高血压大鼠红细胞膜Ca^2＋,Mg^2＋—ATP酶对Ca^2＋反应的变...

本实验观察了正常及高血压大鼠红细胞膜Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶对不同浓度Ｃｕ＾２＋Ｍｇ＾２＋的反应。结果表明：（１）在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）,此酶最适反应的Ｃａ＾２＋浓度为１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ;ＷＫＹ大鼠为１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ;两肾一环型肾性高血压大鼠（ＲＨＲ）为１０＾－７ｍｏｌｇ／Ｌ,Ｗｉｓｔａｒ大鼠为１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ;Ｃａ＾２＋高于以上各相应浓度时该酶活性受到抑制;（２）作为该酶     

神经节苷脂（Gangliosides）对人红细胞膜Ca~（2＋）－Mg~（2＋）ATPase的影响

神经节苷脂（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）是红细胞膜Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的一种激活剂,这种激活作用也是依赖于Ｃａ~（２＋）存在。在２００μｍｏｌ／ＬＣａ~（２＋）存在的反应体系中,１００μｇ／ｍＬＧａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的激活作用最大,为基本酶活性的１５０％以上。实验还发现ＣａＭ拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）、粉防已碱（Ｔｅｔ）等也同样抑制Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ的这种激活作用。其抑制的ＩＣ_（５０）值为２５μｍｏｌ／Ｌ和３０μｍｏ１／Ｌ;而此浓度下抑制剂存在的反应体系中,对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的基本活性影响不大。     

缺氧心肌收缩蛋白Ca~（2＋），Mg~（2＋）－ATP酶活性研究

将大鼠置于模拟海拔８ｋｍ高度的低压舱内缺氧１周及缺氧后空气中常氧恢复１周和２周,观察了左右心室功能、心肌肥厚、心肌收缩蛋白含量及其Ｃａ￣（２＋）,Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰ酶活性的动态变化。结果表明,８ｋｍ缺氧１周后肺动脉压及右心室收缩压明显升高,左右心室±ｄｐ／ｄｔｍａｘ及收缩指数明显降低。左右心室肌明显肥厚,心肌收缩蛋白Ｃａ￣（２＋）,Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰ酶活性明显减低。缺氧后常氧恢复１和２周后,左右心室功能逐渐恢复达到或接近正常水平,心肌肥厚逐渐减轻或恢复正常,心肌收缩蛋白Ｃａ￣（２＋）,Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰ酶活性也逐渐升高。因此说明：心肌收缩蛋白Ｃａ￣（２＋）,Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰ酶活性的改变是心功能变化的重要生化基础之一,它的减低是缺氧心肌对环境的代偿适应。     

神经节苷脂GM_3对肌质网Ca~（2＋）－ATP酶活力的调节

研究了神经节苷脂ＧＭ_３参入肌质网膜后Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活力的变化,结果表明：ＧＭ_３参入肌质网膜后,对肌质网Ｃａ~（２＋）ＡＴＰ酶活性（ＡＴＰ水解活力与转运活力）有明显的激活作用．当参入的ＧＭ_３浓度为８μｍｏｌ／Ｌ、参入时间为１２０ｍｉｎ、温度为３０℃时,对Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶的激活作用最大．     

Mg~（2＋）对线粒体H~＋－ATP酶的阿霉素敏感性的拮抗效应──H~＋－AT

用生物膜的拆离与重建技术,研究了Ｍｇ２＋对阿霉素（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ,ＡＤＭ）抑制猪心线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶及其重建脂酶体（Ｌ·Ｈ＋－ＡＴＰ酶）活性的影响。用胆酸盐透析方法将Ｈ＋－ＡＴＰ酶在大豆磷脂脂质体上重建。实验结果表明,重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶的ＡＤＭ的敏感性较仅纯化而未重建者明显增加,这提示ＡＤＭ的抑制作用依赖于磷脂。但是,在有Ｍｇ２＋（１ｍｍｏｌ／Ｌ）条件下重建的Ｈ＋－ＡＴＰ酶对ＡＤＭ的敏感性较无Ｍｇ２＋者却又显著降低,这提示Ｍｇ２＋对ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用具有拮抗效应。Ｍｇ２＋的这种拮抗效应是与其在透析重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶过程中诱导脂酶体的磷脂的物理状态的改变相关的。所得实验结果对于阐明ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用机理与磷脂的相关性提供了较直接的实验证据。     

