高效液相色谱法在脱氧核糖核酸酶解动力学

为了更好地对脱氧核糖核酸酶解动力学过程进行研究,建立脱氧核糖核酸(DNA)酶解液中4种脱氧核苷酸(腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP))的高效液相测定方法,能将酶解液中4种脱氧核苷酸完全分离并准确定量.在此基础上,对DNA酶解的动力学进行初步研究,其反应机理为不存在底物和产物抑制的双底物顺序反应,动力学方程为x=1/bln(1+abt)(其中a=0.372 3ρ0-0.974;b=-0.049 3ρ20+1.115 3ρ0 - 1.110 3),该方程可以很好地描述DNA酶解过程,误差仅为3.31%.     

灵芝EIM-40漆酶的分离纯化及酶学性质

采用冻干浓缩、（NH4）2S04盐析、HiTrapphenyl（FF）疏水层析和QSepharose FastFlow离子交换层析对灵芝EIM-40发酵液进行分离纯化,获得纯化漆酶,纯化倍数为14．6,回收率为5．3％。SDS-PAGE银染的结果为单一条带,相对分子质量约为6．53×104。以愈创木酚和2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）为催化底物进行酶学性质研究,最适pH分别为4．8和4．5,最适温度分别为55和50℃,2种底物在pH4．0。5．0范围内,温度低于50℃时,酶的稳定性都很好。以愈创木酚为底物,Km=645．0umol／L;以ABTS为底物,Km=22．2txmol／L。Cu2＋对该酶起激活作用,Fe2＋、Ca2＋、Ba2＋则完全抑制酶的活性。     

核酸酶P1催化水解热变性DNA的研究

用桔青霉菌株IM0 2 (PenicilliumcitrinumIM0 2 )发酵制得的核酸酶P1催化水解热变性DNA ,在研究温度、底物浓度、pH、酶加入量等因素对水解结果的影响的实验基础上,通过正交实验获得最佳的工艺条件:温度5 8℃,pH6 5 ,DNA质量浓度4 0g/L ,酶加入量4 % ,脱氧核苷酸的得率92 %。在此基础上推导出其催化米氏常数Km=5 818×10 -2 g/L。     

应用正交旋转组合设计构建测定条件对木聚糖酶活力影响的数学模型

通过正交旋转试验,探讨了反应温度（X1）、pH值（X2）、反应时间（X3）、底物浓度（X4）、DNS用量（X5）5个测定条件对木聚糖酶活力（Y）测定结果的影响,并构建了测定条件对木聚糖酶活力影响的数学模型：Y=10．2950＋1．6563X1-0．0704X2＋0．3179X3＋1．7004X4-1．3413X5＋0．0669X1X2＋0．2094X1X3＋0．7631X1X4＋0．3301X1X5＋0．1256X2X3-0．0881X2X4＋0．1544X2X5＋0．2596X3X4＋0．1469X3X5-0．2594X4X5-0．4121X1^2-0．1258X2^2-0．2233X3^2-0．8358X1^2＋0．5217X3^2．实验结果表明：反应温度、底物浓度和DNS用量对木聚糖酶活力测定结果有极显著影响．     

构建羰基还原酶基因工程菌生物转化产l-麻黄碱

以筛选得到的Morganella morganii J-8细菌的基因组为模板,通过PCR扩增得到目的基因mdlh2。核苷酸序列测定结果表明,基因全长1046bp。以pET28a（＋）为表达载体,构建重组质粒pET28a（＋）-mldh2,并在E．coli BL21（DE3）中表达。利用表达产物进行生物转化,发现其具有催化底物1-苯基-2-甲氨基丙酮（简称MAK）产l-麻黄碱的活力。进一步考察了诱导时间和IPTG浓度对重组菌表达的羰基还原酶的影响,37℃下用0．5mmoL／L的IPTG诱导4h,重组羰基还原酶的酶活达到0．2U／mg蛋白,转化液中l-麻黄碱质量浓度达到45mg／L。     

噬菌体RB69 DNA聚合酶以不正确的核苷酸为底物的聚合反应的稳态动力学研究

测定了ＲＢ６９ ＤＮＡ 聚合酶以不正确的核苷酸（ｒＮＴＰ、ｄｄＮＴＰ以及碱基不配对的ｄＮＴＰ）为底物进行聚合反应的稳态动力学常数,并与Ｋｌｅｎｏｗ 酶进行了比较．结果表明,ＲＢ６９ ＤＮＡ 聚合酶在以不正确的核苷酸为底物进行聚合反应时,其Ｋｍ 值与正确底物参入时相比有大幅度提高,而ｋｃａｔ保持不变或下降幅度较小．而Ｋｌｅｎｏｗ 酶在利用不正确的核苷酸为底物时,与正确底物参入时相比,其ｋｃａｔ大幅度下降,而Ｋｍ （或ＫＤ）基本保持不变或上升较小幅度．两种酶不同的动力学特点反映出它们不同的底物选择机制．     

