两类嗜碱细菌产生环状糊精葡糖基转移酶的条件和酶性质的比较

从土壤里分离到两类在碱性培养基中生长并产生环状糊精葡糖基转移酶的细菌,一类与国外已在工业生产中使用的芽孢杆菌相似,另一类为无芽孢的杆状细菌,尚未见报道。两类细菌的代表菌株,芽孢杆菌32—2要求的产酶因子以酵母膏最好;无芽孢杆菌52—2号则用玉米浆最好。碳源和氮凉也有所不同。52—2产酶过程比32—2稍晚,酶反应条件基本相近。     

利用环状糊精纯化淀粉水解酶类

环状糊精是由环状糊精葡萄糖基转移酶作用于淀粉所产生的一组非还原性环状低聚糖 ,最常见的有α,β和γ型 ,它们分别是由 6、7或 8个葡萄糖单元以α 1,4糖苷键联结而成的。由于其特殊的“内疏水外亲水”分子结构 ,使得环状糊精能与多种有机分子形成特殊结构的包合物 ;同时环状糊精还能与酶的活性 /非活性部位相互作用 ,所以以环状糊精为配体 ,利用亲和层析纯化水解淀粉的酶类     

嗜碱性芽孢杆菌N—227环状糊精葡基转移酶基因在枯草杆菌中的整合表达

大多数枯草杆菌载体在表达外源基因时会出现分离或结构不稳定,而将目的基因整合至染色体上的基因整合方法,近年来得到人们的普遍关注。通过构建一套整合载体,将β－环状糊精葡基转移酶基因随机整合至枯草杆菌１Ａ２８９的染色体上,从表达氯霉素抗性及β－ＣＧＴａｓｅ阳性株中选得菌株Ｂｓ２,其氯霉素抗性为５γ／ｍｌ,β－ＣＧＴａｓｅ酶活为２６６μ／ｍｌ。后又经多次整合及更高浓度氯霉素抗性的选择,获得一株Ｂｓ１６－７     

木霉GXC产β—葡聚糖条件和酶学性质

研究了木霉GXC产β－葡聚糖糖的条件,结果表明,最适产酶碳源的麸皮,氮源为硫酸铵,产酶的最适条件为,初始pH为4.0-5.0,30℃培养44h,粗酶液经硫酸铵沉淀,SephadexG-25,Sephadx G-100和DEAE－Sephadex A-50柱层析得到纯β－葡聚糖酶,SDS－PAGE凝胶电泳显示－条带,测得分子量为35kD,该酶最适反应pH5.0,最适反应温度为60℃,在40℃以下,pH4.0-5.0酶活力相对稳定,5.0mmol/L以下的Ca^2 ,Zn^2 和Fe2 ,以及10.0mmol/L以下的Co^2 对酶活力有激活作用,而Cu^2 和Fe^ 具有抑制作用。     

链霉菌Z94-2碱性脂肪酶产生条件及酶学性质

在１５２ 株脂肪酶产生菌中,链霉菌Ｚ９４２ 产脂肪酶活力为５９６ｕ／ ｍＬ,其最适培养基（ｇ／Ｌ） 为：糊精１０ 、黄豆饼粉３０ 、尿素１０ 、Ｋ２ＨＰＯ４ ０－５ 、ＭｇＳＯ４ ０－５ 、ＮａＣｌ １ 和ＡＥＯ９ ０ ．５ ,产酶的最适条件为：初始ｐＨ９ ．５ ～１０－０ ,在２６ ℃培养４８ｈ 。用ＰＶＡ 橄榄油乳化系统测定该酶的最适ｐＨ９ ．８ ,最适温度３７ ℃,在ｐＨ８－６ ～１０－２ 于５ ℃存放２４ ｈ ,酶活力不变。０－１４ｍｏｌ／Ｌ 的氯化钙有较大的激活作用。     

环状糊精与环状糊精葡萄糖基转移酶

本文简述了环状糊精的结构性质和用途,并对环状糊精葡萄糖基转移酶的测定方法和固定化做了简要综述。     

产海因酶的菌种筛选和产酶条件的研究

利用5-苄海因作为唯一氮源法筛选高产海因酶的菌种,从本实验室保存的221株菌种中筛选出12株具有不对称水解5-苄海因生成N-氨甲酰基-苯丙氨酸的菌株,其中假单胞菌（Pseudomonassp.)X4-49具有较高的产酶活力,对此菌的产酶条件的研究表明,产酶的最佳碳源为甘油,最佳氮源为蛋白胨,最佳诱导物为苄海因,尿嘧啶,苄海因作为诱导物的有效浓度为0.2%,产酶的最适培养基的初始pH为7.0。培养条件为33℃,13h。     

