洋桔梗体细胞胚性愈伤组织诱导过程中超氧化物歧化酶和酯酶变化

通过转移洋桔梗非胚性愈伤组织到含有1.0mg/L2,4-D的MS培养基(ecIM)上诱导了洋桔梗胚性愈伤组织形成,而非胚性愈伤组织在含1.0mg/L2,4-D和0.5mg/LKT的MS培养基(necSM)上继代培养。本研究比较分析了洋桔梗愈伤组织在ecIM和necSM上的超氧化物歧化酶(SOD)活性及其同工酶酶谱、酯酶同工酶酶谱随着培养天数的变化。实验结果表明在ecIM和necSM上培养的洋桔梗愈伤组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性在培养早期较低,然后随着培养天数增加而升高,维持在较高水平上,但SOD活性变化无明显规律性;另一方面,SOD同工酶在第4天后出现一新的同工酶谱带;此外,在ecIM和necSM上培养洋桔梗愈伤组织的酯酶(EST)同工酶在培养至第16~20天期间呈现显著缺失。     

红花的愈伤组织诱导及其与过氧化物酶和酯酶同工酶的关系

红花外植体培养于附加不同激素的 MS培养基中,根、胚轴、子叶均可大量形成愈伤组织和根。5个红花品种间过氧化物酶和酯酶同工酶酶谱的差异小于不同器官间的差异。随外植体子叶脱分化过程的进行,过氧化物酶同工酶酶带逐渐增多,而酯酶同工酶酶带则逐渐减少,并出现特异的诱导酶带。     

烟草组织培养过程中过氧化物同工酶的变化

在烟草的组织中,老叶的过氧化物酶,在迁移速率慢的酶区带对照植株比变异植株多二条酶带,但在幼龄叶片无差异。~(60)Coγ射线诱变的外植体与对照相比,酶谱有显著不同。在组织分化进程中,酶谱亦有显著变化。随着细胞分化进程,定期测定不同剂量γ射线处理的培养组织中酶谱的变化历程,观察到在分化前后酶谱无明显差异。只有在诱变植株生长状态表现明显差异时才见酶谱的变化。培养基中不同浓度组合的激动素、椰乳和2,4-D对细胞生长和分化有不同的调节作用,随着组织分化与脱分化历程,同工酶谱表现明显差异。在组织开始形成愈伤组织以后同工酶谱已有显著变化,但培养在分化培养基上的外植体,在分化前后,其同工酶谱未见明显变化。     

莴苣子叶培养中RNA,蛋白质及过氧化物酶的变化

莴苣子叶在含BA2mg/L(单位下同)和NAA0.2或BA0.2和NAA2的培养基中,均能形成胚性愈伤组织,在2,4-D2中形成非胚性愈伤组织。前一组合的RNA、蛋白质含量及过氧化物酶活性明显大于后一组合,过氧化物酶同工酶谱谱带宽且色深,具有一条特异酶带。由BA和NAA两种组合培养基诱导的胚性愈伤组织的三种生化指标变化的总趋势相同,同工酶谱相似,高BA组比低BA组的生化指标略高些。     

红豆草体细胞胚胎发生早期过氧化物酶和酯酶同工酶酶谱变化

红豆草下胚轴切段接种于含1mg/l BA,1mg/l KT的LS培养基上,通过筛选和繁殖由一块外植体而来的淡黄色愈伤组织,而得到生理状态比较一致具有较高胚性发生能力的非胚性愈伤组织,将其转移到含1mg/l BA的LS培养基上后可诱导体细胞胚眙发生。在体细胞胚胎发生早期发现过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶酶谱均有规律性变化。过氧化物酶同工酶酶谱在胚性培养的第10天,两条明显的A_1、A_2带消失。酯酶同工酶各酶带之间酶活性比例在胚性培养过程中变化很大,培养后期酶带变得不明显或酶带数下降。说明胚性发生过程遗传信息的表达有选择性并为激素所调控。     

2,4 -D对甘薯体细胞胚胎发生的调控

将来源于‘徐薯18’叶片的胚性愈伤组织,接种在含有不同2,4-D浓度的液体MS培养基中进行悬浮培养,悬浮细胞表现出不同的形态结构、分裂方式和发育途径：2,4-D浓度为1 mg/L时,细胞均等分裂,增殖迅速;不含2,4-D时,细胞多进行不均等分裂,并发育成体细胞胚。不同2,4-D浓度中培养的悬浮细胞,其胞外过氧化物同工酶谱及其随时间变化的方式有很大差异,并与细胞的生长、发育过程密切相关。     

元麦叶肉原生质体细胞壁再生过程中的扫描电镜观察及过氧化物酶活性

元麦叶肉原生质体在MS培养基(附加2,4-D 1mg/L,6-BA 0.25 mg/L)中,进行液体浅层培养。用荧光增白剂(VBL)染色,培养1天出现再生壁。通过扫描电镜观察,发现随着培养时间的延长,原生质体表面逐渐出现短棒状突出物和纤维状结构;培养第5天,原生质体表面覆盖较厚的纤维层,与未脱壁的元麦叶肉细胞表面形态结构相似。用愈创木酚作氢供体测定原生质体胞壁再生过程中过氧化物酶活性,发现随着壁再生率提高,过氧化物酶活性明显下降。用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离阳极向过氧化物酶同工酶酶谱,酶带也随着培养时间的延长而减少。由刚分离的原生质体中的8条减少到培养4天的2条,反映胞壁再生和过氧化物酶活性呈负相关。     