酶促水解大豆分离蛋白动力学模型的研究

本文对AS1.398中性蛋白酶在pH6.9和温度49℃条件下水解大豆分离蛋白的动力学机制进行了研究．结果表明：酶水解速率随水解反呈指数递减．为了解释实验结果,我们提出了如下假设：对底物而言水解反应终为零级反应,水解过程中由于游离酶攻击酶-底物中间络合物而造成的不可逆酶变性是一个二级动力学过程．在此基础上,由实验数据推导得到了描述AS1.398中性蛋白酶催化水解大豆分离蛋白的动力学方程,该方程可用于指导和优化酶解反应实验．     

最新专利文摘

微生物连续催化法生产丙烯酰胺;基因工程菊粉酶水解菊芋生产果糖;用酶水解人参皂甙制备20-β-D-吡喃葡萄糖基原人参二醇;一种快速测定糖化酶活力的方法;烟酸羟基化微生物转化发酵与静息细胞转化综合生产工艺;纳米磁性颗粒分离纯化链酶亲合素的方法;一种洁净简便高效降解核酸的方法;从脱氧核糖核酸钠酶解液分离纯化脱氧核苷酸钠的方法     

粘质沙雷氏菌H3010发酵型D-乳酸脱氢酶基因的克隆表达、纯化及酶学性质研究

通过PCR技术从粘质沙雷氏菌H3010基因组DNA中扩增出该D-乳酸脱氢酶基因,连接至pET-28a（＋）表达载体,转入大肠杆菌BL21（DE3）中进行了重组表达,优化了酶纯化的条件,并对其酶学性质进行初步研究。结果表明,获得的该酶编码基因全长993bp,编码330个氨基酸,大小为37kDa。经优化表达及纯化条件后重组酶纯度可达90％。酶学性质研究发现,该重组酶最适反应温度为60℃,最适酶促反应pH为7．5（O．2mol／L磷酸盐缓冲液）,37℃下测得对底物丙酮酸的动力学参数Km=3．39mmol／L,Vmax=6．87mmol／（mg·min）,对辅酶NADH的动力学参数Km=1．43mmol／L,Vmax=1．61mmo]／（mg·min）。为酶法生产D-乳酸及利用代谢工程构建产D-乳酸的基因工程菌打下基础。     

7-木糖紫杉烷糖基水解酶Lxyl—pl-1及Lxyl-pl-2的催化特性

糖基水解酶Lxyl-pl－1和Lxyl-p1-2是天然药物活性物质与功能国家重点实验室,卫生部天然药物生物合成重点实验室克隆自真菌香菇的重组蛋白,具有β-木糖苷酶／β-葡萄糖苷酶双重活性,能专一性水解脱除7-木糖-10-去乙酰紫杉醇等的木糖基,生成的C-7位羟基化产物可以作为前体半合成重要的抗肿瘤药物紫杉醇或其类似物。前期工作显示：Lxyl-p1-1和Lxyl-p1-2的序列同源性高达97％,但后者的催化活性是前者的2倍以上;Lxyl—pl-2水解生色底物PNP-Xyl的最适温度为50℃,最适pH为4．0。为系统地观察两酶的催化特性,在对天然药物活性物质与功能国家重点实验室,卫生部天然药物生物合成重点实验室构建的工程酵母进行培养、诱导7d后冷冻干燥菌体。将冷干的菌体破碎得到蛋白粗提物,再经过Ni亲和色谱和HPLC凝胶色谱法制备和纯化得到Lxyl-p1-1和Lxyl-p1-2重组蛋白。以生色底物PNP-Xyl和PNP-Glc及7-木糖紫杉烷底物7．木糖-10-去乙酰紫杉醇（XDT）与重组酶进行反应,重点测定Lxyl-p1-2水解XDT的最适温度和最适pH,并在最适条件下测定重组酶对不同底物的动力学参数。试验结果表明：Lxyl-pl-2水解底物XDT的最适温度为45％,最适pH为4．5;动力学测定结果显示：Lxyl—pl-1和Lxyl-p1-2的β-葡萄糖苷酶活性均显著高于其β-木糖苷酶活性,这与之前的研究结果相一致;Lxyl-p1-1对于底物PNP-Xyl,PNP-Glc和XDT的kcat／Km值分别低于Lxyl-p1-2对于上述3种底物的kcat／Kan值（0．77s-1×mM-1,1．65s-l×mM-1和-1×mM-lVS．1．67S-1xmM-1,2．85S-1×mM-1和1．07S-1×mM-1）。     

纳豆激酶发酵液的脱色工艺研究

从11种待选脱色介质中筛选出330(OH)型树脂对纳豆激酶发酵液进行脱色研究.结果表明:(1)330(OH)型树脂对纳豆激酶发酵液中的色素为优吸型吸附,其动力学模型符合扩散方程,其动力学拟和方程为-ln(1-F)=0.0223t+0.0511,R2=0.9978,其中F=Qt/Qe,Qt为脱色时间为t时330(OH)型...     

