猪生殖和呼吸综合征病毒B13株ORF7基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

利用单管RT－PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）分离株B13株包括ORF7基因的片段,并对其序列进行了测定,结果PRRSV分离株B13ORF7基因长度为384bp,编码128个氨基酸组成的15kD蛋白。与已发表的PRRSV LV株、VR－2332株进行同源性比较,发现核苷酸同源性分别为99.2%、59.4%;氨基酸同源性分别为98.4%、54.7%。。表明PRRSV分离株B13在基因结构上可能与LV株同属于欧洲亚群。同时构建了重组转移载体质粒pAcGHLT-B-ORF7,且该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV-SVI^-G)基因组DNA（baculo gold linearized baculovirus DNA）共转染草地夜蛾（Spodoptcra frugiperda,Sf9）细胞,得到重组病毒AcMNPV-OCC^--GST-6xHis-ORF7。在感染了重组病毒的Sf9细胞中检测到分子量为46kD的ORF7基因的GST融合蛋白表达产物,能被猪抗PRRSVB13株多克隆血清所特异识别。此结果为PRRS新型诊断抗原的研制奠定了基础。     

猪生殖和呼吸综合征病毒B13株ORF7基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

利用单管RT-PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）分离株B