猪细小病毒单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备猪细小病毒（PPV）杂交瘤细胞株,并对其分泌的PPV单克隆抗体进行鉴定。方法按常规方法制备并获得2株杂交瘤细胞。用染色体分析对杂交瘤细胞进行鉴定,用间接ELISA、免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）和间接免疫荧光试验（IFA）对其分泌的单克隆抗体进行效价测定、亚型鉴定和特异性鉴定。结果得到2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H9、1F9,染色体数目介于90～110之间。细胞上清效价均达1∶1×104,腹水效价均达1∶1×107,其亚型分别为IgG1、IgM,均为kappa链。2H9、1F9单抗与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒I型（PCV-1）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）、乙脑病毒（JEV）等均无交叉反应。IPMA和IFA检测结果显示2H9、1F9单抗均能与接种于PK-15细胞的PPV发生特异性反应。结论成功制备了2株抗PPV杂交瘤细胞株,证实其产生的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性。     

猪瘟病毒E2基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

目的利用昆虫细胞/杆状病毒系统表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,用于E2蛋白功能、开发CSF新型疫苗以及建立相关血清学诊断方法等研究。方法采用RT-PCR扩增CSFV E2基因,将PCR产物克隆到pGEM-T-Easy载体,将该基因插入到pFast-BacHT A载体中,构建重组转座载体后转化DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染sf9昆虫细胞,传毒3代,对表达蛋白进行Western-blot及免疫组化鉴定。结果成功克隆CSFVE2基因,其核苷酸序列为1119 bp。SDS-PAGE电泳结果显示表达E2蛋白相对分子质量约为43×103,Western-blot和免疫组化结果证实表达蛋白能够被CSFV标准阳性血清识别。结论在Bac-to-Bac杆状病毒系统中的成功表达了CSFV E2蛋白,与CSFV标准阳性血清具有较好的反应性。     

我国H7N2亚型禽流感病毒CK/HB/1/02株分离鉴定

从鸡组织中获得了一株分离物,能凝集鸡红细胞,经负染后电镜观察可见球形、外被囊膜的病毒颗粒,直径约 90～100nm;经血凝抑制和神经氨酸酶抑制试验鉴定为H7N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV),命名 为A／Chicken／Hebei／1／2002(H7N2)(简称CK／HB／1／02)。将该病毒接种SPF鸡,测得静脉接种致病指数(IVPI) 为0．00,剖检可见实验鸡多种组织器官有出血性变化,判为低致病力AIV;接种后7d从实验鸡泄殖腔棉拭中回收 到病毒,并在血清中检测到H7亚型AIV抗体。经RT-PCR扩增了病毒HA1基因片段(约1．1kb),测定其核苷酸 序列并与GenBank中的序列比较。结果表明,该病毒的HA1基因序列与AIV标准株A／Afri．Star．／Eng-Q／79 (H7N1)的HA1基因同源性最高,为99．4％;与以色列和意大利H7N2 AIV的同源性较高,为96．8％～98．2％;与 美国H7N2病毒的同源性很低,约为81．0％;其HA裂解位点的氨基酸序列为-KGR-GLF-,符合低致病力AIV的 特征。     

我国人与犬、猫共患病防控存在的主要问题与对策建议

随着社会经济的发展、城市化进程的加速及人们生活水平的不断提高,越来越多的宠物走进了人们的家庭,在人类社会生活中发挥了积极作用。但同时,宠物也是人兽共患病的重要传染源和传播媒介。与人类关系最为密切的犬、猫在人兽共患病的防控中具有重要的意义。在已报道的200多种主要的人兽共患病中,与宠物犬、猫有直接或间接关系的有70余种。随着宠物犬猫数量的大幅攀升和宠物业的飞速发展,我国人与犬猫共患病可能会出现逐步高发的趋势,疫病防控工作面临着许多问题。为了完善宠物管理制度,建立有效的防疫监督体系,对人与犬猫共患病实行有效的防控,本文就完善法律法规、形成综合管理机制,加强卫生监督、强化无害化处理、培养专业人才以及广泛开展宣传教育等6个方面提出了相关建议。     

抗传染性犬肝炎病毒单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备传染性犬肝炎病毒单克隆抗体。方法将用纯化的犬腺病毒1型（CAV-1）免疫的BALB／c小鼠脾细胞与SP2／0细胞在聚乙二醇作用下融合,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫酶试验（1EA）筛选,以有限稀释法克隆3次,制备单克隆抗体,并对制备完成的单克隆抗体进行生物学鉴定。结果成功得到2株能稳定分泌抗CAV-1的单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为1B、2H3,经鉴定其亚型分别为IgG2a和IgG2a,2株均为kappa链。腹水的ELISA效价可达10^7-10^8,IEA效价可达1：2560—1：5120。该单克隆抗体与CPV、CDV、FPV、CCV病毒无交叉反应。结论成功制备了抗CAV-1单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。     

