人白血病抑制因子在原核细胞中的表达与纯化

研究证明人白血病抑制因子(hLIF)是一种对多种不同类型的细胞和组织具有重要功能的细胞因子,其独特的生物学特性使其被广泛应用。介绍了自制的具有生物活性的hLIF,将hLIF基因克隆到pET32a中,并利用硫氧还蛋白(Trx)作为融合配体,在大肠杆菌中成功表达可溶性融合蛋白Trx-hLIF。亲和层析纯化后利用SDS-PAGE和Western blot对纯化结果进行检验。利用肠激酶(EK酶)切割融合蛋白,释放hLIF,随后通过简单的阳离子交换得到纯度高达98.1%的hLIF4.75mg。小鼠M1髓系白血病细胞增殖分析测定纯化的rhLIF的功能与hLIF具有相似的生物活性,EC50为5ng/ml,对应的比活性为0.5×107 IU/mg。     

猪流感的诊断技术研究进展

猪流感是由猪流感病毒引起的一种猪的急性、高度接触性呼吸道传染病,不仅给畜禽养殖造成重大经济损失,而且还对人类健康造成威胁,因此快速、敏感、准确诊断猪流感,具有重要的经济价值和公共卫生意义。从传统的实验室诊断技术和分子生物学诊断技术两方面综合阐述了猪流感的诊断研究进展。     

一株10-羟基喜树碱转化内生菌的筛选及鉴定

目的:利用从喜树中分离的内生真菌将喜树碱转化为10-羟基喜树碱。方法:采用摇瓶发酵进行生物转化,并利用薄层层析和高效液相色谱(HPLC)方法进行转化结果分析。通过内生真菌ITS区扩增,测序及系统进化分析等方法对菌种进行鉴定。结果:得到1株能将喜树碱转化为10-羟基喜树碱的菌株,结果显示该菌种为青霉菌属,转化率为7.37%。结论:微生物转化可作为化合物结构修饰以及得到目标化合物的重要手段。     

截短的猪繁殖与呼吸综合征ORF5基因及重组蛋白的原核表达

通过PCR方法从重组质粒pGEM-ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deleting ORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX-4T-1,在E.coliRosetta细胞中成功表达了重组蛋白GST-dORF5。用Western blotting鉴定表达蛋白,证明dORF5基因得到表达。本试验得到的重组蛋白,为进一步研究PRRS病毒结构蛋白的结构和功能奠定了基础。     

高产木质素酶荧光假单胞杆菌L-520的筛选及其发酵工艺优化

利用苯胺蓝鉴别培养基及产酶培养基进行菌种筛选,从甘肃兴隆山分离得到的10株菌株中筛选到一株高产木质素酶活力的菌株L-520,对该菌株进行16S rDNA鉴定,确定该菌为荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)。分别考察了接种量、装液量,初始pH对L-520发酵产酶的影响,以及碳源、氮源对木质素酶活力的影响。结果得到最佳培养基为:蔗糖1%,NH_4Cl 0.2%,KH_2PO_4 0.1%,MgSO_4?7H_2O 0.05%。优化后的发酵条件为:初始pH 5,接种量3%,装液量50%。经发酵工艺优化后,漆酶(Lac)、木质素过氧化物酶(LiP)、锰过氧化物酶(MnP)三种酶活分别为16.43 U/L,106.32 U/L,95.89U/L,与初始酶活相比分别提高了8.7、14.74、11.09倍。本研究筛选得到的荧光假单胞杆菌有助于染料废水中偶氮染料的降解。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是严重危害养猪业的病原,对PRRSV的分子生物学研究进展进行了综述,主要包括PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白及其功能、致病机理及复制与转录等.     

1株罗汉杉内生放线菌的鉴定、活性分析及抗生素生物合成基因的筛查

对1株从罗汉杉分离的内生放线菌LCB-0297进行系统学鉴定,在ISP3培养基上其气生菌丝灰烬色,有粉褐色可溶性色素,电镜观察孢子丝呈螺旋状,孢子椭球形表面多刺,通过其形态、生理生化特征初步确定为链霉菌。16S rRNA基因序列分析显示,放线菌LCB-0297与Streptomyces lanatus NBRC 12787（T）最为相似,相似性为98.531%,但在N-J树上仍在较远的2个分支上,确定为Streptomyces sp.。通过滤纸片法、SRB法进行抑菌、细胞毒活性检测,显示出较强的抑菌及抗癌活性。用PCR的方法对其多种抗生素生物合成基因进行筛查,该菌株含有Ⅰ型聚酮合成酶（PKS-Ⅰ）、非核糖体多肽合成酶（NRPS）、Ⅱ型聚酮合成酶（PKS-Ⅱ）的基因,含有多种潜在的抗生素合成基因。     

利用同源重组建立地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的基因置换/中断系统

地中海拟无枝菌酸菌U32是力复霉素SV的工业产生菌,其遗传操作一直是一个难题。在该菌株DNA高效电转化的基础上,利用同源重组的原理,建立了地中海拟无枝菌酸菌染色体的基因置换/中断系统。通过大肠杆菌重组质粒pDK110构建、转化及两步重组筛选,成功地用α淀粉酶基因（amy）取代了地中海拟无枝菌酸菌U32染色体上的3-氨基-5-羟基苯甲酸合成酶基因（ahbas）。第一步单交换和第二步双交换的频率分别是0.5%～0.7% 和 2%。将质粒pDK110变性后转化可显著提高重组频率,在第二步筛选双交换前对单交换重组子进行电击也能够提高其双交换重组的频率。此外,通过转化构建的两端带同源区段的线性DNA片段及一步重组筛选,我们在地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的amrD,rifO基因中间插入了阿普拉霉素抗性基因（apr）,其效率约为30～50转化子/μgDNA。     

IGF-II和IGFBP-1在小鼠胚胎植入中的作用

IGF-II和IGFBP-1在小鼠胚胎植入中的作用@田永强$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国 北京100080甘肃农业大学动物医学院　中国 兰州730070 @曹宇静$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国 北京100080 @赵兴绪$甘肃农业大学动物医学院!　中国 兰州730070 @段恩奎$中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室! 中国 北京100080     

具有免疫反应性的猪瘟病毒多表位基因在大肠杆菌中的克隆表达和鉴定

将猪瘟病毒不同抗原表位基因串联构成重组基因BT21,化学合成后克隆至pMD18-T载体中,然后再将BT21串联基因片段插入原核表达载体pGEX-6P-1。经酶切和测序鉴定后,构建的重组质粒pGEX—BT21转化大肠杆菌BL21（DE3）,通过IPTG诱导表达,表达产物进行SDS—PAGE分析,用G1utathione Se-pharose4B亲和层析法纯化目的蛋白和Western blot分析其免疫学活性。结果表明：融合蛋白GST—BT21以可溶形式表达,分子量约为33kDa,与预期大小相符,纯化的重组蛋白可被猪瘟病毒阳性血清所识别,具有良好的免疫学活性。从而为进一步研究该融合蛋白的免疫特性和功能奠定了基础。