用荧光指示剂Fura－2测定正常和电刺激后蛙肌胞浆自由Ca~（2＋）浓度

蛙半腱肌肌束负载Ｆｕｒａ－２／ＡＭ后,可用荧光信号Ｆ３４０、３８０ｎｍ波长比值（Ｒ３４０／３８０）反映胞浆内游离Ｃａ２＋浓度（〔Ｃａ２＋〕）。利用这一技术,我们发现长时间电刺激后的骨骼肌〔Ｃａ２＋〕,高于未刺激肌,Ｒ３４０／３８０分别为１．４９±０．５４（ｎ＝１０）和１．０２±０．２６（ｎ＝１０）。加入Ｃａ２＋载体伊屋诺霉素（ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ,１μｍｏｌ／Ｌ）后,正常肌与电刺激肌〔Ｃａ２＋〕,均上升,但刺激肌上升幅度低,持续时间短。说明电刺激至力竭后,细胞内有较多的Ｃａ２＋负载。增加细胞外Ｃａ２＋浓度至１５ｍｍｏｌ／Ｌ,〔Ｃａ２＋〕ｉ下降。而给予Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换阻断剂奎尼丁（１０４ｍｏｌ／Ｌ）后,正常肌〔Ｃａ２＋〕ｉ上升,刺激肌〔Ｃａ２＋〕ｉ下降。结果提示：Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换是正常骨胳肌外排Ｃａ２＋的途径之一;而长时间肌肉活动则可能使细胞膜Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换方式改变,从而导致力竭肌〔Ｃａ２＋〕ｉ上升。     

稀土对肌质网Ca~（2＋）－ATP酶活性的影响

研究了镧、轧、镱及四种配合物对Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性的影响．结果表明,低浓度的Ｌａ~（３＋）,Ｇｄ~（３＋）和Ｙｂ~（３＋）对肌质网Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶有激活作用;随着其浓度的增加,它们对酶活性的抑制程度增大;而Ｌａ~（３＋）,Ｇｄ~（３＋）和Ｙｂ~（３＋）对纯化的Ｃａ２~（＋）－ＡＴＰ酶则只有抑制作用;Ｇｄ─Ｎ─乙酰─缬氨酸和Ｙｂ─丙氨酰代丙氨酸配合物对肌质网膜和纯化的Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性的影响与Ｇｄ~（３＋）及Ｙｂ~（３＋）类似,但其激活程度和抑制程度比Ｇｄ~（３＋）及Ｙｂ~（３＋）小;Ｇｄ─ＤＴＰＡ和Ｙｂ－ＤＴＰＡ对Ｃａ２~（＋）－ＡＴＰ酶活性基本无影响。     

低氧适应对缺氧性心功能损伤的保护作用及其机制探讨

缺氧对心脏功能的影响与缺氧的严重程度、发生速度及时程有关。本实检比较了急性缺氧与阶梯适应性缺氧对Ｗｉｓｔａｒ大鼠心脏功能及心肌收缩蛋白Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的不同影响,结果表明,低氧适应组与急性缺氧组比较,左右心室的±ｄｐ／ｄｔｍａｘ、收缩指数等心功能指标均有显著的改善,心肌收缩蛋白Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性也显著高于急性缺氧组。从而说明,动物经低氧适应后,心脏的代偿功能得到充分发挥,从面减轻缺氧对心脏的损伤。心肌收缩蛋白Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的改善可能是心脏代偿机制的生物化学基础之一。     

