猪生殖和呼吸综合征病毒B13株ORF7基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

利用单管RT-PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）分离株B     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱发的一种接触性传染病,其症状主要表现为怀孕母猪流产、早产、产死胎、木乃伊胎及成年猪的呼吸道症状。本病自1987年在美国爆发后,给世界养猪业造成巨大损失。近年来,由于其危害性大而引起专家学者的关注,PRRS在分子生物学方面研究者较多。就其病原特性,基因结构,病毒蛋白,分子生物学诊断以及PRRS基因工程疫苗的研究等方面进行论述。     

风疹病毒分离株在BHK21细胞中的形态与形态发生

利用超薄切片电子显微镜技术对本室分离的风疹病病毒（ＲＶ）ＪＲ＿（２３）株在ＢＨＫ＿（２１）,细胞中的形态及形态发生过程进行了研究,同时与ＲＶ标准野毒株Ｇｏｓ－１０作了比较。结果表明,ＲＶＪＲ＿（２３）株感染ＢＨＫ＿（２１）,细胞后６ｈ开始于细胞浆内观察到病毒颗粒,９６ｈ达到高峰。病毒颗粒呈图形,有双层脂质包膜包绕,直径４５～７５ｎｍ,核衣壳２５～３５ｎｍ。细胞浆内见到大量病毒相关颗粒,直径２０～３０ｎｍ。病毒包膜来自于细胞浆中的空泡膜或细胞膜。被ＲＶ感染的细胞浆中还观察到“繁殖复合体”,由膜性结构包绕着许多类似病毒颗粒的囊泡构成。丙株ＲＶ在形态与形态发生方面未发现差异。     

猪源胰酶中特异病毒和非特异病毒安全检测简

目的：对猪源胰酶样品进行病毒检测,以评价其病毒安全性。方法：非特异性病毒检测采用致细胞病变、血凝吸附试验和形态学检测方法;特异性病毒检测包括猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒（PCV）、猪细小病毒（PPV）、猪口蹄疫病毒（FMDV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）特异性核酸检测,以及CSFV、PPV、PRV特定性抗原蛋白直接免疫荧光检测。结果：受检样品非特异性病毒检测中,未见可观察到的细胞病变产生和病毒粒子,对豚鼠、鸡和人的0型红细胞无凝集现象。特异性病毒检测中,PRRSV、CSFV、PCV、PPV、FMDV和PRV核酸检测均为阴性,CSFV、PPV、PRV免疫荧光检测均为阴性。结论：猪源胰酶样品经非特异性病毒检测和特异性病毒检测均无可检出的病毒存在。     

猪细小病毒单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备猪细小病毒（PPV）杂交瘤细胞株,并对其分泌的PPV单克隆抗体进行鉴定。方法按常规方法制备并获得2株杂交瘤细胞。用染色体分析对杂交瘤细胞进行鉴定,用间接ELISA、免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）和间接免疫荧光试验（IFA）对其分泌的单克隆抗体进行效价测定、亚型鉴定和特异性鉴定。结果得到2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H9、1F9,染色体数目介于90～110之间。细胞上清效价均达1∶1×104,腹水效价均达1∶1×107,其亚型分别为IgG1、IgM,均为kappa链。2H9、1F9单抗与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒I型（PCV-1）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）、乙脑病毒（JEV）等均无交叉反应。IPMA和IFA检测结果显示2H9、1F9单抗均能与接种于PK-15细胞的PPV发生特异性反应。结论成功制备了2株抗PPV杂交瘤细胞株,证实其产生的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性。     

不怕蓝耳病的基因编辑猪

猪呼吸与繁殖综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是PRRS病毒引发的一种严重危害养猪业的传染病,具有高变异性、持续性感染和免疫抑制等生物学特性。因病猪具有耳部变蓝的症状被俗称为"蓝耳病",又被称为养猪业中的"艾滋病"。猪肺泡巨噬细胞上的CD163蛋白是猪呼吸与繁殖综合征病毒的主要受体,研究者利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除猪受精卵中的CD163基因第七外显子,成功制备出具有猪呼吸与繁殖综合征抗性的活体猪。这是抗猪呼吸与繁殖综合征的相关工作中一项里程碑式的研究成果,为该病未来的防治工作提供了新的思路和广阔的应用前景。     

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光重组酶聚合酶扩增技术（RPA）检测方法的建立及其应用

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）在我国出现了多种基因亚型毒株混合流行和重组的复杂变化，其引起的猪繁殖与呼吸综合征（PorcineReproductiveand Respiratory Syndrome,PRRS）已成为危害程度仅次于非洲猪瘟的重要疫病。为建立一种快速而敏感性高的美洲型PRRSV检测方法，本研究分析了国内美洲型全基因组序列，利用重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification,RPA），设计合成特异性引物和探针，优化反应体系和条件，建立美洲型PRRSV实时荧光RPA检测方法，通过特异性、敏感性、重复性试验及田间样品的比对检测，评价该方法的检测能力，并测定和分析了田间阳性样品的ORF5基因序列。结果显示，该方法在42℃、20 min内即可完成检测，最低检测美洲型PRRSV载量为50拷贝/μL，且与欧洲型PRRSV、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应，特...     

