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1.
将化学合成的RGD肽(Arg-Gly-Asp)编码寡核苷酸与尿激酶B链cDNA相连成为融合基因后,克隆至原核表达质粒pBV220中,在P-RP-L启动子的作用下,经42℃热诱导,在大肠杆菌DH5α中获得了融合基因的表达,其表达量占菌体总蛋白的9.2%,表达产物以无活性的包含体形式存在。经变复性处理得到纯化的融合基因的表达产物,经Western blotting分析表明产物具有与天然尿激酶相似的抗原性,体外活性分析显示其具有一定的纤溶和抗血小板聚集的活性。  相似文献   
2.
ADP核糖基化因子-GTP酶活化蛋白(ARF GAP)是重要的细胞内物质转运调节分子.在22周孕龄人胎肝cDNA文库中发现一种新基因,其编码的氨基酸序列与大鼠ARF1 GAP有32%同源性.将这种新基因命名为“ARFGAP3”,对其进行功能研究,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),从人胎盘总RNA中扩增ARFGAP3全长cDNA序列,并将其亚克隆到pGEM-T载体;采用RNA印迹法和斑点杂交法,检测其组织表达谱,发现在多种腺体和睾丸中有很高水平ARFGAP3基因转录,并且只有一种约2.7 kb的转录本.利用基因重组技术,构建表达质粒pBAD/Thio-ARFGAP3,在大肠杆菌中表达,采用亲和层析法纯化表达产物,利用肠激酶切除重组融合蛋白N端引导序列.检测重组ARFGAP3的生化活性,证实ARFGAP3对ARF1具有GAP活性,促进ARF1结合的GTP水解为GDP,磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)增强其GAP活性,而磷脂酰胆碱(PC)抑制其GAP活性.  相似文献   
3.
人X染色体含有一个黑色素瘤抗原基因亚家族   总被引:5,自引:0,他引:5  
肿瘤相关基因的研究是肿瘤基因形成学说的核心内容。肿瘤相关基因家族的研究则是其中的重点和难点,从4-6月孕龄人胎肝cDNA文库中克隆到一个黑色素瘤抗原基因亚家族,称为MAGE-D亚家族,其成员包括3个直系同源体(人MAGE-D1、大鼠SNERG-1和小鼠DLXIN-1)和2个旁系同源体(人MAGE-D和人KIAA1114)。该家族的3个人类成员均定位于染色体Xp11.21-p11.23,同时具有独特的基因组结构。分子进化树分析表明,该家族与已知MAGE-A、-B和-C3个亚家族之间具有明显的进化上分歧。该亚家族的发现为研究肿瘤相关基因新功能提供了重要线索。  相似文献   
4.
为进一步加强对碱性Kr櫣ppel样因子 (basicKr櫣ppel likefactor,BKLF)的认识 ,用直接荧光和间接荧光两种观察方法证明hBKLF (humanbasicKr櫣ppel likefactor)定位在细胞核内 ,并且呈点状均匀分布在核质中 ,而在核仁内没有分布。这与许多转录因子 (但不是全部 )的定位方式相似。为确定影响核定位的特异性序列 ,通过观察系列GFP/hBKLF缺失体在细胞内的定位发现 :hBKLF分子的 3个锌指结构和除去这部分的N端区域都有核定位信号的功能 ;hBKLF分子的亚核定位结构位于N端区域 ,包括CtBP结合序列和脯氨酸富含区。这些结果为进一步对BKLF功能的研究提供了基础  相似文献   
5.
为探索碱性Kr櫣ppel样因子 (basicKr櫣ppel likefactor,BKLF)对γ 和ε 珠蛋白基因的转录调控作用 ,构建了人类BKLF(hBKLF)基因全长及N端缺失 40个氨基酸的真核表达载体 ,并将其瞬时转染到COS7细胞中做报告实验。结果表明 ,hBKLF能够抑制γ 和ε 珠蛋白基因启动子的活性 ,而hBKLF特异的反义核酸则激活这两种基因的启动子。N端缺失 40个氨基酸不影响这种转录抑制功能。hBKLF强烈抑制FKLF(embryonic/fetalβ likeglobingene ac tivatingKr櫣ppel likefactor)引起的对γ 和ε 珠蛋白基因的转录激活作用。另外BKLF基因能够与SHP1(SH2 containingproteintyrosinephosphatase 1)基因启动子区的CACCC元件结合。这些结果提示γ 和ε 珠蛋白基因可能是BKLF的转录调控对象 ,为研究BKLF参与血细胞特异表达基因的调控提供了依据  相似文献   
6.
采用RACE技术获得全长人新基因MAGE-D1   总被引:19,自引:0,他引:19  
 c DNA末端快速扩增 (RACE)技术是快速获得新基因 5′和 3′端未知序列的有效手段 .鉴于新报导的人肿瘤基因 MAGE家族成员之一 MAGE- D1的 c DNA序列不完全 ,从而拟用 RACE技术获得 MAGE- D1的全长 c DNA序列 .结果显示 ,MAGE- D1的 c DNA全长为 2 80 0个碱基 ,编码778个氨基酸 .同时对 RACE技术应用时的一些关键问题进行了讨论 .  相似文献   
7.
表达重组人白细胞介素-9(recombinanthumaninterleukin-9rhIL-9)的大肠杆菌经破碎、包涵体洗涤、裂解提取、凝胶过滤和离子交换色谱分离,得到了电泳纯的rhIL-9,回收率66%,分子量与理论值相符,有刺激小鼠骨髓巨核系集落生成的活性.为rhIL-9的大规模制备及更深入的研究奠定了基础  相似文献   
8.
 PCR法在未知cDNA克隆与序列测定中的应用研究邢桂春,贺福初,杨晓明,吴祖泽(北京军事医学科学院放射医学研究所,北京100850)目前,新型蛋白质克隆的最有效途径乃先构建cDNA文库,然后筛选、分离其cDNA再行亚克隆、测序。为克隆人新型肝细胞生长...  相似文献   
9.
以人胎肝mRNA为模板,采用RT-PCR扩增了人TPO编码区全长cDNA,全序列测定结果表明与国外报道序列一致;进而构建了pcDNA3-TPO永久表达载体,转染CHO细胞后经G418加压筛选、TPO表达稳定性等项指标测试,获得了稳定分泌TPO的工程细胞株。  相似文献   
10.
以人胎肝mRNA为模板,采用RT-PCR扩增了人TPO编码区全长cDNA,全序列测定结果表明与国外报道序列一致;进而构建了pcDNA3-TPO永久表达载体,转染CHO细胞后经G418加压筛选、TPO表达稳定性等项指标测试,获得了稳定分泌TPO的工程细胞株。  相似文献   
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