表皮生长因子,生长抑素对人早孕胎盘hCG分泌及其因表达的影响

观察了表皮生长因子,生长抑素对体外培养的人早孕绒毛膜促性腺激素分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ含量的影响,发现ＥＧＦ可明显刺激绒毛分泌ｈＣＧ,显著增加ｈＣＧ β－ｍＲＮＡ含量。生长抑素虽然对绒毛ｈＣＧ分泌及ｈＣＧβｍ－ＲＮＡ含量无明显影响,但可抑制ＥＧＦ,ＧｎＲＨ的ｈＣＧ分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ。提示ＥＧＦ,ＳＳ在妊娠早期参与了ｈＣＧ分泌的调节。     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

优化mRNA翻译起始区提高人粒－巨噬细胞集落刺激因子在E．coli中的表达

人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）是一种重要的造血生长因子．利用基因重组技术构建两个ｈＧＭ－ＣＳＦ的Ｅ．ｃｏｌｉ表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对ｍＲＮＡ翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ））,另一个为未突变的对照（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ））．经酶切电泳、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的１４．６ｋＤｈＧＭ－ＣＳＦ,但ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ）的表达水平较ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ）提高了１．２６倍,占菌体总蛋白的１６．９％．ｍＲＮＡ翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔＧ从原来的－１０．２提高至－９．４Ｋｃａｌ,ＡＵＧ从部分配对状态变为非配对状态．     

优化mRNA翻译起始区提高人粒—巨噬细胞集落刺激因子在E.coli…

人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）是一种重要的造血生长因子。利用基因重组技术构建两个ｈＧＭ－ＣＳＦ的Ｅ．ｃｏｌｉ表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对ｍＲＮＡ翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ））,另一个为未突变的对照（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ））。经酶切电泳、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ等未突变的对照（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ））。经酶切电泳、Ｄ     

二甲基苯蒽对小鼠皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶和转化生长因子βmRNA水平的影响

本文利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术研究了完全致癌物二甲基苯蒽（ＤＭＢＡ）对小鼠表皮鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ和转化生长因子β（ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ水平的影响。ＤＭＢＡ在１５μｇ和９００μｇ剂量下一次涂用于小鼠皮肤,可使表皮ＯＤＣｍＲＮＡ和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达增加。ＯＤＣｍＲＮＡ为单一的２．０ｋｂ大小的条带,其表达在在３６ｈ时最为明显。而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ大小为２．５ｋｂ和１．９ｋｂ,其表达在３６ｈ时最高,到４８ｈ几乎降至正常,但在７２ｈ又有增加。ＯＤＣ和ＴＧＦ－β可能在ＤＭＢＡ诱癌过程中起重要作用。     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用＾３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣ ＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＧＤＦ）、ＰＧＤＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或     

转化生长因子－β对细胞外基质基因表达调节作用的研究进展

转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）是一类具有激素样活性的多肽生长因子,许多正常和转化细胞均可合成并分泌ＴＧＦ－β,ＴＧＦ－β既可刺激细胞的增殖,又可刺激细胞的分化,对细胞进行双向调节。细胞外基质（ＥＣＭ）对细胞的增殖和分化也具有控制作用,ＥＣＭ主要成份的ｍＲＮＡ表达可被ＴＧＦ－β诱导和调节,而且两者具有一定的相关性。提示ＴＧＦ－β可能是通过ＥＣＭ实现其对细胞的双向调节。     

二甲基苯蒽对小鼠皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶和转化生长因子βmRNA水平…

本文利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术研究了完全致癌物二甲基苯蒽（ＤＭＢＡ）对小鼠表皮鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ和转化生长因子β（ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ水平的影响。ＤＭＢＡ在１５０μｇ和９００μｇ剂量下一次涂用于小鼠肝肤,可使表皮ＯＤＣ ｍＲＮＡ和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达增加。ＯＤＣ ｍＲＮＡ为单一的２．０ｋｂ大小的条带,其表达在在３６ｈ时最为明显。而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ大小为２．５ｋｂ和１．９ｋｂ,     

低氧对肺动脉内皮细胞PDGF—B链释放及平滑肌细胞生长的影响

应用蛋白ｄｏｔｂｌｏｔ技术检测了低氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）和常氧内皮细胞条件培养液（ＮＥＣＣＭ）内ＰＤＧＦ相对含量,并利用［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法和流式细胞术观察了ＨＥＣＣＭ和ＮＥＣＣＭ及加入特异ＰＤＧＦ抗体对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）生长的影响。结果表明,ＨＥＣＣＭ中的ＰＤＧＦ含量明显高于ＮＥＣＣＭ;ＨＥＣＣＭ能明显增强ＰＡＳＭＣ内ＤＮＡ合成,促进ＰＡＳＭＣ从Ｇｏ／Ｇ１期进入Ｓ期;当预先加入ＰＤＧＦ－Ｂ链抗体时,则会明显地抑制ＨＥＣＣＭ对ＰＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成,阻止ＰＡＳＭＣ从Ｇｏ／Ｇ１期进入Ｓ期。结果提示,低氧时ＰＡＳＭＣ增殖与肺动脉内皮细胞分泌释放ＰＤＧＦ增加有关     