链霉菌Z94-2碱性脂肪酶产生条件及酶学性质

在１５２株脂肪酶产生菌中,链霉菌Ｚ９４－２产脂肪酶活力为５９６ｕ／ｍＬ,其最适培养基（ｇ／Ｌ）为：糊精１０、黄豆饼粉３０、尿素１０、Ｋ２ＨＰＯ４０．５、ＭｇＳＯ４０．５、ＮａＣｌ１和ＡＥＯ９０．５,产酶的最适条件为：初始ｐＨ９．５～１０．０,在２６℃培养４８ｈ。用ＰＶＡ橄榄油乳化系统测定该酶的最适ｐＨ９．８,最适温度３７℃,在ｐＨ８．６～１０．２于５℃存放２４ｈ,酶活力不变。０．１４ｍｏｌ／Ｌ的氯     

产α-淀粉酶的米曲霉菌株筛选及产酶条件的研究

从51株米曲霉(Aspergillus oryzae)中筛选到5株产α-淀粉酶活力较高的菌株,对其中的5037号菌株进行了产酶条件的试验:最适培养温度为30—33℃,时间为2.5天,3天以后酶活力开始下降;pH3.5—6.0之间对产酶活力影响均不大;外加碳源以糊精和瓜干粉较好,其中玉米粉加量以5%最好;外加氟源中NH₄NO₃和尿素等对酶的形成有促进作用;NH₄Cl抑制酶的形成。在最适产酶条件下,酶活力平均达438.8u/ml。     

新的纤溶酶产生菌培养条件及其酶性质研究

采用定向筛选方法,分离到一株能产生强烈分解纤维蛋白的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)EM29-5。对其生长,产酶条件,酶性质进行系统研究,结果表明：生长和产酶温度25－37℃,37℃时最好,生长最适pH6.4-7.0,产酶为pH7.0-8.0;12种碳源氮源均能利用,但对生长和产酶均有利的是大豆浸出淮EM29－5。纤溶酶为外分泌蛋白酶,发酵上清液经硫酸铵沉淀,透析脱盐,上离子交换柱和凝胶过滤柱后得纯酶。经SDS－PAGE电泳得单一条带,分子量为32500左右;等电聚焦电泳分析PI9．0左右;酶蛋白在pH5.0-10.0范围内稳定,作用最适pH9.0,为碱性蛋白酶;5mmPMSF能完全抑制酶活性,为氨酶蛋白酶;不能分解人工合成的氨基酸的酯,而能分解纤维蛋白（原）,特别对交联纤维蛋白具更高亲和性。     

α-葡萄糖苷酶高产菌株HB-9-5的选育及产酶条件的优化

从土壤中筛选出一株高产α-葡萄糖苷酶的细菌HB-09-5,对其粗酶液进行研究发现,最适反应pH为6.0,最适反应温度为50℃,pH在4.0-7.0,温度在55℃以下保持酶活力相对稳定。通过对产酶条件进行优化,单因素试验表明,最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为牛肉膏,Mg2+和Ca2+对产酶有促进作用。优化发酵条件后,菌株HB-09-5产酶水平可达到20.95U/mL,比出发菌酶活提高了2.3倍。     

两株保加利亚乳杆菌产β-半乳糖苷酶条件的优化及酶活力测定

目的优化2株保加利亚乳杆菌产β-半乳糖苷酶的培养条件,测定其在最适于产酶条件下的酶活力,并初步观察酶活力稳定性。方法测定2株保加利亚乳杆菌——来源于酸奶的wch9901和标准菌株1．1480在不同培养时间、培养基碳源、摇床转速、气体环境下产生的β-半乳糖苷酶的活力,优化产酶条件。测定2株菌在其最适产酶条件下的酶活力。将制得的1．1480粗酶液分别置冰浴和20℃水浴,每隔1h测定一次粗酶液中β-半乳糖苷酶活力,观察酶活力稳定性。结果2株保加利亚乳杆菌的最适产酶条件分别为：1．1480于30℃有氧静止培养36h;wch9901于37℃厌氧静止培养18h,培养基含乳糖。在最适产酶条件下,1．1480的酶活力为0．321NLU／ml粗酶液,比酶活为2．469NLU／mg蛋白;wch9901的酶活力为0．401NLU／ml粗酶液,比酶活为6．169NLU／mg蛋白。1．1480粗酶液于冰浴可稳定保存6h,于20℃水浴可稳定保存5h。结论wch9901与1．1480的最适产酶条件有所差异,前者产酶迅速,产酶量多。     

木霉GXC产β-葡聚糖酶条件和酶学性质

研究了木霉GXC产β-葡聚糖酶的条件.结果表明,最适产酶碳源为麸皮,氮源为硫酸铵;产酶的最适条件为初始pH为4.0～5.0,30℃培养44h.粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-25、Sephadex G-100和DEAE-Sehadex A-50柱层析得到纯β-葡聚糖酶,SDS-PAGE凝胶电泳显示一条带,测得分子量为35kD.该酶最适反应pH5.0,最适反应温度为60℃,在40℃以下、pH4.0～5.0酶活力相对稳定.5.0mmol/L以下的Ca2+、Zn2+和Fe2+,以及10.0mmol/L以下的Co2+对酶活力有激活作用;而Cu2+和Fe3+具有抑制作用.     

