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牛β-酪蛋白5′端上游调控序列的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
该文用PCR扩增了牛β-酪蛋白基因5′-端上游调控序列,并对其进行了克隆和序列分析。采集成年母牛肝,提取DNA。在牛β-酪蛋白基因外显子1和上游调控区内设计引物,扩增其上游调控序列。两条引物长均为19个核苷酸,引物间跨度为635bp。以牛肝DNA为模板,进行PCR扩增,扩增产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,可见特异的目的条带。从凝胶中回收目的片段,克隆到pGEM-T载体中。重组质粒提取DNA,进行序列分析。测序结果与文献发表的类似序列相比,仅有4个碱基不同,同源性达99.4%。表明获得了牛β-酪蛋白基因5′-端上游调控序列的克隆。 相似文献
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姚智慧 《微生物学免疫学进展》1994,(1)
用温度循环法测定扩增DNA的序列比较汉坦病毒同型间的核酸序列作者应用温度循环测序法对汉坦病毒血清型特异性引物扩增所得的PCR产物进行序列测定以确定同一血清型几株病毒间序列的相似水平。测序用模板为上游引物和下游引物之间,测得的282,264和291个碱... 相似文献
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中国人肥胖基因真核表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
为研究肥胖(obesity)的病因及肥胖基因(ob)的表达与调控,根据文献报道的hob序列设计引物,经RT-PCR扩增中国人的ob基因(包括信号肽在内的cDNA全长540bp),PCR产物采用T-A克隆法首先连接到克隆载体pUC119,然后定向转移到经改造的真核表达载体pSV-β-lacZ,酶谱分析表达克隆基因为的人肥胖基因。 相似文献
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大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶基因的克隆与真核表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
根据Genbank中大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)基因的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,以大肠杆菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,并将扩增产物定向连接到克隆、测序及真核表达载体PCDNA3中,进行酶切鉴定、测序及序列分析。结果表明PCR扩增出741bp大小的片段,通过酶切和序列分析证明含完整的PNP基因序列且基因插入方向正确,此序列与文献报道的PNP基因的同源性为99.7%。说明克隆的PNP基因与文献报道的基本一致,pcDNA3-PNP的构建成功为今后用其进行基因转染来研究PNP/Mep-dR自杀基因系统在肿瘤基因治疗中的应用打下了基础。 相似文献
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汉坦病毒的基因分型及其序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
为了探讨从核苷酸水平耐汉坦病毒进行分型,设计两对型特异性引物,采用反转录和聚合酶链式反应(RT-PCR),对亚太地区18株汉坦病毒进行了扩增鉴定,并对其中7株汉坦病毒的PCR产物进行了测序分析。PCR的分型结果表明,Ⅰ型引物只能扩增血清Ⅰ型病毒的cDNA;Ⅱ型引物也只能扩增血清Ⅱ型病毒,其间无交叉反应。采用巢式PCR和限制性内切酶验证了PCR产物的特异性。序列分析结果表明,R36M片段G1区的核苷酸序列与血清Ⅰ型病毒代表株76-118的同源性为78.4%,而与血清Ⅱ型病毒R22的同源性为68.1%;R36与汉坦病毒序列同源性的成对比较结果也表明,R36与血清Ⅰ型病毒的同源性均高于血清Ⅱ型病毒;Leakey虽然能被Ⅱ型引物扩增,但其序列与血清Ⅱ型病毒R22的同源性仅为44.9%,故不属于血清Ⅱ型病毒。上述研究结果表明,反转录聚合酶链反应能对多数汉坦病毒准确分型,但最终结果尚有赖于序列分析。 相似文献
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亚洲棉GAE6—3A上游序列的分离及其在烟草中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
根据E6基因保守域设计引物,PCR扩增出亚洲棉(Gassypium arboreum L.)GAE6基因长约400bp片段,序列分析表明该片段与海棉(G.bargbadense)E6基因同源性达96.8%。进一步合成2个反向引物协助进行PCR-96孔板筛库分离到亚洲板棉GAE6-3A克隆。酶切鉴定其插入片段长约8.0kb,序列测定及分析结果表明其上游和约1.5kb,将GAE6-3A上游序列克 含有 相似文献