精胺和Mg~（2＋）对tRNA~（Ile）圆二向色谱的影响

由于精胺（ｓｐｅｒｍｉｎｅ）能特异地刺激哺乳动物ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）的氨基酰化,本文用纯化的牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）观察了精胺和Ｍｇ（２＋）对ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱的影响。结果显示：Ｍｇ（２＋）可使牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱峰向短波方向偏移２ｎｍ,波峰为２６３ｎｍ,峰值被增大约１０％,ΔθＭｇ（２＋）＝２．３×１０３ｄｅｇ·ｃｍ２／ｄｍｏｌ;而精胺使牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱峰减少４０％,Δθｓｐｅｒｍｉｎｅ＝１×１０（－４）ｄｅｇ·ｃｍ２／ｄｍｏｌ;精胺和Ｍｇ（２＋）对肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）－ＩｌｅＲＳ复合物或ＩｌｅＲＳ的ＣＤ光谱基本无影响。表明Ｍｇ（２＋）和精胺可影响牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）的构象。实验同时以酵母ｔＲＮＡ（Ｐｈｅ）和Ｅ·ｃｏｌｉｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）作为对照。     

内源无机磷酸盐对叶绿体Mg~（2＋）－ATP酶功能的调节

用ＳＴＮ（含蔗糖,０．４ｍｏｌ／Ｌ;ＮａＣｌ,０．０１ｍｏｌ／Ｌ和Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ,０．０２ｍｏｌ／Ｌ,ｐＨ７．４）提取的菠菜叶片叶绿体再用ＳＴＮ洗涤后,它的内源无机磷酸盐含量急剧减少,其Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶水解ＡＴＰ的能力明显下降。进一步研究表明：叶绿体的内源无机磷酸盐含量减少会使反映叶绿体类囊体膜内外△ｐＨ变化的９－氨基吖啶的荧光猝灭减少,并加速光激活态ＡＴＰ酶的暗失活。     

亲和层析纯化肌质网Ca~（2＋）－ATP酶

建立了一种亲和层析纯化肌质网Ｃａ￣（２＋）－ＡＴＰ酶的方法．用非离子型去污剂Ｃ＿（１２）Ｅ＿８溶解肌质网,再通过反应红－１２０琼脂糖亲和层析柱使肌质网Ｃａ￣（２＋）－ＡＴＰ酶纯度从粗品中的６５％提高到９９％,并具有较高ＡＴＰ水解活性．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,为电泳纯．     

羟墓自由基引起神经细胞［Ca~（2＋）］i增高的机制和Ebselen的抑制作用

用Ｆｕｒａ－２显微荧光测量技术研究了羟基自由基对单个皮层神经细胞内游离钙离子浓度［Ｃａ２＋］ｉ影响和硒化合物Ｅｂｅｌｅｎ对［Ｃａ２＋］ｉ的抑制作用。结果表明羟基自由基的作用首先引起胞内［Ｃａ２＋］ｉ以时间常数τ＝３８９５．４±５０７．２Ｓ速度缓慢增加,然后加入了以τ＝４２０．６±１２２．０Ｓ的外钙大量涌入。钙通道阻断剂、疏基还原剂、疏基还原制和自由基清除剂对羟基自由基损伤作用的影响提示外钙的大量涌入部分与通道的开放有关,疏基损伤在羟基自由基引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高中起着重要的作用。具有类谷胱甘肽过氧化酶活性的小分子硒化合物Ｅｂｓｅｌｅｎ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ和１０－６ｍｏｌ／Ｌ）抑制羟基自由基引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高,推测它可以抑制钙库的释放或促进内钙的外排以及抑制外钙的流入。     

高血压大鼠不同血管平滑肌肌球蛋白磷酸化和脱磷酸化酶的变化

本文比较了正常和高血压大鼠不同动脉血管肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和依赖Ｃａ＾２＋的钙调素磷酸酶（Ｃａ＾２＋／ＣａＭ－ＰＰ）活性的变化。结果表明：在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）不同血管ＭＬＣＫ的活性不同,依次为主动脉（Ａ）〉尾动脉（ＣＡ）〉肠系膜动脉（ＭＡ）;而在ＷＫＹ大鼠,该酶在不同血管的活性依次为Ａ〈〈ＣＡ〈〈ＡＭ。在ＷＫＹ大鼠,ＭＡ Ｃａ＾２＋／ＣａＭ－ＰＰ活性明显高于ＳＨＲ。在肾性高血压大鼠     