猪生殖和呼吸综合征病毒B13株ORF7基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

利用单管RT－PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）分离株B13株包括ORF7基因的片段,并对其序列进行了测定,结果PRRSV分离株B13ORF7基因长度为384bp,编码128个氨基酸组成的15kD蛋白。与已发表的PRRSV LV株、VR－2332株进行同源性比较,发现核苷酸同源性分别为99.2%、59.4%;氨基酸同源性分别为98.4%、54.7%。。表明PRRSV分离株B13在基因结构上可能与LV株同属于欧洲亚群。同时构建了重组转移载体质粒pAcGHLT-B-ORF7,且该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV-SVI^-G)基因组DNA（baculo gold linearized baculovirus DNA）共转染草地夜蛾（Spodoptcra frugiperda,Sf9）细胞,得到重组病毒AcMNPV-OCC^--GST-6xHis-ORF7。在感染了重组病毒的Sf9细胞中检测到分子量为46kD的ORF7基因的GST融合蛋白表达产物,能被猪抗PRRSVB13株多克隆血清所特异识别。此结果为PRRS新型诊断抗原的研制奠定了基础。     

人巨细胞病毒检测技术研究进展

人巨细胞病毒（HCMV）严重危害人类生殖健康和优生优育。仅据临床表现不能对其进行确诊,生物技术的发展为早期、快速和准确检测,对及时治疗极为重要,文章从病毒形态学、免疫学以及分子生物学角度总结综述了HCMV检测技术的发展、应用及各自特点。     

草莓伪温和黄边病毒的提纯技术研究

本研究比较了多种提纯方法,提出一个较理想的草莓伪温和黄边病毒（ＳＰＭＹＥＶ）提纯程序。病ＵＣ－４草莓叶经ＰＥＧ沉淀,蔗糖垫层差速离心,蔗糖密度梯度离心,可获得相当纯的病毒制剂。紫外检测呈典型的核蛋白吸收曲线,Ａ２６０ｎｍ／Ａ２８０ｎｍ＝１．２１,病毒得率为７－１０ｍｇ／ｋｇ病叶,病毒粒子电镜下观察,长６７０ｎｍ,宽１２～１３ｎｍ。     

中国本溪虹鳟一株弹状病毒的分离及初步研究

１９９０年４月,辽宁省本溪市虹鳟鱼种场的虹鳟稚鱼爆发大规模疾病,死亡率近１００％。取病鱼组织处理后接种于鱼类细胞,出现明显的细胞病变,测定细胞培养物中的病毒滴度,最高达１０￣（６．３）ＴＣＩＤ＿（５０／０．１ｍｌ）。感染病毒的细胞用１％营养琼脂糖覆盖后可形成０．５－１．５ｍｍ的蚀斑。分离到的病毒对氯仿敏感,不耐热、不耐酸,在细胞内复制的最适温度为１５℃。室内人工感染的虹鳟稚鱼能复制出与天然发病相同的症状。对感染病毒的细胞制成超薄切片,透射电镜观察,病毒长为１３１－１７３ｎｍ,平均１４８ｎｍ,直径为５８－９１ｎｍ,平均７１ｎｍ,形状为子弹状,表明是弹状病毒,有囊膜及纤突。采用挑斑法得到了纯化的病毒株,暂称之为传染性造血器官坏死症病毒中国本溪株ＩＨＮＶ－Ｂ。     

产蛋下降综合征病毒核酸J片段的确证和序列测定

产蛋下降综合征病毒核酸Ｊ片段的确证和序列测定张兹钧,胡木枝（拱北动植物检疫局,珠海５１９０２０）金由辛（中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,上海２０００３１）关键词产蛋下降综合征;Ｊ片段;ＤＮＡ片段产蛋下降综合征（ＥｇｇＤｒｏＰＳｙ...     

同时表达蓝舌病毒四个主要结构蛋白可装配成病毒样颗粒

为研制蓝舌病毒（ｂｌｕｅｔｏｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ,ＢＴＶ）基因工程疫苗和进一步研究ＢＴＶ结构与功能的关系,对ＢＴＶ病毒样颗粒（ＶＬＰ）的装配进行了研究。同时在昆虫细胞中表达ＢＴＶ主要结构蛋白ＶＰ７、ＶＰ３、ＶＰ２与ＶＰ５,将细胞裂解液超速离心纯化后,发现主要存在两 形态的颗粒：一种与前文报道的病毒核心颗粒（ＣＬＰ）相同,直径约为６０ｎｍ￣７０ｎｍ,蛋白壳厚１０ｎｍ￣１５ｎｍ;另一种大小为７０ｎｍ￣     