翅果油树叶面积和叶重的预测模型

数学模型对于非破坏性地研究和预测植物的生长状况非常方便有效。以山西省翅果油树自然保护区翅果油树（Elaeagnus moles）叶片为研究对象,利用简单易测的叶长（L）、叶宽（w）和叶绿素含量（SPAD）及其不同的组合作为模型拟合参数,建立了关于叶面积（LA）、叶饱和鲜重（SFW）和叶干重（DW）的预测模型共10个,选择拟合度最好的模型作为LA、SFW和DW的预测模型,这3个模型分别为：LA=3．647＋0．383LW＋0．001LWS（R=0．968）,SFW=-0．464＋0．081L＋0．00008LV／S（R=0．963）,DW=-0．094＋0．032W＋0．0001LS（R=0．960）,并用实测值对模型进行了验证,结果表明LA、SFW和DW的预测值与实测值分别达到了高度一致,能够用于对实际未知叶片LA、SFW和DW的预测。     

一个带白噪声的可变时滞Lotka-Volterra人口模型(英文)

因为人口模型经常遭遇环境噪音的影响,本文将如下Lotka-Volterra模型(t)=diag(x(t))[b+Ax(t)+Bx(t-δ(t))]随机扰动为It型随机微分方程dx(t)=diag(x(t))[(b+Ax(t)+Bx(t-δ(t)))dt+(Qx(t)+Rx(t-δ(t))dw(t)].在这个随机模型中对系数b,A,B不需任何限制,我们证明了环境噪音不仅会压制人口的爆炸还会使得方程的解随机一致有界.     

一类三阶非线性递归差分方程的全局渐近稳定性与振动性(英文)

研究了一类三阶方程x_(n+1)=x_nx_(n-2)+a/x_n+x_(n-2)+b,n=0,1,…的解的振动性和正解的全局渐近稳定性,证明了正平衡解的全局渐近稳定,非平衡解具有规律的振动性.     

井冈山自然保护区12种常见灌木生物量的估测模型

灌木生物量模型是估测灌木生物量的重要方法之一。以井冈山自然保护区林下12种常见灌木为研究对象,根据树高（H）和地径（D）两个形态因子作为变量,进行回归分析构建模型。通过对比判别系数R 2的大小,筛选最佳生物量估测模型。方程W=a＋b X12 X2、W=a＋b X＋c X 2和W=a X b在模拟生物量时相关指数均较高,为0.904-0.991,达到极显著水平,可用于实际生物量估测,而方程W=a＋b X、W=a＋b X1＋c X2和W=a＋b ln X在模拟灌木生物量时结果较差。利用此类方法建立的生物量模型,精度高,简便易行,对以后估算井冈山自然保护区灌木生物量和碳储量具有十分重要的意义。     

MDSC在外周血中的表达及其与HBV-DNA复制水平的相关性

目的探讨髓源性抑制细胞（MDSC）在乙肝HBe Ag阳性﹑HBe Ab阳性患者外周血中的表达水平及临床意义,并进一步分析MDSC与HBV-DNA的动态关系。方法 （1）选取乙肝两对半符合HBe Ag阳性﹑HBe Ab阳性表型的患者60例,将这些标本分为HBe Ag阳性组、HBe Ab阳性组。分析MDSC在这两组间的表达差别。（2）将患者分为HBV-DNA阳性组和HBV-DNA阴性组,分析HBV-DNA的复制水平与MDSC表达的相关性。（3）用流式细胞仪检测外周血中以CD33^＋CD11b^＋HLA-DR^-为特征的MDSC占外周血粒细胞的百分比。（4）结合患者的其他指标（ALT、AST、GGT）,利用统计学软件分析其与MDSC表达水平之间的关系,进一步探讨它的临床意义。结果乙肝（HBe Ag阳性）MDSC表达水平（10.85±4.21）（n=22）（t=12.091）高于HBe Ab阳性组（5.88±2.95）（n=38）（t=12.281）（P〈0.01）,结果差异有统计学意义;乙肝DNA阳性组中MDSC表达水平（9.30±4.44）（n=30）（t=11.473）显著高于DNA阴性组（6.10±3.29）（n=30）（t=10.161）（P〈0.01）;乙肝患者外周血中的MDSC表达水平与ALT、AST、GGT成正相关。结论乙肝HBe Ag阳性、HBe Ab阳性阳患者外周血中的MDSC表达水平可能与乙肝的发生、发展密切相关;MDSC的表达水平与HBV-DNA复制水平呈正相关;外周血MDSC表达水平可作为乙肝患者临床监测的指标。     

