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李全喜 《国外医学:分子生物学分册》1997,19(5):231-235
噬菌体显示技术是近年来出现的一种新技术、它是将外源蛋白通过与丝状噬菌体外壳蛋白融合而将外源蛋白表达于噬菌体颗粒的表达。该技术已经被广泛地应用于噬菌体短肽库的构建。由于该表达的短肽可以与其相应的结合分子相识别而发挥其生物活性,因而,噬菌体短肽库技术在分子间识别机理的研究,蛋白工程的改造以及药物的筛选、疫苗的研制等方面具有广泛应用前景。本综述了近年来噬菌体显示技术在短肽库中的应用进展。 相似文献
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噬菌体短肽库的构建及其随机短肽的多样性 总被引:1,自引:0,他引:1
噬菌体短肽库是将随机合成的寡核苷酸序列通过与单链噬菌体外壳蛋白基因融合,从而将随机短短肽表达于噬菌体的表面,将体外随机化学合成的寡聚核苷酸序列重组到单价噬菌体表达载体,构建了噬菌体短肽库,证明其库容为2×10^7集落形成单位,重组率为93%。 相似文献
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噬菌体短肽库是将随机合成的寡核苷酸序列通过与单链噬菌体外壳蛋白基因融合,从而将随机短肽表达于噬菌体的表面。将体外随机化学合成的寡聚核苷酸序列重组到单价噬菌体表达载体,构建了噬菌体短肽库,证明其库容为2×10 ̄7集落形成单位(cfu),重组率为93%。同时将11个随机克隆进行序列测定,证实其寡聚核苷酸序列和氨基酸的分布几乎是完全随机的,其多样性可以满足特异性短肽筛选的要求。 相似文献
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能指引体内“交通”的肽ErkkiRuoslahti与RenataPasqualini在今年3月28日出版的Nature上报道,用编码不同肽的DNA顺序与编码噬菌体表面蛋白的基因连接,创建了一个噬菌体库;将此噬菌体库注射到小鼠体内,1~4分钟后割取各种... 相似文献
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豆蔻酰转移酶的噬菌体展示抑制肽筛选研究 总被引:8,自引:3,他引:5
用固相柱筛库法和包被筛库法,从噬菌体展示的随机15肽库中亲和结合筛选艾滋病、肿瘤等疾病相关酶-豆Kou酰转移酶的噬菌体展示抑制肽。在筛选得到亲和结合噬菌体后,用建立的体外豆Kou酰转移酶(NMT)抑制活性分析系统,获得了16个具有抑制NMT活性作用的噬菌体展示抑制肽。通过DNA序列测定、相应随机肽序列推定和序列联配等一系列分析,表明两种筛库方法所得抑制肽序列有重叠,并包含一个较为特征性的PX0.3 相似文献
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目的:研究从噬茵体展示库中筛选内毒素结合蛋白质配基,为其在内毒素致病作用机理及在内毒素血症防治研究中的应用奠定基础.方法:以内毒素为靶分子从随机七肽噬菌体展示库中筛选内毒素的高亲和力噬菌体配体,通过ELISA鉴定,DNA测序及相关软件分析.结果:所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405nm可达1.965通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列,认为FHENWPS肽段中包含有与内毒素分子发生亲和结合的一个共有序列.该序列展示肽的等电点为5.36,具有双嗜性,这有利于肽与LPS分子表面的位点相互作用从而产生亲和吸附.结论:运用亲和筛选方法从肽库中筛选内毒素结合蛋白质配基是可行的. 相似文献
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从随机噬菌体肽库中筛选抗草鱼出血病病毒多肽的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
从随机噬菌体九肽表位库中筛选出抑制草鱼出血病病毒(GrasCarpHemorhageVirus,GCHV873)感染的多肽分子。采用完整、生物素化的草鱼出血病病毒颗粒作为受体,与以融合蛋白形式在丝状噬菌体fUSE5的外壳蛋白Ⅲ的N端表达的随机九肽库作用。经三轮体外亲和筛选(Biopanning)及ELISA法检测后,从肽库中筛选出16个与病毒高亲和力结合的噬菌体克隆,其中六个阳性克隆能有效地抑制病毒在CIK细胞中的复制,并使病毒的半数组织培养感染剂量(TCID50)下降五个数量级。表明噬菌体肽库技术完全能够应用于抗病毒研究,为研制抗病毒短肽制剂打基础。 相似文献
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目的利用噬菌体随机肽库技术筛选志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的单抗的识别表位。方法以抗志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的单克隆抗体筛选噬菌体随机12肽库,挑取阳性克隆测定DNA序列,推导其氨基酸序列并进行同源性分析。通过ELISA鉴定获得的噬菌体短肽与单抗之间的结合特性。结果从噬菌体随机12肽库中筛选出20株可与抗志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的单抗特异结合的噬菌体克隆,其中多数克隆呈现核心序列WTSRW(Q),该序列与志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的一级序列具有一定的同源性。结论WTSRW(Q)序列是志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B单抗的识别表位。 相似文献