宁夏甜菜的烟草环斑病毒的鉴定

从宁夏患丛根病甜菜的病根中分离到一种球状病毒粒子,直径约为２８ｎｍ。提纯病毒的紫外扫描呈典型的核蛋白曲线,最大吸收为２６０ｎｍ,最小吸收为２４０ｎｍ,Ａ＿（２６０）／Ａ＿（２８０）＝１．３０。寄主范围广,能侵染茄科、豆科、藜科、葫芦科、番杏科等１７种植物。病毒的ＴＤＰ为６５℃,ＤＥＰ为１０￣（－３）,体外存活期６－７天。有较强的免疫原性。病毒的抗血清与烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）之间产生明显的沉淀线。经初步鉴定认为该分离物是烟草环斑病毒。     

西藏小型猪10种猪病血清学调查

目的对西藏小型猪进行10种猪病（猪瘟、伪狂犬病、篮耳病、猪流感、圆环病毒感染、细小病毒病、乙型脑炎、弓形体病、衣原体病和布氏杆菌病）的血清学调查。方法采用ELISA或凝集试验方法对10头已注射猪瘟疫苗的原代（F0代）母猪和40头20日龄乳猪、50头第一代（F1代）3～5月龄猪进行10种猪病的血清学检测。结果猪瘟病毒、细小病毒和乙型脑炎病毒抗体阳性率分别是母猪为80.0%、80.0%、70.0%;20日龄乳猪为45.0%、25.0%、45.0%;3～5月龄猪为4.0%、76.0%、80.0%。圆环病毒抗体阳性率母猪为60.0%,20日龄乳猪为5.0%。3～5月龄猪为0%;篮耳病病毒、伪狂犬病病毒、猪流感病毒、弓形体、衣原体、布氏杆菌在不同年龄西藏小型猪中抗体阳性率均为0%。结论不同年龄西藏小型猪未受篮耳病病毒、伪狂犬病病毒、猪流感病毒、弓形体病、衣原体病、布氏杆菌病感染。     

猪瘟病毒的分子生物学研究进展

猪瘟病毒（Oassicalswinefevervirus,CSFV;或称Hogcholeravirus,HCV）,属黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Peshvirus）［’1。CSFV与同属的牛病毒性腹泻病毒（Bovineviraldiavims,BVDV）及羊边界病病毒（Botherdiseasevirus,BDV）在结构上有很高的相似性,在血清学上有交叉反应l‘］。感染猪可引起高热、皮肤变色、大量内出血等及神经系统症状［’］,死亡率很高。猪瘟病毒是世界上损害养猪业的重要病原之一l‘］。猪瘟病毒是有囊膜,直径40～60urn的正链RNA病毒［‘·’］．在蔗糖中浮力密度为l．12g／ml,沉降系数S…     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是严重危害养猪业的病原,对PRRSV的分子生物学研究进展进行了综述,主要包括PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白及其功能、致病机理及复制与转录等.     

丙型肝炎病毒颗粒研究进展

本文综述了近年来对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）颗粒的研究进展。在ＨＣＶ感染引起的肝炎组织标本、血液标本及培养细胞中,普通透射电镜下发现有病毒颗粒的存在。核内颗粒直径为２０￣２７ｎｍ;胞质内颗粒的大小报道各异,其结构包括核心和外壳两部分,核心平均直径４０ｎｍ。这种颗粒的特性尚未被阐明。近年在ＨＣＶ感染的培养细胞及黑猩猩ＨＣＶ肝炎模型中免疫电镜检查证明这种颗粒有病毒抗原性,但在人们ＨＣＶ肝炎肝组织中这种颗料     

植物双生病毒研究进展

双生病毒（Ｇｅｍｉｎｉｖｉｒｕｓ）是一组具有双生颗粒形态的单链环状ＤＮＡ植物病毒［１～３］。典型的双生病毒为１８×３０ｎｍ颗粒,基因组大小为２．５～３．０ｋｎｔ。双生病毒研究已成为植物病毒学最活跃的领域之一。１双生病毒的性质１．１双生病毒组的成员划分...     

猪Ⅱ型圆环病毒四川分离株鉴定及其ORF2基因序列分析

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV),属于圆环病毒科(Circoviridae),圆环病毒属(Circovirus),血清型为PCV-1和PCV-2[1]。PCV-1首先由Tis-cher[2]于1974年从PK-15猪肾传代细胞系中分离获得,PCV-2首先由Clark[3]报道了是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,随即相继报道了PCV-2与PDNSS(猪皮炎与肾炎综合症)、NP(增生性坏死性肿炎)、PRDC(猪呼吸道综合征)、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦有重要关联[4,5];它常与猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)或猪细小病毒(PPV)并发感染或继发细菌感染[6]。我国自从2000年郎…