玉米素对叶绿体耦联因子Mg~（2＋）－ATPase活力的调节

用２μｇ／ｍｌ玉米素溶液预处理叶绿体或在光活化前于活化液中加入２μｇ／ｍｌ玉米素溶液,观察到玉米素能促进叶绿体膜上耦联因子ＤＴＴ光活化Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ及Ｍｇ２＋ＧＴＰａｓｅ的活力．且对ＧＴＰａｓｅ的促进比例常较ＡＴＰａｓｅ的大些。王米素对ＯＧ活化可溶性ＣＦ１Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力同样表现出促进作用。用玉米素预处理ＣＦ１－β亚基（含微量ＣＦ１－α亚基）也观察到它能促进ＣＦ１－β亚基催化的Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力。这些结果表明,玉米素在ＣＦ１上的作用部位至少有一个在β亚基或α．β亚基交界处调节其催化功能的。     

鸭肫平滑肌肌球蛋白经α－糜蛋白酶轻微酶解及其Mg~（2＋）－ATP酶性质的改变

用α－糜蛋白酶对鸭肫平滑肌肌球蛋白进行有限酶解,使肌球蛋白重链的电泳双带变成单带。酶解后肌球蛋白与正常肌球蛋白相比,肌动蛋白激活的磷酸化肌球蛋白的Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活力在低Ｍｇ２＋离子浓度时反而较高。从酶解后肌球蛋白溶液中只分离到１个４．２ｋｄ的小肽段。氨基酸组成测定及荧光胺末端标记实验提示,该小肽段酶切自平滑肌肌球蛋白重链ＳＭ１的Ｃ末端。     

Mg~（2＋）对线粒体H~＋－ATP酶的阿霉素敏感性的拮抗效应──H~＋－AT

用生物膜的拆离与重建技术,研究了Ｍｇ２＋对阿霉素（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ,ＡＤＭ）抑制猪心线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶及其重建脂酶体（Ｌ·Ｈ＋－ＡＴＰ酶）活性的影响。用胆酸盐透析方法将Ｈ＋－ＡＴＰ酶在大豆磷脂脂质体上重建。实验结果表明,重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶的ＡＤＭ的敏感性较仅纯化而未重建者明显增加,这提示ＡＤＭ的抑制作用依赖于磷脂。但是,在有Ｍｇ２＋（１ｍｍｏｌ／Ｌ）条件下重建的Ｈ＋－ＡＴＰ酶对ＡＤＭ的敏感性较无Ｍｇ２＋者却又显著降低,这提示Ｍｇ２＋对ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用具有拮抗效应。Ｍｇ２＋的这种拮抗效应是与其在透析重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶过程中诱导脂酶体的磷脂的物理状态的改变相关的。所得实验结果对于阐明ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用机理与磷脂的相关性提供了较直接的实验证据。     

SNP抑制5-HT诱导的胞内游离钙浓度升高和内钙释放

用Ｆｕｒａ － ２／ＡＭ 荧光测量技术研究了５ － 羟色胺（５－ ＨＴ） 诱导的大鼠尾动脉平滑肌细胞胞内钙升高和一氧化氮（ＮＯ） 的抑制效应。实验表明, 胞外０ｍ ｍｏｌ／ Ｌ Ｃａ２ ＋ 时胞内静息［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 为２０ ．２±８ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ８） 。１０μｍｏｌ／Ｌ ５－ ＨＴ 可诱导出胞内钙库释放引起的瞬态［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值达２４５ ．７ ±７１．６ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ６） 。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ 硝普钠（ＳＮＰ） 可抑制５－ ＨＴ 诱导的［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值浓度降为７５．１±３５ ．９ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ５） 。当细胞浴液含２．５ｍ ｍｏｌ／Ｌ Ｃａ２ ＋ 时,静息［Ｃａ２ ＋］ｉ为１１２ ．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ５） , 这时１０μｍｏｌ／ Ｌ ５ － ＨＴ 可诱导［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 的峰值为２５２ ．３ ±８０ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,以及其后平台浓度为１４３ ．０ ±３７ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,略大于［Ｃａ２ ＋］ｉ 为１１２．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／Ｌ 的静息浓度,为外钙内流引起。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ ＳＮＰ 也可抑制５－ ＨＴ 诱导［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 平台相浓度。平台浓度由１４３ ±４７     

