｇ（ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｃｓ,Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｌｏｇｙ,１９９３,１２（２）：１９—２０．ＴｈｉｓｐａｐｅｒｂｒｉｅｆｌｙｐｒｅｓｅｎｔｓｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｅｃｏｌｏｇｉｃａｌａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅｉｎＣｈｉｎａａｎｄｃｏｍｐａｒｅｓｗｉｔｈｔｈｅ＇＇ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｒｕｒａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ＇＇（ＳＡＲＤ）ｐｕｔｆｏｒｗａｒｄｂｙＦＡＯ,Ｃｈｉｎａ’ｓｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅａ－ｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅｉｓｎｏｔｏｎｌｙａｎｉｎｇｅｎｉｏｕｓ     

人肝癌组织中a（1，3）FuT－Ⅲ，Ⅴ．Ⅵ基因表达的研究

人肝癌组织中ａ（１,３）ＦｕＴ－Ⅲ,Ⅴ．Ⅵ基因表达的研究／／范俊,谢天培,刘彦军,胡匀,顾天爵（上海医科大学基础医学院生化教研室,２０００３２;第二军医大学东方肝胆研究所,２００４３３）关键词ＰＣＲ;ａ（１,３）岩藻糖转移酶（ＦｕＴ）;人肝癌;原位杂...