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PCR——四步两段扩增法分离人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因 总被引:2,自引:0,他引:2
引物是决定PCR结果的关键,本实验中,引物Ⅰ,Ⅱ虽有26个碱基,但由于其5′端有8个碱基为限制性内切酶的识别序列,所以实际上只有18个碱基与原始模板互补配对,采用标准的PCR方法时不能产生理想结果,经采用PCR-四步两段扩增法从人胎盘cDNA文库中分离得到了-484bp的DNA片段。通过斑点杂交鉴定,结果表明该DNA片段为hbFGF基因。 相似文献
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水稻抗白叶枯病基因Xα—4的PCR标记研究 总被引:5,自引:0,他引:5
根据与水稻抗白叶枯病基因Xα-4紧密连锁的分子标记M55的序列设计引物,通过对国际水稻研究所育成的抗白叶枯病近等基因系和基因累加系的叶片DNA。半粒种子提取物及Xα-4基因的杂合体DNA的PCR特异扩增。初步建立了Xα-4的PCR标记体系。揭示出了Xα-4在这些材料中的分布情况。 相似文献
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利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
设计一对PCR引物,其中上游引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列,以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该cDNA有2个碱基变异,以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其 相似文献
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苎麻疫霉激发蛋白基因断裂现象初探 总被引:4,自引:0,他引:4
苎麻疫霉可分泌具有诱抗作用的激发蛋白(α-elicitin),根据α-clicitin第24 ̄30和56 ̄63位保守区氨基酸推导的寡核苷酸引物序列,对苎麻疫霉基因组DNA进行特异PCR扩增反应,发现其扩增的DNA片段大于预计的片段。回收纯化的特异扩增DNA,并进行克隆和测序分析,结果表明特异扩增的clicitin基因亚克隆DNA为570bp,大于预计的117bp。在特异片段中,存在3个内含子将基因 相似文献
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抗人CD3单抗重,轻链可变区基因的体外扩增,克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因5'端序列和J区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的OKT3杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录生成cDNA,以cDNA为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行PCR,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入pUC19质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行DNA序列测定。所测重链可变区基因全长357bp,编码119个 相似文献
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从我国内蒙古地区流行的犬细小病毒病病犬的肠溶物中分离提纯犬细小病毒(CPV)。提取病毒基因组DNA,并以此DNA为模板,采用人工合成的引物进行PCR扩增,PCR产物经BamHI、SacI双酶切后,克隆于pUC19质粒的BamHI/SacI位点。重组质粒pUCVP2经PCR鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明:获得了犬细小病毒内蒙株(CPV-IM)VP2基因的全长克隆,VP2基因全长1755nt, 相似文献
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从奶山羊乳腺中快速抽提总RNA,根据已发表的绵羊β乳球蛋白基因的序列,设计并合成与oBLG基因第一个外显子和最后一个外显子的部分序列相对应并能与特定载体末端互补的一对引物,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段民互性化质粒pDIRECT退火,获得重组质粒pDBLG。PCR鉴定、限制性分析和分子我均表明已克隆以奶山羊BLG的cDNA。 相似文献
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参照国外报道的渗调蛋白基因序列,自行设计并合成了一对寡核苷酸引物,通过PCR技术从云南地方栽培的烤烟品种“红花大金元”基因组DNA中直接扩增出了其全编码序列。PCR产物纯化后直接克隆到pGEM-T载体系统中,转化大肠杆菌DH5α,在Xgal平板上筛选白色菌落,经SphI和SacI双酶切,鉴定所得的重组质粒中含有753bp左右的PCR扩增片段。采用双链双脱氧法定序分析表明所克隆的渗调蛋白基因编码区序列与国外迄今所报道的两个株系的序列完全一致,提示了该基因在进化上的保守性 相似文献