灵芝菌丝体富硒条件优化及其硒多糖抗氧化活性研究

利用正交试验对灵芝菌丝体液体发酵富硒条件进行优化,研究培养基中不同碳源、氮源和亚硒酸钠浓度对菌丝体生物量、硒含量、富硒率以及胞外酶活性的影响,此外还对硒多糖的抗氧化活性进行了初步研究。结果表明:当培养基中碳源为20%马铃薯、氮源为2%麸皮、Na_2SeO_3浓度为5 mg/L时,培养基中菌丝生物量最高达到3.86 g/L,硒含量最高为0.576 mg/g,富硒率也达到最高为44.47%。Na_2SeO_3对菌丝生长的影响大于碳源和氮源;同样的Na_2SeO_3对胞外酶活性的影响最大,最优组的POD和PPO酶活性都较其他组高,且随着Na_2SeO_3浓度的升高,其酶活性逐渐降低。富硒灵芝菌丝体粗多糖都具有较强的体外抗氧化活性,通过相关性分析发现,其粗多糖的抗氧化活性与硒含量、富硒率具有显著的正相关。显示硒多糖在食品和药品等领域具有良好的开发利用前景。     

真姬菇液体发酵培养基筛选及硒富集条件优化

以真姬菇菌种为材料,采用液体摇瓶培养进行最适发酵培养基的优化,并探讨不同浓度亚硒酸钠和甘油的富硒效果。结果表明:真姬菇菌种最优液体发酵培养基为:马铃薯20%,麦麸滤液3%,可溶性淀粉3%,酵母粉0.15%,硫酸镁0.1%,磷酸二氢钾0.2%,最大生物量可达13.2 g/L;亚硒酸钠对菌丝生长有抑制作用,但可促进菌丝富硒,当其浓度为40μg/mL时,菌丝体的硒含量最大,达1.75μg/g,总体硒富集含量可达5.8μg/L发酵液;甘油对亚硒酸钠的总富硒含量有促进作用,当甘油浓度为50μg/mL时,菌丝总体硒富集含量最大,可达26.7μg/L发酵液。     

高生物量富硒酵母的选育及发酵条件的研究

采用硒浓度耐性培养,从8株酿酒酵母中筛选驯化得到一株高生物量富硒酵母菌株NH-7,并对其发酵条件进了行优化。采取流加培养,在菌株稳定期,即18 h开始分批添加亚硒酸钠至总硒浓度为30μg/mL,控制乙醇浓度为0.4%和0.7%,分别得到20.14 g的高生物量(每升培养液中获得的酵母菌体干重)和82.52%的硒转化率。在60μg/mL总硒浓度的流加培养中,得到高达2 411μg/g的有机硒含量,每升发酵液菌体干重为18.83 g。     

沼泽红假单胞菌富硒发酵条件的研究

通过对沼泽红假单胞菌富硒发酵条件的研究,确定最优的富硒培养方式。采用单一因素变量法,利用微波消解与紫外分光光度法测定沼泽红假单胞菌在不同发酵条件下的生物量变化与富硒效果,确定其最佳培养方式。结果表明,最佳富硒培养条件为:培养温度30℃,环境硒浓度100μg/mL,培养基初始pH为7,硒添加方式应为梯度分次添加,添加时间应为培养周期的第3天、第4天。利用得到的富硒菌种,在最优条件下培养7 d后,测得环境硒浓度下降为10.9μg/mL,硒的转化率为89.1%,菌体富硒量可达到73.54 mg/g(干菌种),其中有机硒含量为97.1%。利用沼泽红假单胞菌生产有机硒具有可行性,富硒菌体可以作为动物饲料添加剂,也可以为人类提供富含有机硒的食品。在以后的实验中,将进一步进行验证和工业化应用。     

富硒灵芝菌丝多糖、蛋白的提取及其体外抗氧化和抗肿瘤活性研究

灵芝具有较强的硒富集能力，其中的硒元素多以硒多糖、硒蛋白等有机硒形式存在。本研究以灵芝菌丝为研究对象，采用不同方法提取菌丝多糖及菌丝蛋白，探究外源施硒对二者的含量及其抗氧化活性的影响，并初步探究了水提多糖和可溶性蛋白的抗肿瘤活性。结果表明，以硒含量为95μg/mL的培养基发酵得到的菌丝体，其可溶性蛋白及硒含量较高，分别为1.630 8 mg/g和36.905 7μg/g;采用超声辅助碱提法时，多糖含量较高，为32.070 9 mg/g,且该多糖的硒含量为33.864μg/g。与对照组相比，富硒组灵芝菌丝体其多糖和蛋白的抗氧化性较强，且均表现出浓度依赖性。此外，富硒灵芝菌丝体其硒多糖对肿瘤细胞的抑制增殖效果较好，对HCCLM、A549和HSC-3肿瘤细胞的IC₅₀值分别为3.765、3.23和2.267 mg/mL;但其硒蛋白对上述三种癌细胞的增殖抑制效果较差，其IC₅₀值分别为636.987、506.97、555.598μg/mL。     

