人精液对RAJI细胞中EPSTEIN-BARR病毒早期抗原的诱导

在大戟科、瑞香科、豆科和其它科植物中,发现有些植物含有能诱导人伯基特淋巴瘤细胞——Raji细胞中EB病毒早期抗原的物质,并已证明其中有的是很强的促癌物质,如12-0-十四烷酰巴豆醇-13乙酸酯(TPA)、桐油提纯的HHPA、芫花和黄芫花等。某些人的精液也含有能激活EB病毒的物质。本文报告中国人的精液,以及人精液与从宫颈癌病人分离的细菌培养液,对EB病毒早期抗原的诱导作用和协同诱导作用。     

免疫脂质体与人胃癌细胞的相互作用

我们把抗人胃癌细胞M85的单克隆抗体3Hll插入脂质体的脂双层做成免疫脂质体,研究了这些免疫脂质体与M85细胞的相互作用.结果表明,M85细胞对免疫脂质体的吸收与温育时间、温度密切相关.在37℃温育10小时,细胞吸收的免疫脂质体的量是在4℃时的7倍左右.37℃温育5小时,靶向脂质体结合在M85靶细胞上的量是非靶向脂质体的2倍多;与非靶细胞—人皮肤成纤维细胞Fb32的结合量只有与M85靶细胞结合量的1/6.游离单抗3Hll能够抑制靶向脂质体与靶细胞的结合,而专一性与3Hll抗体不同的单抗3G9则不能.NH_4Cl和NaN_3等内吞作用抑制剂使靶细胞吸收免疫脂质体的量分别减少58%和79%.与此同时,NH_4CI还能抑制包入脂质体的ADM,而不能抑制游离ADM的细胞毒作用.因此我们的结论是,3Hll免疫脂质体能够与靶细胞专一地结合,并把所荷载的物质主要经内吞作用输送到细胞内,杀伤靶细胞.用荧光显微镜对与荧光免疫脂质体温育的M85细胞进行的形态观察也支持上述结论.     

人体肝癌细胞膜相关胚胎抗原的免疫电镜观察

动物或人的肿瘤细胞中常出现个体发育阶段胚胎细胞所具有的某些蛋白质、酶、转移核糖核酸等,这已为大家所熟知(Fishman和Sell,1976)。我们曾用免疫膜荧光法对离体培养的人体肝癌细胞进行了研究,发现肝癌细胞具有与胎儿肝细胞有交叉反应的膜抗原(施渭康等,1977)。为了进一步弄清这一胚胎抗原在这些细胞表面的分布,我们用铁蛋白标记抗体技术进行了电镜观察。本实验结果进一步证实了免疫膜荧光法所观察到的现象,说明人体     

细胞选择性表面粘附技术成功

细胞选择性表面粘附技术成功每个活细胞表面都附着了一层糖类物质,这些糖类物质主要与细胞上的受体等蛋白质的末端相连。如果能使这些糖分子结合某些特定物质,如药物,那么就可以将特定的药物锚定在特定的细胞上达到治疗效果。以往,科学家们试图寻找方法改变这些糖分子...     

制备大脂质体的一种简便方法

脂质体(liposome)作为一种生物膜的模型系统得到相当广泛的应用,主要采用小的脂质体,其直径常在0.03—0.1微米。近十几年来脂质体被用作核酸和蛋白质这样一些大分子物质的运载体,用于研究生物遗传信息的传递和表达。甚至某些细胞器、细菌也被包裹到脂质体里,利用脂质体与细胞的融合,将它们送入受体细胞。这样制备大容量的脂质体就十分     

用酸敏脂质体将荧光染料导入NIH3T3细胞及人胚肺成纤维细胞

我们制备了由DOPE/CHOL/OA(4:4:3)组成的酸敏脂质体,将荧光染料Calcein装载在脂质体内,并将这种包有荧光染料的脂质体导入NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞。90％以上的细胞有荧光物质进入,并均匀分布于细胞质。我们还制备了由DOPC/CHOL/OA(4:4:3)组成的非酸敏脂质体,其将荧光物质导入细胞的能力不如前者好。本文使用的冷冻干燥法制备脂质体,方法比较温和、所得到的脂质体有利于携带DNA或其它生物活性物质。     

脂质体介导转染法的原理与应用

脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层 ,又称为人工生物膜。最初 ,人们只是运用脂质体模拟生物膜 ,研究膜的构造及功能 ,从而发现了膜的融合及内吞作用 ,因而可用作外源物质进入细胞的载体。相对于电穿孔法和磷酸钙共沉淀转染法 ,脂质体介导转染法简便易行 ,成本适中 ,具有较高的转染率和较小的细胞毒性。1 .脂质体的组成和制备1 .1　组成脂质体的脂类　　现有的商业化脂质体均为阳离子脂类与中性脂类的复合体 ,如ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ等 ,中性脂类多为二油酰磷脂酰乙醇胺 (ＤＯＰＥ)。其中 ,阳离子脂类…     