脂多糖诱导人外周血单核细胞产生粒细胞集落刺激因子

用聚蔗糖－泛影葡胺分离液从正常人新鲜抗凝的外周血中分离出单核细胞。在组织培养条件下以大肠杆菌脂多糖（ＬＰＳ）诱导单核细胞,使其产生人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦｍＲＮＡ和ｈＧ－ＣＳＦ。不同时间取出经诱导的细胞和培养上清液,分别用逆转录－合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法和双单克隆抗体ＥＬＩＳＡ夹心法检测细胞的转录产物和表达产物。结果表明：加入ＬＰＳ后的第４到第１２小时,单核细胞内有显著量ｈＧ－ＣＳ     

酪氨酸蛋白激酶和蛋白激酶C对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V的双重调控

在人肝癌细胞７７２１中研究了酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的激活剂［分别为表皮生长因子（ＥＧＦ）和佛波酯（ＰＭＡ）］和各种蛋白激酶抑制剂对Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ｖ（ＧｎＴ－Ｖ）活力的影响,以探讨ＴＰＫ和ＰＫＣ对ＧｎＴ－Ｖ的调节。结果发现,ＥＧＦ或ＰＭＡ处理细胞４８ｈ后,ＧｎＴ－Ｖ的活力明显增高;蛋白激酶的非特异性抑制剂槲皮素和染料木黄酮（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）在抑制ＴＰＫ和ＰＫＣ的同时,抑制ＧｎＴ－Ｖ的基础活力,并完全阻断ＥＧＦ或ＰＭＡ对ＧｎＴ－Ｖ的增高作用;ＴＰＫ的特异性抑制剂Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ－２５和ＰＫＣ的特异性抑制剂Ｄ－鞘氨醇分别应用时,各自只能部分地取消ＥＧＦ或ＰＭＡ对ＧｎＴ－Ｖ的诱导。但当Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ－２５和Ｄ－鞘氨醇同时加入培养基中则可完全阻断ＥＧＦ或ＰＭＡ对ＧｎＴ－Ｖ的诱导激活。蛋白质合成抑制剂环己亚胺和蛋白激酶抑制剂作用相仿,不但可抑制ＧｎＴ－Ｖ的基础活力,也可完全消除ＥＧＦ或ＰＭＡ对ＧｎＴ－Ｖ的激活。以上结果提示ＥＧＦ或ＰＭＡ通过蛋白激酶调节ＧｎＴ－Ｖ的酶蛋白合成,并且ＧｎＴ－Ｖ受到膜性ＴＰＫ和ＰＫＣ的双重调节,其中ｍ－ＴＰＫ较ｍ－ＰＫＣ更为重要。     

老年大鼠单核／巨噬细胞分泌和表达肿瘤坏死因子增多

为研究老年时肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）分泌及表达的改变,在内毒素（ＬＰＳ）１．０μｇ／ｍｌ刺激大鼠单核／巨噬细胞后,用酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）测定培养液中ＴＮＦ－α含量,用半定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＫ）测定ＴＮＦ－αｍＲＮＡ。同时测定培养液中一氧化氮（ＮＯ）和前列腺素Ｉ２（ＰＧＩ２）的含量。结果显示：老年鼠ＴＮＦ－α分泌量及其ｍＲ－ＮＡ明显高于青年鼠。ＮＯ产量在老年鼠与青年鼠之间无明显差异。老年鼠ＰＧＩ２分泌明显低于青年鼠。由于ＰＧ能抑制ＴＮＦ－α释放,从而推测,ＰＧＩ２产生能力的降低可能是老年大鼠单核／巨噬细胞ＴＮＦ－α分泌量明显高于青年鼠的原因之一。     

