天花粉蛋白小结构域N端同源片段的溶液构象：T18肽的圆二色性和荧光研究

应用圆二色性,内源荧光和疏水荧光探针法进一步研究Ｔｌ８肽的溶液构象及其相互转化。发现Ｔ１８肽在水溶液中为β折叠结构,且在高浓度（＞１ｍｇ／ｍｌ）时形成疏水聚合物;Ｌｙｓ１５和Ｉｌｅ３－Ｉｌｅ４是形成β折叠疏水簇的关键因素。并讨论了蛋白质肽链和溶剂环境对肽段二级结构的调制作用。     

天花粉蛋白T18肽片段的溶液构象及T14、TDK和T18肽构象比较

用１ＨＮＭＲ法测定Ｔ１８肽在ＤＭＳＯ（ＭＳ１８）和５０％六氟异丙醇（ＦＰ１８）中的溶液构象．ＭＳ１８含有Ｉｌｅ３～Ｇｌｎ７和Ａｌａ１２～Ｇｌｎ１６两段β－折叠链;而ＦＰ１８则转变为α－螺旋结构。综合分析Ｔ１４,Ｔ１８和ＴＤＫ三个模型肽的结构性质和稳定性,比较肽链序列和溶剂作用,提出肽链局部优势结构的概念,并据此讨论天花粉蛋白小结构域折叠起始过程．     

天花粉蛋白T18肽片段的溶液构象及T14,TDK和T18肽…

用＾１Ｈ ＮＭＲ法测定Ｔ１８肽在ＤＭＳＯ（ＭＳ１８）和５０％六氟异丙醇（ＦＰ１８）中的溶液构象。ＭＳ１８含有Ｉｌｅ３￣Ｇｌｕ７和Ａｌａ１２￣Ｇｌｎ１６两段β－折叠链;而ＦＰ１８则转变为α－螺旋结构。综合分析Ｔ１４,Ｔ１８和ＴＤＫ三个模型肽的结构性质和稳定性,比较肽链序列和溶剂作用,提出肽链局部优势结构的概念,并据此讨论天花粉蛋白小结构域折叠起始过程。     

天花粉蛋白小结构域N端TCS182—200同源片段的构象研究

以天花粉蛋白小结构域Ｎ端ＴＣＳ１８２－２００同源片段序列为基础,设计Ｔ１４,Ｔ１８和ＴＤＫ３个模型肽。本文分析了模型肽的肽链柔性和侧链两亲性,预测二级结构形成势,并通过多肽固相合成和圆二色性研究模型肽的溶液二级结构,比较理论预测和实测结果。在水溶液中,Ｔ１８为β－折叠,ＴＤＫ含有一定量α－螺旋;而Ｔ１４基本上为无规卷曲,但在碱性条件下有类似螺肇的亚稳结构存在。     

重组[B18Ile]人胰岛素的鉴定和特征

突变体「Ｂ１８Ｉｌｅ」猪胰岛素前体经分离纯化,转肽,得到重组「Ｂ１８Ｉｌｅ」人胰素「Ｂ１８Ｉｌｅ」人胰岛素能结晶,其与受体的结合能力为猪胰岛素的８２％,保留了与猪胰岛素基本相同的体内活力,从本文结果和分析表明Ｂ１８Ｖａｌ可能不是胰岛素表现生物功能所必需的。     

NMR法研天花粉蛋白T14肽片段的溶液构象

本文报道用ＨＮＭＲ法测定Ｔ１４肽在ＤＭＳＯ（ＭＳ１４）,Ｈ２Ｏ（ＨＯ１４）,５０％甲醇（ＭＥ１４）和５０％六氟异丙醇（ＦＰ１４）中的溶液构象。通过ＮＯＥ效应,偶合常数,Ｈ／Ｄ交换速率表征和定位二级结构和疏水域,计算两面角φ和螺旋形成几率。结果表明序列Ｓｅｒ９－Ｉｌｅ１７在ＨＯ１４中较为有序,存在强疏水作用,推测是类似螺旋样的亚稳结构;而在ＤＭＳＯ中序列ＳＡＬＳＫＱ存在形成α－螺旋结构的可能性,且六     

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的结构与功能研究进展

苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）杀虫晶体蛋白的毒性肽由三个典型的结构域组成.结构域Ⅰ位于肽链的N端,为一组由6～7个两亲的α螺旋围绕着一个疏水的α螺旋形成的α螺旋束,参与了细胞膜的穿孔;结构域Ⅱ位于肽链的中间,为三组以“希腊钥匙”（Greek key）拓扑结构连接在一起的反平行的β折叠片层,其顶端的突环参与了毒素与受体蛋白的结合;位于C端的结构域Ⅲ是由两组反平行的β折叠片层组成的夹心结构,以β果酱卷(jelly roll)拓扑结构排列,可能能够防止蛋白酶对毒素分子的过度降解.     