防风悬浮细胞的原生质体再生植株

防风(Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk)试管苗的根尖,下胚轴或叶柄切段在含有1mg/l 2,4-D 的 MS 固体培养基上,形成含有胚性细胞团的愈伤组织。愈伤组织经液体振荡培养,形成含有大量胚性细胞团的悬浮培养物。用含有 Onozuka R-10 1.5%、Mace-rozyme R-10 0.3%、蜗牛酶0.5%、CaCl_2 5mmol/l 和甘露醇0.6 mol/l(pH=5.8)的酶液从胚性细胞团游离得到原生质体。原生质体在培养的第4天出现第一次分裂,50天左右形成的细胞团大小为1—2mm。这些细胞团在含有0.5 mg/l 2,4-D 的 MS 固体培养基上形成愈伤组织。在含有0.1 mg/l 6-BA 或0.1 mg/l 2,4-D+0.5mg/l 6-BA 的 MS 固体培养基上,原生质体再生的愈伤组织分化出胚状体。胚状体在不含任何生长调节剂的 MS 固体培养基上发育成完整的原生质体再生植株。     

芦苇胚性愈伤组织的形成及植株的再生

以芦苇种子为外植体,其愈伤组织的诱导率最高。叶鞘和叶片不发生脱分化。培养基中最合适的蔗糖浓度为4%。维生素 B 类、肌醇对愈伤组织的生长起促进作用。而酵母提取物对愈伤组织的诱导和生长具有明显的抑制作用。这种抑制效应,将随酵母提取物浓度的提高而增大。愈伤组织的继代培养,随培养基中2,4-D 浓度的提高,其平均鲜重明显降低。脱分化培养基中2,4-D 浓度对胚性愈伤组织的诱导形成具有一定的相关性。胚性愈伤组织经30代继代培养依然具有90%的分化频率,只是每块愈伤组织的分化苗数减少。反之,非胚性愈伤组织则完全丧失形态发生的能力。对两类愈伤组织进行扫描电镜的观察,发现其表面结构有很大差异。其过氧化物酶、酯酶同工酶谱以及可溶性蛋白的含量均有明显的差别。     

体细胞胚胎发生标记

De Danske Sukkerfabrikker和丹麦皇家农业大学的M.Joersbo等人已分离出一种对胚胎发生细胞有专一性的异过氧化物酶。他们使用琼脂糖凝胶上提取蛋白的等电聚焦法,从无植物生长素的培养基上再培养2～6天的胡萝卜胚胎发生细胞悬浮系中发现了同功酶。而在无胚胎发生细胞系中只发现极小量的同功酶。在培养基中加入2,4-D既抑制了细胞的胚胎发生又抑制了异过氧化物酶的活性。荷兰瓦赫宁根农业大学研究人员P.F.Fransz等人在玉米胚胎发生愈伤组织培养物中     

5种樱桃属植物的POD、CAT和SOD同工酶分析

采用聚丙烯酰胺垂直平板凝胶电泳技术对5种樱桃属植物的过氧化物酶(POD)同工酶、过氧化氢酶(CAT)同工酶和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶的酶谱特征进行分析,结果表明:5种樱桃属植物共电泳出12条POD同工酶酶带、4条CAT同工酶酶带和8条SOD同工酶酶带;其中,POD同工酶酶谱具有5条共同谱带,CAT同工酶4条,SOD同工酶5条。冬季休眠期的樱桃属植物,POD与SOD同工酶谱带的多样性比较丰富,不同植物之间的谱带差异较大;而CAT同工酶谱带差异不明显。     

阿魏菇耐高温转化子测定和同工酶分析

经过电击新疆阿魏菇(Pleurotus ferulae Lanzi)原生质体转化平菇(Pleurotus ostreatus)总DNA获得3株转化子,在高温生长条件下对转化子及其母本、父本测定菌丝长度,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶分析。研究结果表明:转化子生长速度远大于母本而趋向于父本。电泳共获得6种过氧化物酶谱带,21种酯酶谱带。根据酶谱分析得知3株转化子酶带数与母本相似,但部分酶带亮度大于母本,与父本较为相似,与菌丝结果一致。酯酶酶谱聚类分析结果与传统分类学结果一致。     

根瘤菌属几种同工酶的研究

本文对根瘤菌属12株不同根瘤菌的过氧化物酶,谷氨酸草酰乙酸转氨酶及酯酶同工酶进行了测定,结果发现:所有菌株的过氧化物酶和谷氨酸草酰乙酸转氨酶均呈阴性。酯酶同工酶酶带数在快生型和慢生型根瘤菌之间存在明显的区别,在YMA培养基上,快生型根瘤菌仅有1—2条,迁移率在0.71—0.98之间变化;而慢生型根瘤菌却有4—6条酶带,迁移率在0.15—0.98之间变化,同一菌株在不同碳源上酯酶同工酶酶带数也发生显著变化。     