内皮素—1对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞产生孕酮的影响

本文用离体细胞体外孵育法研究了内皮素－１（ＥＴ）对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞孕酮生成的影响及其作用机理。结果发现,ＥＴ能显著抑制ｈＣＧ刺激下的孕酮产生,抑制作用在浓度为１０－８ｍｏｌ／Ｌ时,即有显著意义（Ｐ＜０．０５,ｎ＝６）,至１０－７ｍｏｌ／Ｌ时则有非常显著的意义（Ｐ＜０．０１,ｎ＝６）;不同浓度ＥＴ（１０－７—１０－７ｍｏｌ／Ｌ）,对颗粒细胞基础孕酮的产生无明显影响。进一步研究表明,ＥＴ对ｈＣＧ刺激下孕酮生成的抑制作用,在用免抗人内皮素抗血清（ＥＴ－Ａ）１：１０００及ｃＡＭＰ后能明显被逆转。实验中还观察到,ＥＴ使颗粒细胞ＬＨ／ｈＣＧ受体数下降,亲和力降低。本文结果提示,ＥＴ可能为卵巢内的一种局部调节肽,通过作用于ＥＴ受体,干扰ＬＨ／ｈＣＧ受体功能和ｃＡＭＰ生成而抑制颗粒细胞孕酮的产生。     

转化生长因子—β对细胞外基质基因表达调节作用的研究进展

转化生长因子－β是一类具有激素样活性的多肽生长因子,许多正常和转化细胞均可合成并分泌ＴＧＦ－β,ＴＧＦ－β既可刺激细胞的增殖,又可刺激细胞的分化,对细胞进行双向调节。细胞外基质对细胞的增殖和分化也具有控制作用,ＥＣＭ主要成份的ｍＲＮＡ表达可被ＴＧＦ－β诱导和调节,而且两者具有一定的相关性。提示ＴＧＦ－β可能是通过ＥＣＭ实现其对细胞的双向调节。     

PRO－LONG涂膜处理对后熟香蕉果实乙烯形成以及其它有关生理变化的影响

香蕉（ＭｕｓａａｃｕｍｉｎａｔａＣｏｌｌａｃｖ．ＤｗａｒｆＣａｖｅｎｄｉｓｈ）果实采后以商业上推荐使用的１．５％Ｐｒｏ－ｌｏｎｇ溶液处理,贮藏于２０℃和７５％相对湿度下,分别测定果实的ＡＣＣ含量、ＭＡＣＣ含量、ＥＦＥ酶活性、乙烯释放、叶绿素含量的变化和果实的硬度变化．结果表明,ＰＲＯ－ＬＯＮＧ处理延缓了香蕉果实果皮的叶绿素降解、硬度的下降以及乙烯释放的增加．在后熟过程中,处理果实的ＡＣＣ含量发生积累．ＡＣＣ含量的高峰在乙烯释放高峰和ＥＦＥ酶活性高峰之前出现．与对照比较,处理果实的ＡＣＣ含量和ＥＦＥ酶活性的高峰延迟了５ｄ出现．在后熟过程中,以Ｐｒｏ－ｌｏｎｇ处理果肉四片,其ＥＦＥ酶活性受部分抑制（抑制率为１９．４５％至４０．５１％）．果实ＭＡＣＣ含量在贮藏起初处于一个较显著水平,随着后熟的发展而逐步增加,但与ＡＣＣ含量的明显增加相比变化是微小的．我们的研究进一步阐明了ＰＲＯ－ＬＯＮＧ涂膜对香蕉果实后熟的影响主要是通过减少氧的供给,部分地抑制了ＥＦＥ酶活性,延缓了乙烯的形成和释放,从而延长了后熟过程．     

妊娠早期人胎盘绒毛血管紧张素的研究

用生化提取、放射免疫测定及离体培养技术研究了妊娠早期人胎盘绒毛血管紧张素的含量与 变化,观察了血管紧张素Ⅱ对早孕胎盘人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）分泌的影响,并用ＡＢＣ法探 讨了血管紧张素Ⅱ的免疫组织化学定位。结果表明：妊娠６～１０周的人胎盘绒毛组织均检测到血管 紧张素,其含量随妊娠周龄增加而升高;离体培养的６～９周人胎盘绒毛亦能分泌血管紧张素,培 液中血管紧张素的水平与妊娠周龄呈平行关系;然而妊娠６～１０周母血中血管紧张素的含量无明 显变化。免疫组织化学结果指出早孕胎盘绒毛有ＡⅡ免疫阳性反应物质．免疫阳性物主要分布在合 体滋养层细胞内;在离体培养条件下,血管紧张素Ⅱ能刺激离体培养的人胎盘绒毛ｈＣＧ的分泌,其 受体阻断剂 ［Ｓａｒ１Ｉｉｅ８］ ＡｎｇⅡ（１０－８～１１－７ｍｏｌ／Ｌ）对 ｈＣＧ分泌无影响,当 ［Ｓａｒ１　Ｉｉｅ８］ ＡｎｇⅡ浓度 达１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,绒毛ｈＣＧ分泌量显著降低。     