鱼类抗菌肽的研究进展

鱼类抗菌肽是鱼体天然免疫的重要组成部分,其结构和组成复杂多样.根据生化和结构特点,可将它们分为4种基本类型：具有疏水或双亲性α螺旋结构的抗菌肽、含多对二硫键并可形成β折叠结构的抗菌肽、组蛋白样抗菌肽和具有糖基化修饰的抗菌肽.鱼类抗菌肽多以前肽原的形式合成,通过酶解切除信号肽和羧基端酸性片段后形成有活性的成熟肽.成熟肽具有很强的抑菌活性,其最小抑制浓度多在毫摩尔水平.目前,已克隆了多个鱼类抗菌肽基因,揭示了pleurocidin等基因家族的结构及其转录调控特点.鱼类抗菌肽的抗菌机制已建立了“桶-桶板”和“地毯”样两种模型,基本阐明了抗菌肽分子结构与抗菌功能间的关系.     

小分子蛋白骨架提高噬菌体展示肽亲和力

本综述小分子蛋白骨架在提高哓菌体展示肽亲和力方面的作用。目前已知的天然及人工合成的小分子蛋白骨架包括α-螺旋结构,β-折叠片复合结构,α-螺旋结构展示肽亲和力高达87pmol/L,比野生型高12500倍,β-折叠片结构展示肽亲和力也达到20pmol/L,比野生型高600倍,α-螺旋与β-折叠片复合结构主要是锌指结构域,具有结构复杂,亲和力高的特点,小分子蛋白骨架主要通过提高展示肽的空间构象和对蛋白酶的稳定性而提高亲和力,展现出良好的应用前景。     

α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究Ⅱ疏水相互作用的分析

α－苦瓜子蛋白结构模型中共有疏水残基１４１个,占践基总数的５７％。其中１２８个疏水残基有相互作用,占疏水残基的９１％。疏水残基之间的相互作用与其是否在α－螺旋或β片层内没有多大关系。本文着重分析了α－螺旋间和α螺旋与β结构之间的疏水相互作用;讨论了α５和大β片层中疏水残基与亲本残基的分布特点,这一特点对该蛋白分子最后折叠成特定的空间结构有重要影响。类似的情况在同源蛋白天花粉蛋白中也是存在的。     

α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究Ⅱ疏水相互作用的分析

α－苦瓜子蛋白结构模型中共有疏水残基１４１个,占践基总数的５７％。其中１２８个疏水残基有相互作用,占疏水残基的９１％。疏水残基之间的相互作用与其是否在α－螺旋或β片层内没有多大关系。本文着重分析了α－螺旋间和α螺旋与β结构之间的疏水相互作用;讨论了α５和大β片层中疏水残基与亲本残基的分布特点,这一特点对该蛋白分子最后折叠成特定的空间结构有重要影响。类似的情况在同源蛋白天花粉蛋白中也是存在的。     

HMR法研究天花粉蛋白TDK肽片段的溶液构象

用１ＨＮＭＲ法测定ＴＤＫ肽在Ｈ２Ｏ（ＨＯＤＫ）,５０％六氟丙醇（ＦＰＤＫ）和２ｍｏｌ／ＬＧｕ·ＨＣｌ（ＧＵＤＫ）中的溶液构象。在ＨＯＤＫ和ＦＰＤＫ中,ＴＤＫ肽的两段序列Ａｓｐ０～Ｉｌｅ４,Ｓｅｒ９～Ｉｌｅ１７分别具有较稳定的α－螺旋含量;而ＧＵＤＫ的ＳＡＬＳ序列仍能检测到有序残存结构。并假设ＳＡＬＳ序列是肽链形成二级结构的原始核心。     

多肽淀粉样沉积形成机制研究进展

淀粉样肽(amyloid peptide)是一类在一定条件下易于形成沉积的多肽或者蛋白质。这类多肽或者蛋白在一定的组织部位沉积引起的细胞毒性和细胞凋亡被认为是一些疾病的主要原因。尽管这类多肽在一级结构上没有明显的同源性,但它们形成的沉积具有共同的结构特征,即这些多肽形成了具有β片层结构的纤维状聚集体。淀粉样沉积的形成机制尚不清楚。研究认为,在沉积过程中,多肽分子首先形成寡聚体,然后转变为规则的β折叠结构,进而组装形成淀粉样纤维。很多因素有助于这一转变,如多肽序列、氨基酸残基间的相互作用,介质的疏水性、温度、pH以及金属离子的浓度等。对多肽淀粉样沉积形成机制的深入研究将为探索相关疾病病因和开发治疗药物提供极有价值的依据。     

不同类型氨基酸网络参量与蛋白质折叠的关系

理论和实验研究表明,蛋白质天然拓扑结构对其折叠过程具有重要的影响．采用复杂网络的方法分析蛋白质天然结构的拓扑特征,并探索蛋白质结构特征与折叠速率之间的内在联系．分别构建了蛋白质氨基酸网络、疏水网、亲水网、亲水-疏水网以及相应的长程网络,研究了这些网络的匹配系数(assortativity coefficient)和聚集系数(clustering coefficient)的统计特性．结果表明,除了亲水-疏水网,上述各网络的匹配系数均为正值,并且氨基酸网和疏水网的匹配系数与折叠速率表现出明显的线性正相关,揭示了疏水残基间相互作用的协同性有助于蛋白质的快速折叠．同时,研究发现疏水网的聚集系数与折叠速率有明显的线性负相关关系,这表明疏水残基间三角结构(triangle construction)的形成不利于蛋白质快速折叠．还进一步构建了相应的长程网络,发现序列上间距较远的残基接触对的形成将使蛋白质折叠进程变慢．     