免疫脂质体对白血病细胞杀伤的扫描电镜观察

采用脂质体技术包裹中华眼镜蛇膜毒素(CT)并与抗人T细胞单克隆抗体结合制备成pH敏感型免疫脂质体.它在pH8.0～7.0间十分稳定,但在接近细胞浆微酸性环境(pH<6.0)时很容易破裂而释出包裹之内容物.用这一免疫脂质体处理人白血病T淋巴细胞系CEM细胞并用扫描电镜观察脂质体对靶细胞的作用,显示这一免疫脂质体可特异性杀灭靶细胞而对抗原阴性细胞影响不大．     

具靶向性的转铁蛋白—脂质体的制备

具靶向性的转铁蛋白──脂质体的制备杨静平,王瓞,林其谁（中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,２０００３１）关键词脂质体;人转铁蛋白;靶向性;癌细胞;天花粉蛋白利用正常细胞和癌细胞表面受体或抗原物质的差异,用相应配体修饰脂质体表面,使...     

脂质体法和电穿孔法转染哺乳动物细胞研究

用脂质体法和电穿孔法分别转染Cos-7,Vero和Namalwa细胞.发现脂质体法在转染效率和操作方便方面比电穿孔法优越,而电穿孔法对细胞种类的适用性方面似乎比脂质体法广. 结果表明,电穿孔法能转染Cos-7,Namalwa和Vero细胞,而用脂质体法只能转染Cos-7和Vero细胞.     

脂质体及其在生物工程研究中的应用

<正> 前言1.研究脂质体的工作简介蛋白质、核酸、脂类是组成生命物质的三种最基本的成份,对其结构及功能的研究早已为人们所熟知。相形之下,脂类分子的聚集体形成的某些结构及生物学功能可能长期未受到重视。实际上早在一百多年前Virchow(1884)已经注意到髓磷脂可以形成脂质体和螺旋。Lehma(1904)等人八十年前就描述过所见到的脂质体结构。本世纪三十年     

人源细胞内物质转运调节分子ARFGAP1对细胞分泌功能的影响

 ARF GAP是重要的细胞内物质转运调节分子 .最近 ,在人胎肝 c DNA文库中发现一种新基因 ,其编码的氨基酸序列与大鼠的 ARF1 GAP有 32 %同源性 ,故将其命名为“ARFGAP1”.对ARFGAP1进行功能研究 ,利用分子克隆技术构建绿色荧光蛋白 (GFP) - ARFGAP1融合基因表达质粒 (p EGFP- C1 - ARFGAP1 ) ,经脂质体转染将其导入 COS- 7细胞瞬时表达 ,利用绿色荧光确定ARFGAP1的亚细胞定位 .结果显示 ,ARFGAP1位于细胞质部分 ,表达量高时 ,在核周高尔基体区聚集呈团块状或颗粒状 .构建真核表达质粒 pc DNA3.1 /myc- His- ARFGAP1 ,在 COS- 7细胞中表达 ,并用 ARFGAP1和分泌型碱性磷酸酶 (SEAP)真核表达质粒共同转染 COS- 7细胞 ,发现ARFGAP1在细胞中过表达能部分抑制 SEAP的分泌 .结果证明 ,ARFGAP1对细胞的物质转运和分泌功能有调节作用 .     

两个人生长激素基因在SV40病毒重组体感染的猴细胞中的表达

我们已经建造了带有两个不同的人生长激素(hGH)基因的SV40重组体。用这些重组体感染的猴肾细胞能合成、加工并分泌人生长激素。有着与克隆的人生长激素互补DNA(eDNA)同样编码序列的基因1,共产物从几个标准来看,与垂体hGH没有什么区别。预定编码一个变异蛋白质的基因2,其产物比垂体hGH的免疫反应活性要小,但能有效地与hGH细胞表面受体结合。这些结果表明,基因2有可能表达而产生我们以前未辨别的hGH形式。这些结果显示了在真核细胞中,用基因转移的方法产生成熟的激素是可能的。这些结果也证明了SV40—猴细胞系统可以用于生产和鉴定动物细胞分泌的蛋白质。     

用肝素释放细胞表面受体结合的LDL并比较兔及人血清LDL结合能力

应用人血清清蛋白代替LDS,建立了肝素释放细胞表面与受体结合的LDL的方法,并比较了人及家兔LDL结合家兔细胞表面受体的能力。在37℃不同保温时间(从0—180分钟),肝素释放的细胞表面受体~(125)I-LDL量增加缓慢而通过受体进入细胞的LDL量增加迅速。在37℃以不同剂量的LDL(13—78μg/ml)与细胞保温2小时,肝素释放的细胞表面受体LDL量也增加缓慢,而进入细胞的量增加更为迅速。结果显示LDL在细胞表面受体部位不断进入细胞内并迅速被新的LDL分子所取代,但当LDL增至78μg/ml时逐渐变慢,与Goldstein观察相似。肝素释放的~(125)LDL量在加入量约50 μg/ml时呈现平坦,与Goldstein观察相似。这说明用人血清清蛋白代替LDS同样可以观察到LDL受体的饱和特性。在同一实验条件下。肝素释放家兔的~(125)I-LDL比人高l倍,家兔通过受体进入细胞的~(125)I-LDL比人高1.7倍。二者差别非常显著(P<0.001)。显示兔血清LDL的结构可能在某些方面不同于人。     