大鼠卵巢绒毛膜促性腺激素受体在CHO中的表达和扩增

本文报道了利用二氢叶酸还原酶放大系统将大鼠ＬＨ／ｈＣＧ受体（记为Ｆ－ｈＣＧＲ）及其胞外肽段（记为Ｔ－ｈＣＧＲ）在中国苍鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中的表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,Ｆ－ｈＣＧＲ为一条蛋白质带,其表观分子量为９２ｋｄ,而Ｔ－ｈＣＧＲ为３５ｋｄ和３７ｋｄ两条带。表达受体对其配基ｈＣＧ表现出高的亲合力,Ｆ－ｈＣＧＲ的解离常数为７×１０－９ｍｏｌ／Ｌ,Ｔ－ｈＣＧＲ为６．４×１０－９ｍｏｌ／Ｌ。表达Ｆ－ｈＣＧＲ的转染ＣＨＯ细胞可结合１２５Ｉ－ｈＣＧ,而表达Ｔ－ｈＣＧＢ者不结合１２５Ｉ－ｈＣＧ。这提示Ｆ－ｈＣＧＲ主要存在于细胞质膜表面上。表达Ｆ－ｈＣＧＲ的转染ＣＨＯ细胞能刺激。ｃＡＭＰ的形成,而表达Ｔ－ｈＣＧＲ者不能刺激ｃＡＭＰ形成。免疫荧光定位结果表明,Ｔ－ｈＣＧＲ主要分布于质膜的细胞质侧以及胞内其他一些细胞器膜上。用免疫亲和层析可以得到纯化的Ｔ－ｈＣＧＲ。     

hGM－CSF基因及其调控研究进展

人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子基因表达受到转录调控与转录后调控。５＇非转录区的一些顺式调控成分,如ＣＡＴＴ（Ａ／Ｔ）重复序列,富含ＧＣ序列,ＣＫ－１、ＣＫ－２、ｋＢ特异序列与可诱导的ＣｓＡ敏感增强子成分等在转录水平上调控ｈＧＭ－ＣＳＦ的表达。３＇非翻译区有一６２ｂｐ富含ＡＵ序列,这与ｍＲＮＡ的稳定性相关,在翻译水平调控ｈＧＭ－ＣＳＦ的表达,细胞因子与一些刺激因子通过不同的机制作用于ｈＧＭ－ＣＳＦ基     

人βNGFDNA地高辛标记探针的制备及在小鼠颌下腺中的基因表达

本研究在国内首先制备非放射性地高辛标记的人βＮＧＦＤＮＡ（ｄｉｇ－ｈ－βＮＧＦＤＮＡ）探针,并应用原位杂交技术结合计算机图像分析,对ＮＧＦｍＲＮＡ在ＩＣＲ雄性小鼠颌下腺中的分布进行了观察。实验结果显示ＮＧＦｍＲＮＡ主要分布于颌下腺纹状管（ＳＳＴ）和颗粒曲管（ＧＣＴ）的上皮细胞,其细胞基底部胞质呈杂交反应强阳性,细胞顶部呈弱阳性,图像分析显示二者具有显著性差异。本实验制备的ｄｉｇ－ｈ－βＮＧＦＤＮＡ探针灵敏度高达０．１ｐｇ／ｍｌ,并且特异性强,分辨力高,重复性好,是研究ＮＧＦｍＲＮＡ基因表达和调控的有力工具。     

提高外淋巴钙浓度对耳蜗电位的影响

本实验以人工外淋巴灌流方式,提高豚鼠耳蜗外淋巴液钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ＰＬ）,观察蜗内直流电位（ＥＰ）和耳蜗电图（ＥＣｏｃｈＧ）的变化,ＥＣｏｃｈＧ包括听神经复合动作电位（ＣＡＰ）、耳蜗微音电位（ＣＭ）。结果可见：高钙灌流明显抑制ＣＡＰ幅值,延长同一声强下（９０ｄＢＳＰＬ）Ｎ１－峰潜伏期,但不改变ＣＭ的幅值及总和ＥＰ（Ｇ－ＥＰ）。高钙灌流降低了ＥＰ对噪声的给－撤声反应（ＥＰ－ＯＮ,ＥＰ－ＯＦＦ）和缺氧所得到的最大负ＥＰ（Ｎ－ＥＰ）绝对值。本文分析了外淋巴高钙影响耳蜗电位的可能机制。