硒的抗癌机制研究——亚硒酸钠对环磷鸟苷的作用

 AFB_1和NDEA与正常小鼠肝切片培养5min即可使cGMP分别升高一倍及一倍半(p<0.001);当有Na_2SeO_3(1μg/mL培养液)存在时,此作用可被消除,单独加入Na_2SeO_3对cGMP无影响。培养介质中存在磷酸二酯酶抑制剂茶碱时,除cGMP基础水平提高外,上述作用均相同。荷腹水型肝癌(HepA)小鼠腹水细胞中cGMP比正常肝中cGMP水平高三倍,连续4天腹腔给硒(Na_2SeO_3、1mg/kg体重)可使癌细胞中cGMP下降一倍。此剂量对正常小鼠肝中cGMP无影响;Na_2SeO_3(1μg/mL)与腹水细胞在体外短时间培养时,对细胞存活无影响,却可使cGMP含量下降。     

Na_2SeO_4对蛹虫草子实体生长的影响

蛹虫草是一种药食两用真菌,具有与冬虫夏草相似的功能,且富硒能力较强。本研究通过大量的人工栽培试验,旨在探究不同浓度Na_2SeO_4对新疆本地蛹虫草子实体生长的影响。试验表明,质量浓度为20 mg/L的Na_2SeO_4对蛹虫草的生长不产生显著影响,但蛹虫草各项生物学指标均随着培养基中外源Na_2SeO_4浓度的增加而呈下降趋势,说明随着外源Na_2SeO_4浓度的增加会对蛹虫草的生长产生抑制效应,当外源Na_2SeO_4质量浓度达到200 mg/L时,生产的蛹虫草已不具备商品价值。由此可见,20 mg/L的质量浓度是以Na_2SeO_4为硒源进行蛹虫草富硒研究的安全浓度。该研究为富硒产品开发寻找新的硒源开辟了新思路,为新疆地区进一步大规模栽培富硒蛹虫草提供一定的参考,但是对以Na_2SeO_4为硒源的最佳富硒浓度还有待于进一步研究。     

富硒姬松茸液体培养条件的研究

采用液体摇瓶培养法 ,对姬松茸 (Agaricusblazei)富硒培养条件进行初步研究 ,结果表明 :富硒姬松茸液体培养的最佳培养基配方为玉米粉 30 g/L ,葡萄糖 2 0g/L ,硫酸铵 2 g/L ,酵母膏 3g/L ,KH₂ PO₄ 2 g/L ,MgSO₄ ·7H₂ O 1 g/L ,维生素B11 0 0mg/L ;采用 1mg/L亚硒酸钠驯化菌种 ,2 5 0mL三角瓶装量 80mL ,p     

虎掌菌菌丝富硒培养的研究

为生产合适的硒源提供一种思路,以菌丝体生物量、含硒量、还原糖、氨态氮和蛋白质为指标,采用四因素三水平正交设计法优化虎掌菌的富硒发酵条件,探讨不同浓度的硒对虎掌菌固体培养菌丝生长和液体培养产生的生物组分的影响。结果表明,高浓度的硒抑制虎掌菌菌丝体生长;正交试验选择不同的衡量指标,由极差分析得出各因素的影响程度大小,结合证实试验得到以还原糖为指标的最优组合为葡萄糖6%(质量分数)、酵母浸膏3%(质量分数)、KH_2PO_4 0.1%(质量分数)、Na_2SeO_3 0.6 mmol/L,其菌丝体生物量和氨态氮含量较高。与对照相比,加硒后虎掌菌发酵液中氨态氮、还原糖和总糖含量显著增加(P0.05);当硒浓度为0.5 mmol/L时,氨态氮、还原糖和总糖含量均达到最高值。菌丝体生物量和可溶性蛋白质分别在硒浓度为0.2 mmol/L和0.4 mmol/L时达到最大值。虎掌菌富硒培养后,发酵液的营养成分含量会发生变化。     

高生物量富硒酵母的选育及培养条件初步优化

通过筛选、单倍体分离、诱变和原生质体融合,从融合子中选育了一株高生物量富硒酵母菌株（编号为ZFF-28）,其细胞硒总含量分别是原始亲株ZY-67和ZY-198的2.8倍和2.0倍。通过单因素实验和正交试验设计,确定了优化培养条件：6%糖浓度的蔗糖糖蜜,添加0.5% (NH4)2SO4、0.1% H3PO4、60μg/mL Se,pH60～6.5,装液量50mL/250mL三角瓶,接种量10%,培养时间25h。在优化培养条件下,菌株ZFF_28的生物量可达8.2g/L,细胞中硒的含量达2050μg/g,硒总含量达到了16810μg/L,是培养条件优化前的1.3倍。细胞硒含量的91%为有机硒。     