脂质体包裹增加了阿霉素的体内抑瘤作用

我们用超声法制备了内部包裹阿霉素,表面带有抗人胃癌细胞M85的单克隆抗体3Hll的阿霉素靶向脂质体,研究了这些脂质体经腹腔注射入荷瘤裸鼠之后的组织分布和抑瘤效果.结果表明,靶向脂质体组阿霉素在肿瘤组织的含量明显高于游离阿霉素组,而在心脏中的含量,前者则比后者有所降低。分别在接种M85细胞后5天、13天和25天,按4mg/kg的剂量注射阿霉素靶向脂质体和游离阿霉素,在40天时观察结果。我们发现,无论在动物存活数、肿瘤发生率还是在肿瘤生长速度方面,阿霉素靶向脂质体的抑瘤能力都明显地优于游离阿霉素。     

植物原生质体融合研究的近况

一、概述近代植物原生质体融合研究是从Power等人(1970)的工作开始的。如果把这十多年有关的资料加以分析归纳,不难看出它之所以能发展是基于植物生理学和细胞生物学中两个试验途径的成就即:(1)植物细胞和组织培养方法;(2)分离和操纵原生质体的技术。有了这些,才能使研究从个体水平进入细胞水平,能够在容器中用数以万计的细胞进行     

异视黄酸对人肝癌细胞的诱导分化作用

10μmol/L的异视黄酸(13顺视黄酸,IRA)可使培养的人肝癌细胞株SMMC-7721中肝癌标志酶γ-GT逐日下降,而肝细胞分化酶TAT明显增加,峰值从对照的第4天延至第6天。这些作用基本上和视黄酸(全反式视黄酸,RA)相仿,唯IRA培养后期(第6、8天)的作用强于RA。用ABC免疫组织化学法发现:IRA还可使该细胞生成的甲胎蛋白(AFP)减少,尤其在培养的第4天作用最为明显,仅为对照细胞的1/3—1/4。并且,在IRA培养4天后,细胞表面的纤维连接蛋白Fn增高至对照的6.7—8.2倍。这些结果提示IRA能使肝癌细胞某些恶性表型转变,向正常细胞的方向诱导分化。     

TAT蛋白在介导外源物质进入细胞方面的应用

TAT蛋白能够介导多肽、蛋白质、基因等外源物质进入细胞 ,对机体没有毒性 ,对周围环境的影响也不敏感 ,因而可以直接应用于组织细胞。它能够引导外源基因定位于细胞核 ,具有其它介导方法所没有的优点。这些优点将使TAT蛋白在研究蛋白质功能、基因治疗等方面发挥极为重要的作用。TAT蛋白与细胞表面进行低亲和力的结合 ,以Caveolae途径进入细胞 ,将其与高亲和力配体结合可以有更大的功用     

TAT-PTD融合蛋白可能存在的跨膜递送作用机制

为探讨TAT-PTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEX-TAT-GFP-表达质粒.在E.coli- BL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione) Sepharose-4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有效进入HeLa、SMMC-7721、L-02和BEL-7402细胞,GST-TAT-GFP在递送时对时间和浓度有依赖关系.同时,温度对GST-TAT-GFP跨膜作用具有明显的影响,GST-TAT-GFP的跨膜作用受代谢抑制剂的影响很小,肝素的存在能明显抑制GST-TAT-GFP跨膜进入细胞的能力,GST-TAT-GFP对细胞活性没有影响.这些结果说明,TAT-PTD可能是通过与细胞表面的硫酸乙酰肝素等受体相结合介导融合蛋白跨膜递送进入细胞的.     

用于转基因的阳离子脂质体

通过直接导入外源基因来治疗人类疾病的方法需要一种有效、安全并且可重复进行的载体,阳离子脂质体是基本满足这些条件的有限几种载体中的一员. 目前已经有十几种阳离子脂质体. 这些脂质体通过外周的电荷与DNA相结合,静电吸引形成复合物在与细胞膜相互作用后,通过细胞的内吞或融合作用使复合物进入细胞内,从而将外源基因导入细胞,这种DNA传递技术的有效性和安全性已经确立. 二例利用阳离子脂质体的人体基因治疗临床试验也已开始实施,将来会有更多的临床试验得到开展,阳离子脂质体在基因治疗领域有较好的前景.