不同解折叠状态鸡心脱血红素细胞色素c分子的表面性质

脱血红素细胞色素ｃ的构象与其跨膜转运能力是密切相关的。鸡心脱血红素细胞色素ｃ具有较强的自发折叠的能力,在一定条件下可以得到不同解折叠状态的鸡心脱血红素细胞色素ｃ。本文利用疏水层析、与疏水探针１,８—ＡＮＳ的结合以及色氨酸与结合的ＡＮＳ之间的荧光共振能量转移,比较了不同解折叠状态的鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子的表面性质。结果表明,部分折叠的鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子获得了一种高度动态的结构,形成了动态的疏水核心;同时,它也具有较强的凝集倾向。这些性质与鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子较强的自发折叠能力是一致的,为进一步分析鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子的构象及其在跨膜转运过程中与脂的相互作用奠定了基础。     

小肽在原核和真核细胞中抑制α-synuclein异常折叠的研究

目的:研究在大肠杆菌中能够有效抑制α-synuclein异常折叠的小肽,在人神经母细胞瘤SH-SY5Y中的抑制作用.方法:基于α-Syn疏水区域设计的5种透膜小肽在大肠杆菌中能够有效抑制α-synuclein异常折叠;构建真核表达质粒CMV-SynGFP-IRES-Pn并转入SH-SY5Y细胞,通过测定细胞荧光强度分析小肽抑制α-synuclein异常折叠情况,由此评价大肠杆菌筛选系统确定的小肽在真核SH-SY5Y细胞中的有效性.结果:在大肠杆菌中能有效抑制α-Syn(129A)异常折叠的三种小肽R7P1、R7P3、R7P4,在SH-SY5Y中的作用效果也十分明显,分别比对照肽ASIlD提高了114%、98%和98%.对于α-Syn(53T),R7P1和R7P2在SH-SY5Y中分别比对照提高了90%和44%;然而在两种细胞中,5种透膜小肽对野生型α-Syn(WT)的作用与对照相比差距不明显.     

蛋白错折叠及其纠正机制

尽管目前已知由各种力之间的复杂平衡维持着蛋白质三维结构 ,但对体内蛋白折叠的机理仍知之甚少。大量研究表明 ,蛋白体外折叠常受竞争过程制约[1,2 ],在非平衡生理条件下 ,错折叠可由暴露在折叠中间物中的疏水表面交联而发生[3]。蛋白错折叠时形成的错误构造影响蛋白结构正常形成 ,可导致人老年斑和神经纤维原混乱增加 ,进而诱发出现典型的老年性痴呆。Ｊｅｎ等[4 ]研究发现神经多肽中的淀粉多肽 (Ａβ)错折叠对体内神经细胞具有毒性作用 ,氧化胁迫和Ｃａ积蓄不稳定可诱导编码淀粉前体蛋白 (ＡＰＰ)及老年痴呆症相关的基因发生突变 ,使长度…     

牛生长激素释放因子的融合表达及其产物的化学加工

通过寡核苷酸引导的定位突变,在人工全合成的第２７位为Ｉｌｅ的牛生长激素释放因子［Ｉｌｅ２７］ｂＧＲＦ（１－４４）ＯＨ基因的５＇端ＡＴＧ后插入Ｔｒｐ密码子序列,并分别了构建了Ｐｌ ｐｒｏｍｏｔｅｒ控制下、以β－半乳糖苷酶和ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ结合ＩｇＧ ｄｏｍａｉｎＢ、Ｃ为载体蛋白的融合型基因表达质粒ｐＢＬＥ３１０和ｐＢＬＰＡＥ２Ｄ,在大肠杆菌中得到高效表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,表达产物β－Ｇａｌ     

油桐尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白的理化性质及二级结构预测

由SDS及梯度胶电泳测得油桐尺蠖核型多角体病毒（BsNPV）多角体蛋白天然状态及亚基分子量分别为363kD与31.5kD,从而推断此蛋白为十二聚体,亚基间无二硫键作用．BsNPV多角体蛋白的远紫外圆二色谱显示,它的二级结构含有31．7％的α螺旋,23．8％的β折叠及44．5％的无规卷曲,与二级结构预测结果相符．通过荧光光谱实验推知,BsNPV多角体蛋白的表面疏水性弱,其色氨酸残基位于蛋白疏水核内部．     

基于HP模型的蛋白质折叠问题的研究

基于蛋白质二维HP模型提出改进的遗传算法对真实蛋白质进行计算机折叠模拟。结果显示疏水能量函数最小值的蛋白质构象对应含疏水核心的稳定结构,疏水作用在蛋白质折叠中起主要作用。研究表明二维HP模型在蛋白质折叠研究中是可行的和有效的并为进一步揭示蛋白质折叠机理提供重要参考信息。