豌豆组织培养中器官的分化生长过氧化物酶同工酶及核酸含量的变化

在豌豆的离体组织中比较研究了培养基中不同浓度的氮源、蔗糖和细胞激动素(BA)对于培养组织的生长、过氧化物酶同工酶及核酸含量的影响。试验结果表明,培养基中上述因素的变化对外植体芽苗的分化生长有明显影响。在氮源(总氮量、NO_3~-和NH_4~ 的不同比例)、蔗糖浓度和激素水平都适宜时最有利于培养组织的细胞生长与分化。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离培养组织过氧化物酶同工酶的结果表明,过氧化物酶同工酶带数与外植体的生长速度有密切关系,亦即外植体的过氧化物酶同工酶带与外植体的生长速度呈正相关趋势。核酸含量的变化得到了相应结果。     

花椰菜(Brassica oleracea var botrytis)下胚轴培养过程中过氧化物酶活性及同工酶谱的变化

花椰菜下胚轴外植体在MS+6BA 5 ppm的培养基上能分化出芽,在MS+2,4-D2ppm的培养基上能脱分化而形成愈伤组织。用3种不同的酚类物质(咖啡酸、阿魏酸、愈创木酚及联苯胺)作氢供体发现分化过程中的过氧化物酶活性高于脱分化过程,其中以咖啡酸作氢供体显示的活性最高,阿魏酸及愈创木酚次之,而联苯胺最小。用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离阴极向及阳极向过氧化物酶同工酶,在分化及脱分化培养过程中均不断出现新的酶带,前者有13条,后者为11条,两者的差别主要在阴极向酶带,在分化过程中多了两条酶带(C_1和C_3),同时C_2带活性也比脱分化的高。阳极向酶带也有差别,A_2和A_2两条酶带在分化过程中逐渐加强,但是在脱分化过程中却逐渐消失。反映了两个过程生理上的差别。     

赖草属七个种同工酶研究

用聚丙酰胺凝胶电泳法对赖草属７个种的幼根、幼叶进行了酯酶、过氧化物酶同工酶分析,结果表明：无论从相同器官进行不同的同工酶分析,还是从不同器官进行相同的同工酶分析,这７个种的酶谱在各带区存在相似酶带,但更多的是相异酶带。从酯酶、过氧化物酶这两种酶分析结果来看,酯酶比过氧化物酶分离效果好些;从幼根和幼叶这两个器官的酶谱来看,幼根比幼叶酶带多些,分离效果也好些。同时也表明这７个种的酶谱变化与染色体倍性变化无关     

大别山区六种黄精属植物的五种同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对皖西大别山区六种黄精属植物的抗坏血酸氧化酶(AOD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、酯酶(EST)和过氧化物酶(POD)五种同工酶进行了比较分析。结果表明:(1)五种同工酶共显示出66条酶带,其中有3条是黄精属的特征酶带;并且来源于不同种的同一种酶的谱带数、相对迁移率、酶活性均不相同,呈现多样性;(2)五种同工酶谱的模糊聚类分析结果与形态学分类的结果一致,利用酶谱差异可以将六种黄精初步区分;(3)在六种黄精属植物中,湖北黄精、轮叶黄精、多花黄精和金寨黄精是较进化类型,玉竹和长梗黄精是较原始类型。     

5,6-二氯-吲哚乙酸对烟草愈伤组织衰老的延缓作用

5,6-二氯-吲哚乙酸对革新烟草愈伤组织生长有影响。当愈伤组织在MS_0(对照)和MS 2,4-D培养基上培养22d时,生长停滞,细胞已呈空泡状,正常的超微结构完全破坏,细胞器不复存在,愈伤组织明显褐化。但在MS 5,6-Gl_2-IAA培养基上的愈伤组织仍能正常生长,鲜重和干重下降亦明显延缓,细胞含有原生质内含物,各种细胞器的超微结构仍保持正常。此外,后者的SOD同工酶也明显不同于其它培养基上的愈伤组织,暗示5,6-Gl_2-IAA对烟草愈伤组织衰老的延缓作用可能与SOD同工酶的调节作用有关。     

家鸽不同组织同工酶的初步研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对家鸽不同组织的酯酶同工酶、乳酸脱氢酶同工酶的酶谱进行了观察和试验分析。计算了家鸽8种组织酯酶同工酶各自酶带的Rf值。显示出家鸽8种组织的酯酶同工酶酶带和7种组织的乳酸脱氢酶同工酶酶谱分布特征具有明显的组织特异性。初步分析了基因位点与酶谱带型之间的相互关系,对于鸟类的生化分析和遗传研究有参考作用。     

大赖草成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生

植物名称:大赖草(Leymus racemosus)。材料类别:成熟胚。培养条件:以MS为基本培养基,诱导愈伤组织和分化培养基为:(1)2,4-D 1.0mg/L(单位下同);(2)2,4-D1.0 KT0.2;(3)2,4-D1.0 KT