我国H7N2亚型禽流感病毒CK/HB/1/02株分离鉴定

从鸡组织中获得了一株分离物,能凝集鸡红细胞,经负染后电镜观察可见球形、外被囊膜的病毒颗粒,直径约90～100nm;经血凝抑制和神经氨酸酶抑制试验鉴定为H7N2亚型禽流感病毒(Avian in fluenza virus,AIV),命名为A/Chicken/Hebei/1/2002(H7N2)(简称CK/HB/1/02).将该病毒接种SPF鸡,测得静脉接种致病指数(IVPI)为0.00,剖检可见实验鸡多种组织器官有出血性变化,判为低致病力AIV;接种后7d从实验鸡泄殖腔棉拭中回收到病毒,并在血清中检测到H7亚型AIV抗体.经RT-PCR扩增了病毒HA1基因片段(约1.1kb),测定其核苷酸序列并与GenBank中的序列比较.结果表明,该病毒的HA1基因序列与AIV标准株A/Afri.Star./Eng Q/79(H7N1)的HA1基因同源性最高,为99.4%;与以色列和意大利H7N2AIV的同源性较高,为96.8%～98.2%;与美国H7N2病毒的同源性很低,约为81.0%;其HA裂解位点的氨基酸序列为KGR-GLF-,符合低致病力AIV的特征.     

禽流感病毒A型和H5亚型RT-PCR检测试剂盒研究

目的　检测和鉴定A型、H5亚型禽流感病毒 (AIV) ,研发一种高效实用的检测手段。方法　根据Ming ShiuhLee报道的文献设计、合成引物 ,采用反转录和PCR一步法对A型、H5亚型禽流感病毒cDNA进行扩增和电泳鉴定 ,组装成禽流感病毒RT PCR试剂盒 ,对H1～ 15亚型AIV参考株、38份AIV国内分离株进行检测试验。结果　建立了A型、H5亚型禽流感病毒RT PCR检测方法 ,并在此基础上组装试剂盒 ,用A型试剂盒检测时 ,全部AIV毒株均为阳性 ,能检测 1 10 2 4血凝单位禽流感病毒 ;用H5亚型试剂盒检测时 ,仅有H5亚型AIV参考株和 19株H5亚型AIV分离株呈阳性 ,其余H1～H4、H6～H15参考株和H7、H9分离株以及 1株H5分株均为阴性 ,能检测1 6 4血凝单位禽流感病毒。 2种试剂盒对实验感染鸡病料检出率均为 10 0 %。结论　研制的AIVA型、H5亚型RT PCR试剂盒具有特异性强、敏感性高、稳定性和重复性好的特点。     

美洲型与欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7蛋白的截短表达和鉴定

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) Nsp7蛋白具有较强的免疫原性,且在美洲型(NA)和欧洲型(EU) PRRSV之间免疫原性差异显著,是抗体分型检测的理想靶抗原.本研究采用原核表达系统分别表达和纯化了NA和EU PRRSV Nsp7蛋白,Western blotting分析表明重组蛋白与相应血清型抗体有较强的免疫反应,但特异性较差,与另一血清型抗体仍存在一定的免疫反应,预示两种血清型PRRSV Nsp7蛋白存在免疫交叉反应抗原表位,全长表达不能用于分型诊断.利用生物学软件分析NA和EU PRRSV Nsp7的相似抗原表位,采用融合PCR缺失其编码序列后,经表达纯化获得NA-△Nsp7和EU-△Nsp7两种截短蛋白,蛋白大小约为43 kDa,Western blotting分析表明NA-△Nsp7和EU-△Nsp7可分别与相应血清型抗体发生特异性反应,且无免疫交叉反应,为NA和EU PRRSV分型抗体检测试剂的研制奠定了基础.     

高度重视高致病性禽流感病毒的公共卫生学意义

1997年发生于香港和2004年发生于泰国、越南的高致病性禽流感疫情,导致人感染发病和死亡,说明高致病性禽流感病毒可突破种间屏障而直接传染人。且尚无迹象表明禽流感在这些地区得到有效控制。2004年,我国部分地区发生了高致病性禽流感,但经各级政府和全国人民的共同努力,除在安徽省有一起复发外,全部得到了控制。鉴于我国曾有高致病性禽流感暴发的历史以及周边国家仍不断有禽流感疫情的发生以及H5N1亚型禽流感病毒的毒力逐年增加的现实,我们不得不高度重视高致病性禽流感病毒的公共卫生学意义。因此,我刊特邀专家就人感染禽流感病毒的历史、人感染禽流感病毒后的表现、禽流感病毒在以往人流感大流行中的作用以及防控措施等方面进行了专题介绍,并将国内部分研究成果集专论形式刊登。因时间仓促难免有不完善的地方,欢迎读者来信商榷,我刊将在以后的办刊过程中不断补充、完善。     

ELISPOT检测高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染后猪γ-干扰素的分泌情况

目的:研究高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)感染后猪外周血单个核细胞(PBMC)特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的免疫反应。方法:将仔猪接种PRRSV,于病毒接种前后各时间点分别采血并分离PBMC,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测PBMC分泌IFN-γ的情况。结果:猪感染高致病性PRRSV后,PBMC分泌IFN-γ的能力明显增强,对照组无明显变化。结论:该结果可为研究高致病性PRRSV致病机理提供参考,为评价PRRSV疫苗诱发的细胞免疫效应提供依据。