雏鸡源致病性粪肠球菌的分离鉴定及其耐药性分析

【背景】粪肠球菌(Enterococcus faecalis)是人和动物肠道正常菌群之一,也是一种条件性致病菌。近年来,粪肠球菌引起人和动物感染的报道越来越多。【目的】探明引起某养鸡场雏鸡发病死亡的病原及其致病性和有效治疗药物。【方法】结合临床症状和病理剖检,开展病原菌分离、生理生化特性检测和16S rRNA基因序列分析、致病性试验、耐药分析和对患病鸡群的药物治疗。【结果】患病鸡有昏睡、瘫痪或共济失调等临床症状;肝、脾肿大,肝脏发黄、少量出血点、质脆易碎,肠道粘膜增厚、出血,脑轻微水肿;从肝脏组织分离得到一株革兰氏阳性球菌,经纯化培养后命名为CJ517;依据该菌株形态特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析鉴定为粪肠球菌;致病性试验显示CJ517菌株能致死小鼠,致死率为66.67%;该菌对头孢噻肟、磷霉素、丁胺卡那等药物敏感,对多西环素、卡那霉素、新霉素、氟苯尼考等药物耐药;经用敏感药物和提高免疫力结合治疗后,鸡群病情得到控制。【结论】研究结果可为临床诊断和治疗动物粪肠球菌感染提供参考。     

基于全基因组从头测序技术盐肤木叶绿体基因组的测序分析

盐肤木是一种重要的经济树种,可为医药和工业染料提供原料。盐肤木具有较强的抗旱、耐寒、耐盐,可在温带、暖温带和亚热带地区生长。本研究首次对盐肤木叶绿体基因组进行从头测序(de novo sequencing)组装研究。结果表明,盐肤木叶绿体基因组长度为159082 bp,具有典型的四部分结构,两个单拷贝区被一对反向重复区分隔。LSC和SSC的长度分别为85394 bp和18663 bp。叶绿体基因组总共编码126个基因,其中包括88个蛋白编码基因,8个rRNA基因,30个tRNA基因。在叶绿体基因组中,61.97%的序列为基因编码区。在盐肤木叶绿体基因组中,只有8个基因含有内含子,除ycf3基因(2个内含子)外,其余均含有1个内含子。盐肤木叶绿体基因组总共存在755个SSR位点。SSR主要由二核苷酸和单核苷酸组成,分别占60%(453)和28.74%(217)。聚类分析结果表明,漆树科与盐肤木最为接近,其次为槭树科和无患子科。本研究为盐肤木的分类提供了分子基础。本研究是关于盐肤木叶绿体基因组的首次报道,对了解其光合作用、进化和叶绿体转基因工程具有重要意义。     

蕨菜中的一个新高黄烷醇(英文)

运用柱层析等分离纯化方法,从蕨菜乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位中分离得到4个黄酮类化合物:3,4,6,2’,4’-五羟基高黄烷醇(1)、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷(2)、芦丁(3)、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷(4),其中化合物1为新化合物,也是从蕨类植物中分离出的第一个高黄烷酮,化合物2为首次从该植物中分离得到。采用MTT法对获得的黄酮类化合物的细胞毒活性测定结果表明化合物1具有明显的细胞毒活性。     

蕨菜黄酮苷元的组成及含量测定研究

以80%乙醇浸提经乙醚脱脂预处理的干蕨菜粉,减压回收乙醇得浓缩液.浓缩液以8%硫酸沸水浴水解3 h后,加入20%NaOH中和至弱酸性,过滤,滤渣以三氯甲烷索氏提取获总蕨菜黄酮苷元.TLC法检测总黄酮苷元的组成,HPLC法测定其主要苷元的含量.结果表明,通过酸水解获得总蕨菜黄酮苷元,其主要成分为山奈酚,含量约占蕨菜干重的1.9%.     

