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在量子化学计算的基础上,结合目前关于白喉毒素结构与功能的研究状况,选择把白喉毒素催化区的第154位谷氨酸分别突变为天冬氨酸和精氨酸,研究此处电荷性质的改变对生物活性的影响.通过基因定点突变方法制备这两个突变体基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,在此基础上对它们的生物活性进行了评价.结果表明,与重组野生型白喉毒素相比,突变体E154D的整体动物毒性和细胞毒性略有增加,而E154R的毒性下降. 相似文献
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半环扁尾海蛇神经毒素的融合表达及活性检测 总被引:2,自引:1,他引:1
目的:将海蛇神经毒素基因克隆到融合表达载体pET32a中,诱导表达海蛇神经毒素,鉴定融合表达蛋白的生物功能,为大量合成海蛇神经毒素奠定基础。方法:利用融合表达载体将海蛇神经毒素与硫氧还蛋白融合表达,使其在胞内可溶;采用亲和层析与G50凝胶过滤纯化融合蛋白;利用豚鼠直肠纵肌电刺激检验融合蛋白的神经信号阻断功能。结果:得到电泳纯的融合蛋白,该蛋白对豚鼠直肠纵肌电刺激有明显的阻断作用。结论:融合表达能促进海蛇神经毒素的可溶性表达,表达产物能阻断神经信号的传递。 相似文献
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SELDI-TOF-MS技术 总被引:8,自引:0,他引:8
该文介绍了SELDI-TOF-MS的原理、特点及在临床医学研究中的应用,展望了SELDI-TOF-MS技术的应用前景。 相似文献
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目的:研究维生素D联合异丙托溴铵治疗支气管哮喘患者的临床疗效。方法:选择2015年1月~2017年12月在我院进行诊治的81例支气管哮喘患者并将其随机分为两组。对照组雾化吸入异丙托溴铵,观察组在对照组的基础上联合口服维生素D。比较两组的喘憋症状消失时间、咳嗽缓解时间、肺部哮鸣音消失时间和肺部湿啰音消失时间,治疗前后的最大呼气峰流速(peak expiratory flow rate,PEF)变异率和哮喘控制测试(asthma control test,ACT)评分值。结果:观察组治疗有效率为90.00%(36/40),较对照组[78.05%(32/41)]显著升高(P0.05);观察组的喘憋症状消失时间、咳嗽缓解时间、肺部哮鸣音消失时间和肺部湿啰音消失时间均明显短于对照组(P0.05)。治疗前,两组PEF变异率和ACT评分值比较差异无统计学意义(P0.05);治疗后,两组PEF变异率均较治疗前显著降低(P0.05),ACT评分值均较治疗前显著升高(P0.05),且观察组PEF变异率显著低于对照组(P0.05),而ACT评分值明显高于对照组(P0.05)。结论:与单用雾化吸入异丙托溴铵相比,维生素D联合雾化吸入异丙托溴铵治疗支气管哮喘的临床疗效更优,且可以有效缩短患者的症状消失时间。 相似文献
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雄黄纳米微粒在细胞水平上抑制呼吸道合胞病毒复制的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
建立呼吸道合胞病毒A型(RSV-A型)感染Hep-2细胞模型,通过预防、治疗及直接灭活三种不同给药方式,观察中药雄黄对RSV-A型感染Hep-2细胞病变(CPE)的抑制作用。用高能球磨机研磨双蒸水水飞处理制备雄黄纳米微粒,应用砷钼蓝染色法测定雄黄纳米微粒浓度并在Nano Series粒度测定仪上测定其粒度。以MTT法计算药物的半数中毒剂量(TC50)。通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,以利巴韦林为阳性对照药,观察雄黄纳米微粒对RSV-A型感染Hep-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析。雄黄纳米微粒TC50值为0.649μg/mL。预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻RSV-A感染Hep-2细胞的CPE程度,其抑制RSV-A型感染Hep-2细胞病变的半数有效浓度(IC50)分别为0.20μg/mL、0.13μg/mL、0.16μg/mL,治疗指数(TI)分别为3.18、4.99和4.11,雄黄纳米微粒对RSV-A型感染Hep-2细胞病变的抑制作用存在着明显的量效关系。雄黄纳米微粒按预防、治疗及直接灭活给药方式给药时,其中治疗给药方式更有利于减轻RSV-A感染Hep-2细胞引起的病变。 相似文献
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脂质体介导转染法的原理与应用 总被引:5,自引:0,他引:5
脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层 ,又称为人工生物膜。最初 ,人们只是运用脂质体模拟生物膜 ,研究膜的构造及功能 ,从而发现了膜的融合及内吞作用 ,因而可用作外源物质进入细胞的载体。相对于电穿孔法和磷酸钙共沉淀转染法 ,脂质体介导转染法简便易行 ,成本适中 ,具有较高的转染率和较小的细胞毒性。1 .脂质体的组成和制备1 .1 组成脂质体的脂类 现有的商业化脂质体均为阳离子脂类与中性脂类的复合体 ,如LipofectAMINE、Lipofectin等 ,中性脂类多为二油酰磷脂酰乙醇胺 (DOPE)。其中 ,阳离子脂类… 相似文献
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建立了小分子DNA的高效分离纯化方法,适合于分离几十到300个核苷酸组成的基因,在此基础上,建立更大的DNA片段的分离纯化方法。对不同大小的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳后,采用石英棉分离纯化法纯化DNA。结果显示,石英棉的分离效果最好,对于200个碱基以下的DNA的回收率约高达90%以上,对于300个碱基的DNA回收率为约85~90,该项技术纯化的DNA的酶切、酶连效率与试剂盒法纯化的DNA的酶切、酶连效率相同。该分离纯化DNA技术明显优于试剂盒方法。 相似文献