番薯叶片性状关系模型的建立与验证

建立植物叶片生长预测模型是林学、生态学和植物学的热点与难点。以番薯(Ipomoea batatas)叶为研究对象,利用易测的叶长(L)、叶宽(W)和叶绿素含量(S)及其不同的组合作为模型拟合参数,建立了10个关于叶面积(LA)、叶饱和鲜重(SFW)和叶干重(DW)的预测模型,选择拟合度最好的3个模型作为LA、SFW和DW的预测模型,这3个模型分别为:LA=–22.995+5.322W+0.322L2(R=0.972)、SFW=0.459+0.000 034 1LWS(R=0.964)和DW=–0.064+0.016W+0.000 048 4LS(R=0.955);并用实测值对模型进行了验证。结果表明,LA、SFW和DW的预测值与实测值均高度一致(R20.9,P0.001),故可用于对实际未知叶片LA、SFW和DW的预测。该研究可为简化植物性状测定提供参考。     

向日葵螟幼虫的空间分布型及抽样技术

欧洲向日葵螟Homoeosoma nebulellum Denis et Schiffermüller是向日葵上的主要害虫,本文利用6种聚集指标对向日葵螟幼虫的空间分布型进行了测定,结果表明其呈现聚集分布。样本平均数(m)与方差(S2)的对数值的关系式为:lgS2=lg0.2130+0.5639lgm,显示向日葵螟幼虫的空间分布随密度的升高而趋向均匀分布。Iwao的m*-m回归方程为:m*=8.1177+0.1447m,显示该虫在田间分布的基本成分是个体群,个体间相互吸引,个体群的空间分布型为均匀分布。对聚集原因进行分析,得出λ<2,表明向日葵螟幼虫的聚集是由于环境作用所引起的。用Iwao的理论抽样数模型计算出向日葵螟幼虫的理论抽样数模型为:D=0.1时,n=911.77/m-85.53,D=0.2时,n=227.94/m-21.38。采用m*-m关系的序贯抽样模型制定出食葵田间的序贯抽样模型为:T1(n),T0(n)=7.40n±4.54n,油葵田间的序贯抽样模型为:T1(n),T0(n)=10.05n±2.29n。     

思茅松中幼人工林的生物量碳计量参数

通过开展思茅松中幼人工林样地调查,基于实测数据计算了相关碳计量参数并研究了碳计量参数与相关林分因子的关系.结果表明:1)思茅松中幼人工林生物量转化与扩展因子(BCEF)的平均值为0.5483 Mg·m~(-3)(n=30,95%置信区间:0.5357～0.5609),低于政府间气候变化专门委员会(IPCC)的缺省值.BCEF和平均树高(H)、林分形高(FH)、蓄积量(V)和林龄(A)存在显著负相关(P<0.05).BCEF和平均胸径(D)负相关,但相关不显著(P>0.05).BCEF和N(林分密度)正相关,但相关不显著(P>0.05).BCEF值与林分因子的关系函数拟合效果不佳.2)思茅松中幼人工林生物量扩展因子(BEF)的均值为1.78378(n=30,95%置信区间:1.71714～1.85043),高于IPCC缺省值.BEF和D、H、FH、V和A存在极显著的负相关(P<0.01),与N存在显著的正相关(P<0.05).BEF与A和V的关系以二次曲线函数形式拟合效果较好,与N的关系则以双曲线形式较好,与FH、H和D的关系以幂函数较好.3)思茅松中幼人工林的根茎比(R)均值为0.2400(n=30,95%置信区间:0.2194～0.2606),与IPCC缺省值基本一致.R与D、H、FH、V和A有极显著的负相关关系,与N有显著的正相关关系.R与D、H、FH、V和A的关系以二次曲线的形式拟合效果较好,与N的关系则以双曲线形式拟合较好.     

生化反应中一类三次系统的极限环

研究生化反应中一类三次系统：dx/dt=-x-Ф1（x）＋yФ2（x）,dy/dt=a0＋Ф1（x）-yФ2（x）其中Ф1（x）=Ax^3＋ax^2＋bx＋B,Ф2（x）=cx^2＋dx＋e．较完整地解决了该系统极限环的存在性,唯一性与不存在性等问题．