线粒体DNA突变相关疾病的基因治疗

mtDNA是动物细胞染色体外唯一存在的遗传物质,mtDNA突变相关疾病正越来越为人们所认识,但目前尚无有效的治疗手段。应用亲脂质阳离子,构建靶向线粒体PNA,转线粒体移植手段。以及构建mtDNA样质粒,都可能是今后的研究方向。     

标化消减杂交:提高差异表达cDNA筛选效率的新策略

在回顾分析了消减杂交技术改进历程的基础上,我们提出了“标化消碱杂交策略”,此策略的核心是“用标化cDNA制备消碱杂交反应的单链驱动子和单链示踪子,分离回收消减杂交后的单链示踪子用于制备差异表达cDNA库,并从标化cDNA库制备探讨来对差异表达cDNA库进行检测”将主要用于筛选与细胞特殊表型密切相关的（或与不同发育阶段等密切相关的）呈“全或无”差异形式表达的低丰度全长cDNA。此策略有望能较以往的消减杂交策略在降低假阳性背景、提高低丰度差异表达cDNA获得率、得到较长甚至全长差异表达cDNA等方面有较好表现,但尚待检验。     

基因克隆的方法进展

基因克隆一般分为定位克隆和表型克隆。表型克隆进展较快,主要有消减杂交、代表性差异分析法、mRNA差异显示、DNA转染法及抑制消减杂交法。抑制消减杂交法是1996年报道的一种表型克隆的新方法,是目前寻找差异表达基因的较有效方法,较过去的方法有许多先进之外。本文对此方法的原理及应用作一详细介绍,并与其他方法作简单比较。     

免疫电镜技术中使用镍网和不锈钢网的比较

本文通过对不锈钢网与镍网在硬韧度,耐腐蚀及抗磁化等方面的比较,发现国产不锈钢网比镍网更适于做免疫电镜的载网材料。     

抑制消减杂交技术在肿瘤转移调控研究中的应用

为探讨肿瘤转移发生的分子生物学机制奠定基础,通过使用抑制消减杂交技术从一对同一新本、转移表型不同的人肺巨细胞癌细胞株中分离转移抑制相关基因可核苷酸片段。结果获得５个在低转移肺巨细胞癌中高表达的、均与已知的人类基因片段有很高同源性的核苷酸片段,它们可能在维持肿瘤细胞自身稳定防止转移中起重要作用。     

可复制性单纯疱疹病毒在抗肿瘤方面的应用

单纯疱疹病毒是肿瘤生物治疗中常用的病毒载体之一,可复制性单纯疱疹病毒以其溶瘤效率高、特异性好、可行性强成为近年来研究的热点。其中对溶瘤性单纯疱疹病毒突变株G207的研究开展得早,其溶瘤效果、靶向性及安全性都得到了确认,这也带动了可复制性单疱病毒应用的发展,目前已研究出多种溶瘤单纯疱疹病毒突变株。本文就近几年可复制性单纯疱疹病毒在抗肿瘤方面的研究现状加以综述,以探讨其临床治疗肿瘤的潜在价值及可行性。     

COP9信号复合体:信号转导与蛋白质降解的接合器

COP9信号复合体(CSN)是细胞内高度保守的多亚基蛋白质复合物,主要定位于真核细胞的细胞核。在结构上与26S蛋白酶体“盖子”亚复合物高度相关。CSN的具体功能目前尚未明确,主要体现为两方面的活性：脱Nedd化作用和磷酸化作用;在细胞内同SCF遍在蛋白连接酶复合体等许多蛋白质复合物发生相互作用;调节多种信号分子靶向遍在蛋白-26S蛋白酶体的稳定性。因此,CSN是连接信号转导与蛋白质降解的分子平台。     

促凋亡基因p53AIP1的研究进展

p53AIPl基因是近年发现的促凋亡基因,在p53依赖性的凋亡通路中起重要作用。p53AIPl介导线粒体凋亡途径,其表达依赖于p53蛋白的Ser^46的磷酸化。p53AIPl可直接促进凋亡,其促凋亡作用可能强于p53本身,并对p53抗性的肿瘤细胞也有作用。因此,对p53AIPl的深入研究可能会为对p53基因治疗有抗性的肿瘤患者带来新的希望。     

抑制消减杂交技术的原理及应用

基因的选择性表达决定了生物体的各项生命活动,对这些差异表达基因进行分离、克隆有助于了解人体各项生命活动的分子调控机制。抑制硝减杂交技术是新建立的一个快速克隆差异表达基因ｃＤＮＡ的有效方法。本将详细介绍该技术的原理及应用。     

电穿孔导入的LacZ基因在人肺癌细胞中的表达

选用LacZ基因作为报告基因,用电穿孔法与pSV2neo质位共转化导入人肺巨细胞癌高转移细胞株,经G418及X－gal组化法双重筛检,获得LacZ基因表达阳性的细胞克隆。经X－gal组化染色,该克隆70％细胞蓝染,再经软琼脂培养后,形成的集落蓝染率约为65％,单个集落中的细胞蓝染率可达100％,在裸小鼠皮下或尾静脉接种这一LacZ基因表达阳性的克隆细胞后,在形成的肿瘤及肺内转移灶的冰冻切片中,X－gal染色可观察到蓝染的癌细胞。但由于细胞周期不同步、遗传稳定性以及表达调控因素的影响,则可能是本实验中部分细胞染色阴性的原因。我们的实验表明,LacZ基因有可能在肿瘤转移的研究中作为一种理想标志基因。