沉淀敲出法快速发现霍山产铁皮石斛生物碱及其组分抗氧化活性在线测定

为了给霍山产铁皮石斛药效物质基础研究及抗氧化活性物质快速发现提供依据,在预实验基础上,采用鲁米诺-双氧水发光体系作为羟自由基清除活性评价平台,HPLC-UV-CL联用在线测定了铁皮石斛生物碱部位各组分清除自由基活性。以磷钼酸、碘-碘化钾为沉淀试剂敲出总生物碱提取物中生物碱组分,对比敲出前后HPLC图谱变化,确定铁皮石斛的生物碱组分。结果表明,在本实验条件下,霍山产铁皮石斛中检出的5种生物碱中有4种可降低鲁米诺-双氧水发光体系的发光值。HPLC-UV-CL可用于铁皮石斛生物碱清除自由基活性快速测定。实验结果可为铁皮石斛质量控制、抗氧化活性成分定向分离的研究提供依据。     

大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶突变体的构建及抗反馈抑制效应

磷酸甘油酸脱氢酶(D-3-phosphoglycerate dehydrogenase,PGDH,EC 1.1.1.95)为L-丝氨酸合成途径的关键酶,其编码基因为ser A,其活性受到合成产物L-丝氨酸的反馈抑制调控。为解除丝氨酸的反馈抑制,采用定点突变技术把编码PGDH酶344位组氨酸或346位天冬氨酸或364位天冬氨酸的密码子定点突变为丙氨酸密码子。改造后的ser AFbr被连到表达载体pT7-7上,并转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,破壁回收粗酶液,通过DEAE阴离子柱纯化PGDH突变体,并对其酶活性和IC_(50)值进行了测定。结果,野生型PGDH酶IC_(50)值为7μmol/L,而PGDH双突变体N346A/H344A催化活性与野生型相近,在丝氨酸浓度为160 mmol/L时,其酶活仍保持未添加丝氨酸时酶活的96%,基本解除反馈抑制。     

大别山区六种黄精属植物的五种同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对皖西大别山区六种黄精属植物的抗坏血酸氧化酶(AOD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、酯酶(EST)和过氧化物酶(POD)五种同工酶进行了比较分析。结果表明:(1)五种同工酶共显示出66条酶带,其中有3条是黄精属的特征酶带;并且来源于不同种的同一种酶的谱带数、相对迁移率、酶活性均不相同,呈现多样性;(2)五种同工酶谱的模糊聚类分析结果与形态学分类的结果一致,利用酶谱差异可以将六种黄精初步区分;(3)在六种黄精属植物中,湖北黄精、轮叶黄精、多花黄精和金寨黄精是较进化类型,玉竹和长梗黄精是较原始类型。     

蕨菜黄酮分离鉴定

采用75%的乙醇提取经乙醚脱脂的蕨菜粉末,提取液回收乙醇后以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取粗分段,硅胶柱层析、乙酸乙酯-甲醇系统对乙酸乙酯部位梯度洗脱,对其乙酸乙酯洗脱部分反复凝胶柱层析获得2个黄酮单体,分别鉴定为紫云英苷(1)、芦丁(2),其中化合物1为首次从蕨菜中分离得到。     

葡萄糖异构酶的结构特征及其工业（高产）用酶发掘

葡萄糖异构酶（glucose isomerase,GIase;EC 5.3.1.18）是利用淀粉生产果葡糖浆的关键用酶。筛选和构建适合大规模工业生产的 GIase 一直是研究的热点。本文首先综述葡萄异构酶的基本性质与序列结构和功能特性,在分析比对高生产性能GIase的序列特征和空间结构特征的基础上,发现位于该组GIase 的“催化口袋”上存在12个特有保守氨基酸残基位点,且有5个位点的残基含两性（亲水和疏水）的环状结构。由此提出了“高性能葡萄异构酶存在特有保守位点”的推断假设,并在结合自身实验结果和他人的研究,对基于特有保守位点发掘高生产性能GIase的可行性进行了进一步验证和探讨。该研究思路对高性能商业化GIase的发掘及对其它GIase的性能改造具有重要的参考价值。     

ICP-OES测定铁皮石斛干花中多种元素

用微波消解和马弗炉灰化消解分别处理云南、浙江、霍山三种产地的铁皮石斛干花,再用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES)定量分析多种元素含量,构建一种快速测定石斛干花元素含量的方法。结果表明,微波消解结合ICP-OES测出三产地石斛花存在常量元素K、Ca、Na、Mg和微量元素Se、Co、Cu、Mn、Fe、Cr、Sr、Zn、B,且含量均高于马弗炉消解结合ICP-OES测定结果;有害元素As、Pb、Cd、Hg和潜在有害元素Sb、Ba、Sn、Al、Ni均未检出;内标回收率均在92.5%-110.0%之间,相对标准偏差(RSD)<10%。试验探究出微波消解和ICP-OES的结合不仅效率高,检测成本低,运行稳定且测定结果准确可靠,可用于铁皮石斛干花中多元素分析研究。