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随机十肽库的构建及血管形成素结合肽的筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
将合成的含有随机序列(NNK)10的寡核苷酸片段,克隆入噬菌体呈现载体噬菌粒pCANTAB5E的SfiⅠ,NotⅠ位点,即cpⅢ蛋白信号肽与成熟肽之间,电转化E.coli TG1,构建了噬菌体表面呈现的十肽库,实际库容为3.53×107,插入率为66.7%.经辅助噬菌体M13KO7超感染后,获得滴度为4.8 ×1011 pfu/ml的噬菌体上清.经过两轮panning筛选和富集,从构建的随机十肽库中筛选到26个具有血管形成素结合活性的重组噬菌体克隆,对其中12个阳性噬菌体克隆的短肽序列进行了分析,ELISA检测结果显示12个阳性噬菌体克隆都能够与血管形成素特异性结合. 相似文献
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噬菌体表面展示肽库技术是近年来发展起来的用丝状噬菌体展示外源肽的一项新技术,被广泛应用于分子识别的各个领域。本文就该技术在病毒受体、病毒抗原表位、病毒抗体以及病毒疫苗和病毒性疾病的诊断等央电荷和一简要概述。 相似文献
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利用噬菌体随机肽库展示技术,筛选出与脓毒症单核/巨噬细胞特异性结合的短肽,探索脓毒症治疗的新方法.分别以经过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)处理的人外周血单核细胞株(THP-1)细胞作为筛选的靶细胞,以未经LPS处理的THP-1细胞作为非特异性噬菌体吸附细胞,对噬菌体随机环七肽库进行4轮“差减"筛选,经过细胞ELISA验证阳性噬菌体克隆,对获得的阳性克隆进行DNA测序及生物信息学分析,并进一步利用免疫荧光实验,鉴定噬菌体克隆与LPS处理THP-1细胞的结合特异性.4轮筛选后,随机挑取的噬菌体克隆,测序后得到可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合肽.对去冗余后的七肽进行Clustal W多序列比对分析和BlastP蛋白同源相似性分析,细胞免疫荧光检测确定获得的噬菌体展示七肽可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合.噬菌体随机肽库技术为脓毒症单核/巨噬细胞表面靶位的筛选提供了高效、快捷的筛选体系,实验获得的多肽基序具有高度保守性和细胞特异性,这些多肽的生物活性将是下一步的研究内容. 相似文献
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噬菌体展示系统的研究进展 总被引:7,自引:0,他引:7
噬菌体展示系统的研究进展许正平(浙江大学生物科学与技术系,杭州310027)李伯良(中国科学院上海生物化学研究所,上海200031)关键词噬菌体展示系统噬菌体展示是一种将外源肽或蛋白质与特定噬菌体衣壳蛋白融合并展示于噬菌体表面的技术。若展示的是随机肽... 相似文献
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表位九肽库的构建及人Ⅳ型胶原酶特异结合肽的筛选 总被引:3,自引:0,他引:3
将人工合成的编码九肽的随机序列DNA片段克隆进丝状噬菌体表达载体FUSE5,经多次电击转化和表达,获得肽段与噬菌体pⅢ蛋白融合并展示在噬菌体表面的随机序列九肽表位肽库。库容量达10 10个克隆。以Ⅳ型胶原酶为靶蛋白,采用亲和纯化筛选模式,从中筛选出Ⅳ型胶原酶结合肽。进一步ELISA检测筛选出与Ⅳ型胶原酶特异结合的20个阳性克隆。序列分析发现一组肽含有WDXXD的共同序列,一组含有WVGXXR的共同序列。其中WDXXD的序列与Ⅳ型胶原酶单链抗体可变区序列同源。结果表明,多肽库是筛选蛋白特异结合肽的有力工具,表位九肽库的构建和筛选方法的建立为进一步应用筛选具有高亲和力的特异结合肽奠定了基础。 相似文献
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通过对胰蛋白酶抑制剂的筛选发现,噬菌体肽库不仅可以用于亲和性筛选,而且噬菌体肽(phagepeptide——peptidedisplayingonphage)可以直接用于对亲和筛选得到的克隆进行胰蛋白酶抑制实验,即所谓的功能性筛选.功能性筛选前后的测序结果表明用噬菌体肽直接进行功能性筛选确实能够筛去大部分的非抑制剂克隆. 相似文献
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目的:构建能用于抗原表位筛选的猪肺炎支原体(Mhp)P97基因C-端序列噬菌体随机肽库.方法: 以Mhp Z株(强毒)基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得Mhp P97基因的C-端部分序列,扩增产物用DNaseⅠ消化并回收50 bp~100 bp的随机片段,将回收的随机片段插入pC89pⅧ型噬菌粒载体中,转化大肠杆菌XL1-Blue,辅助噬菌体VCSM13超感染,使P97基因随机片段以融合蛋白的形式展示于噬菌体表面, 从而成功构建了P97基因特异性噬菌体随机肽库.用PCR及DNA测序法鉴定所建文库的随机性和多样性,测定肽库的滴度并计算库容量.结果: 所建肽库的容量约为1.8×104,滴度约为1.3×1012 TU/mL,PCR检测及DNA测序结果显示插入片段具有随机性和多样性.结论: 所建随机肽库具有较好的随机性和多样性,能够满足后续的抗原表位筛选,为进一步的深入研究奠定了基础. 相似文献
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噬菌体呈现肽库是噬菌体显示技术的一个非常重要的分支。自问世以来,随着分子生物学技术的飞速发展,它已被广泛应用于免疫学、分子生物学、药理学、疫苗学等生命科学领域。简要概述了这一技术的应用。 相似文献