聚半乳糖醛酸酶高产菌的产酶条件研究

通过单因素及正交试验对米曲霉（Aspergillus orza）C491产生聚半乳糖醛酸酶的发酵条件进行了优化。该菌株的摇床发酵滤液以桔子果胶为底物时酶活力可达344．8U／mL。产酶最适培养基组成为：麦芽汁（糖度6％）中添加6％桔皮粉,2％硫酸铵（w/v）。最适培养条件：起始pH4（灭菌前）,30℃,r/min,培养112h。Tween80可以促进C－491产酶。     

产3—脱氧葡糖醛酮代谢酶微生物的研究

从海洋细菌中筛选到一株产３－脱氧葡糖醛酮代谢酶活力较高的菌株Ｆｓ－４－Ｃ－３,并对其进行了最适产酶条件的研究。实验证明：以鱼肉蛋白胨为氮源、蔗糖为碳源,在培养基起始ｐＨ值为７．８～８．０,温度为２８℃,盐度为５％的情况下,培养９６ｈ,产酶最高,３－ＤＧ可以诱导产酶。     

碱性普鲁兰酶产生菌选育和发酵条件的研究

从儿童食品中分离筛选到1株产碱性普鲁兰酶活性较高的菌株,编号为SX－12,初步鉴定为芽孢杆菌Bacillus sp.,研究了SX－12原生质体制备与再生最佳条件,其原生质体经紫外线诱变处理,选育出产碱性普鲁兰酶的高产菌株SX－12C67,酶活由出发菌株的2．42U/mL提高到6．87U／mL,提高了约1．8倍,在此基础上对产酶条件进行了优化,优化后的最佳发酵培养基为：可溶性淀粉3％,蛋白胨1．0％,酵母膏0．5％,K2HPO42％,MgSO4.7H2O0.05%MnCl20.0001%,最适p;H9.5,最适温度40℃,初步研究了酶的部分性质,酶反应的最适pH,温度分别为10．0－10．5和55℃,在55摄氏度反应条件下,酶在pH6.0-11.0的范围内都具有一定的活性,Ca^2 ,Mn^2 ,Mg^2 等离子是酶的激活性,Zn^2 ,Hg^2 等离子是抑制剂。     

节杆菌K1108乙内酰脲酶产酶条件研究

研究了乙内酰脲酶产生菌节杆菌K1108的产酶条件。该菌乙内酰脲酶为诱导酶,存在于细胞内,乙内酰脲水解酶和N氨甲酰氨基酸水解酶是同时被诱导产生。最适诱导物为5苄基乙内酰脲,而5吲哚甲基乙内酰脲和5苯基乙内酰脲等不能诱导其酶的产生。筛选到一种安慰诱导物,诱导活性提高了2倍多。对产酶培养基进行了筛选和优化,在最适条件下,K1108产酶能力可达108U/mL。     

甲壳素脱乙酰酶产生菌产酶条件的优化

采用斜面培养和液体发酵培养产甲壳素脱乙酰酶的真菌构巢曲霉,并且研究了产酶条件。结果表明,构巢曲霉的最适产酶条件为：发酵培养基初始pH值为6.5、发酵时间为96h、培养温度为31℃、碳源浓度为2%、氮源浓度为2%、金属离子浓度为0.01mol/L、接种量为6%。     

产β-葡聚糖酶基因工程菌发酵条件的优化

目的以1株酶产量高、耐热性好的重组大肠埃希菌BL21为材料发酵生产β-葡聚糖酶。方法选用麸皮、豆粕等农副产品配制复合碳源、氮源,优化半合成发酵培养基,并通过正常试验确定最佳培养条件。结果研究得到摇瓶水平产β-葡聚糖酶的最佳培养基（g/L）为：麸皮6.7,玉米粉1.7,豆粕13.8,豆粉13.8,酵母粉7.0,NH4Cl 7.0,Na2HPO4.12H2O3.0,MgSO4.7H2O0.75,CaCl20.5,吐温80 0.8%。通过正交试验确定了产酶最佳初始pH为6.2,装样量为35 mL/250 mL,接种量为1%。采用优化后的工艺,在37℃200 r/min培养过夜,经乳糖诱导6 h后,最高酶活可达到830.7 U/mL,是初始产酶条件的3.4倍。结论该半合成培养基在重组大肠埃希菌产β-葡聚糖酶方面具有很大优势。     

1株产单宁酶细菌的分离鉴定及产酶条件研究

从富含单宁酸的土壤中分离筛选出1株产单宁酶的细菌,经过菌落形态观察和16S rDNA分子生物学鉴定,该细菌为肺炎克雷伯菌。对该菌所产胞外单宁酶的发酵条件进行了初步研究,得出最佳产酶条件：培养温度37℃,培养时间36 h,培养转速180 r/min,单宁酸含量2 g/L,最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为氯化铵,此时所产单宁酶活力为0.8 U/mL。