氧化脂质及对大鼠心肌肌质网Ca~（2＋）－ATPase磷酸化微区运动状态的影响

用ＴＢＡ法测定了三尖杉酯碱的膜脂氧化效应;用纳秒荧光偏振技术研究了氧化膜脂对ＤＰＨ标记大鼠心肌肌质网膜脂、ＡＮＭ标记心肌肌质网Ｃａ２＋－ＡＴＰａ功能及磷酸化微区运动状态的影响。随膜脂中氧化磷脂的增加,肌质网膜脂双层的微粘度增加,磷脂分子摆动角减小：ＤＰＨ的荧光强度减弱,荧光寿命缩短。Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ的ＡＴＰ水解活性降低。ＡＮＭ标记Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ磷酸化微区的ｒ（ｔ）曲线半衰期减至６８±４ｎｓｅｃ。结果提示,膜脂中氧化磷脂的含量影响膜脂双层的流动性及Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ的ＡＴＰ水解活性和磷酸化微区的微细结构。     

PAF对肺内小动脉平滑肌细胞TXA_2，PGI_2乃Ca~（2＋）－ATPase的影响

本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ），观察了外源性血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）、ＢＮ５２０２１（ＰＡＦ受体拮抗剂）、吲哚美辛、维拉帕米对ＰＡＳＭＣｓ产生血栓素Ａ_２（ＴｘＡ_２）、前列环素（ＰＧＩ_２）及对细胞膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的影响。结果表明：（１）基础状态下ＰＡＳＭＣｓ存在花生四烯酸（ＡＡ）代谢。（２）外源性ＰＡＦ通过受体后途径激活环加氧酶促进ＡＡ代谢致ＴＸＡ_２及ＰＧＩ－２增加，ＴＸＡ_２／ＰＧＩ_２比值无明显变化。（３）外源性ＰＡＦ能直接抑制Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力。（４）维拉帕米可逆转ＰＡＦ抑制ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的效应。     

降钙素基因相关肽对大鼠分离的心肌细胞内游离Ca~（2＋）含量的影响

用荧光染色法观察了合成的大鼠降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对大鼠心肌细胞内游离Ｃａ￣（２＋）含量的影响。结果证明,ＣＧＲＰ能明显增加心肌细胞内Ｃａ￣（２＋）含量,小、中和大剂量（１０￣（－９）、１０￣（－８）、１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ）的ＣＧＲＰ使Ｃａ￣（２＋）含量分别增加至２７６．８８±６．３１、３６４．９９７±１２．７０、５７６．３９７±１５ｎｍｏｌ／Ｌ与对照组（１３６．２８±７．２４ｎｍｏｌ／Ｌ）相比差异非常显著（Ｐ＜０．０１）,且随着ＣＧＲＰ剂量的增加而作用明显加强,呈现剂量—效应关系。３０μｍｏｌ／Ｌ的维拉帕米对ＣＧＲＰ所致的细胞内Ｃａ￣（２＋）增加有抑制作用,对小、中、大剂量ＣＧＲＰ作用的抑制率分别为４８％、４４％和１８％。我们推测,ＣＧＲＰ可能直接作用于心肌细胞。低浓度ＣＧＲＰ的正性肌力作用主要是促进Ｃａ￣（２＋）经Ｃａ￣（２＋）通道内流,使心肌细胞内Ｃａ￣（２＋）含量增加的结果。在大剂量ＣＧＲＰ的正性肌力作用中Ｃａ￣（２＋）内流也起到一定作用。