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来源于P1噬菌体的位点专一性重组系统loxP/Cre,已成为一种新的DNA操作的有用工具,在体内外都获得了成功的应用.为了将四环素诱导表达系统引入减毒伤寒杆菌CVD908株中,tetR-loxP-neo串联基因已通过同源重组被定位插入在CVD908株的△aroC位点中.构建一Cre酶表达受启动子PLtetO-1控制的自杀质粒pJG9/Cre,以切除CVD908株△aroC中同向loxP序列之间的neo基因.质粒pJG9/Cre电转化入菌中,加入去水四环素诱导Cre酶表达,通过重组切除neo基因,再通过自杀质粒上SacB基因的启动,使质粒清除出菌细胞.抗生素鉴定和PCR扩增都证明,CVD908株△aroC位点中的neo基因被成功切除. 相似文献
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钱锋 《中国生物化学与分子生物学报》2001,17(6):714-719
20 0 1年诺贝尔生理学医学奖授予美国西雅图弗瑞德·哈钦森癌症研究中心 (FredHutchinsonCancerRe searchCenter)的LelandH .Hartwell、英国伦敦皇家癌症研究基金会 (ImperialCancerResearchFund)的SirPaulM .Nurse和R .TimothyHunt,以表彰获奖者们在细胞周期调控方面的卓越发现和贡献 .LelandH .Hartwell(1939年生 )在上世纪 6 0年代末便认识到用遗传学方法研究细胞周期的可能性 .他采用啤酒酵母细胞建立系统模型 ,… 相似文献
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中医补血方剂对受照射小鼠造血功能的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
采用中医补气生血经典名方十全大补汤、当归补血汤、八珍汤和归脾汤 ,以 3.5Gy 6 0 Coγ射线照射小鼠为动物模型 ,研究了上述方剂对受照射后小鼠造血功能的影响。1 材料和方法1.1 药物均购自北京同仁堂医药公司。将各组受试药置于烧杯中 ,加蒸馏水浸润 1h ,然后置于电热器上加热 ,待沸后煎 30min。每一处方均煎 2次 ,第一次加水到 80 0ml,第二次加水到 80 0ml。用纱布趁热过滤 ,旋转蒸发仪浓缩至 1.2 8mg ml,即粗提物每 1ml含药材 1.2 8mg。置 4℃备用。1.2 动物上海种小鼠 ,军事医学科学院实验动物中心繁殖 ,雌性 … 相似文献
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用脂质体法和电穿孔法分别转染Cos-7,Vero和Namalwa细胞.发现脂质体法在转染效率和操作方便方面比电穿孔法优越,而电穿孔法对细胞种类的适用性方面似乎比脂质体法广. 结果表明,电穿孔法能转染Cos-7,Namalwa和Vero细胞,而用脂质体法只能转染Cos-7和Vero细胞. 相似文献
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细胞电融合过程包括使用交流电场使悬浮在缓冲液中的细胞排列成串,然后高压脉冲电流作用使细胞膜发生瞬时破裂,相邻细胞的细胞膜融合,继续受交流电场作用完成细胞融合。已经证明细胞电融合技术可用于杂交瘤生产,单克隆抗体生产以及细胞表面标记物细胞间的传递过程。 相似文献
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影响非洲绿猴肾细胞脂质体转染效率的因素 总被引:5,自引:0,他引:5
已有实验表明,细胞转染效率可能决定于DNA-脂质体复合物的形成以及所转染的细胞种类。利用脂质体LipofectAMINE,研究了影响Vero细胞转染效率的参数如DNA和脂质体的用量,转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA-脂质体复合物的时间长度。通过检测报告基因β-半乳糖苷酶(β-gal)的表达,发现最高转染率只在一较窄范围内获得。β-gal的表达随脂质体量增加而显著增加。在标准转染条件下,增加DNA用量和延长细胞暴露时间反而使转染效率下降。转染细胞数量为4×104细胞/24孔时,细胞转染效率最高。 相似文献
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