高富硒酵母的筛选及富硒强化研究

富硒酵母在医学保健和制药产业中有着重要的应用,高富硒酵母是富硒酵母产品开发的基础。以新疆富硒土壤为样品来源,通过马丁培养基的初筛和富硒能力的复筛,筛选到一株富硒量相对较高的黏红酵母菌株Rhodotorula glutinis X-20。优化了菌株的富硒培养条件,结果显示,利用2%甘油为碳源可显著提高酵母中硒的累积,培养12 h时添加50μg/m L的亚硒酸钠能够保证酵母较高的硒累积量和生物量,添加0.4 mmol/L的磷酸盐可以有效地促进硒的转运和累积,最终使Rhodotorula glutinis X-20富硒量达到5 009μg/g。     

硒对荷叶离褶伞菌丝体胞外粗多糖的影响及发酵条件优化

以亚硒酸钠为无机硒源,研究硒的加入对荷叶离褶伞菌丝体胞外粗多糖的影响并优化其发酵条件,选择培养基灭菌条件、添加硒浓度、发酵时间和初始pH值作为优化因素,研究硒在各因素不同水平下对荷叶离褶伞胞外粗多糖含量的影响。通过单因素试验和响应曲面法得到最佳发酵条件:在121℃,20 min对培养基进行灭菌,发酵液中添加2μg/m L Na_2SeO_3,发酵244 h,培养基初始pH值为7.0的条件下,发酵产生的胞外粗多糖含量为0.760 g/100 m L,较未加入硒(0.218 g/100 m L)和加硒未优化前的含量(0.755 g/100 m L)有所提高。研究结果表明,响应曲面法优化富硒荷叶离褶伞发酵条件可使胞外粗多糖含量大幅度提高。     

响应面法优化富硒荷叶离褶伞菌丝体胞内粗多糖发酵条件

为了优化富硒荷叶离褶伞菌丝体胞内粗多糖发酵条件,在单因素试验基础上,考察灭菌条件、培养时间、硒添加量和硒添加时间对富硒荷叶离褶伞菌丝体胞内粗多糖的影响,并通过Box-Benhnken实验设计和响应面分析法确定最优发酵条件。结果表明,在121℃、20min条件下对培养基和Na₂SeO₃溶液分别灭菌后混合,在发酵至第129h,发酵液中添加4µg/mL Na₂SeO₃,继续发酵至第244h,发酵产生的富硒荷叶离褶伞菌丝体胞内粗多糖含量为349.8mg/100mL。     

亚硒酸钠抗红细胞膜蛋白交联作用的机理探讨

邻苯二酚氧化处理人红细胞膜会导致膜蛋白交联,产生高分子聚合物(HMP)。用N—乙基马来酰胺(NEM)封闭膜蛋白硫基,则不产生HMP。预先用Na SeO_3(0.05mol/L)处理红细胞膜,也同样不产生HMP。用N—(3-芘)马来酰胺(N-〔3-P〕NEM)标记红细胞膜来测试不同浓度Na_2SeO_3对荧光强度的影响。结果表明,随着Na SeO_3浓度增高荧光强度相应降低。Na_2SeO_3对红细胞膜的预处理时间和荧光强度的变化有关。经Na SeO_3处理的红细胞膜ESR谱提示了Na_2SeO_3与材相互作用有关。用荧光法测定膜结合硒含量表明,Na_2SeO_3处理红细胞膜可导致膜结合硒含量增高。推测,Na SeO_3很可能与膜蛋白疏基作用形成结合硒,从而起到抗膜蛋白交联作用。     

丙酸菌乳酸菌富硒发酵蔬菜的研制

目的 对丙酸菌乳酸菌富硒发酵蔬菜进行初步研制。方法 富硒丙酸菌、乳酸菌泡菜制作工艺流程：原料（洗涤整理）切分→盐水浸泡→装坛并放入辅料→加入老盐水（含乳酸菌）接种丙酸菌、Ｎａ２ＳｅＯ３１００μｇ／ｍｌ→培养。按泡菜、酸菜感官评分方法及评分标准,对不同处理的泡菜进行色、香、味、气、质地及滋味评分。并作产品无害化指标：Ｅ．Ｃｏｌｉ及亚硝酸盐浓度检测。采用３,３’－－二氨基联苯胺萃取分光光度法测定发酵蔬菜硒含量。蔬菜试样的试验指标有总硒质量分数「μｇ／ｇ」,有机硒质量分数「μｇ／ｇ」,以及有机硒占总硒的质量分数,分别代表该蔬菜对硒的吸收率变化及把无机硒转化成有机硒的转成率变化。结果 蔬菜虽未加硒作预泡处理,而是直接进行富硒发酵,泡制二天即可达到要求,随着泡制时间延长有机硒占总硒的质量分数有所下降,但下降幅度不如前者明     

秦巴山区富硒蛹虫草有效成分及硒存在形态分析

为探究秦巴山区富硒蛹虫草有效成分及硒存在形态,以秦巴山区蛹虫草CM-1518为研究对象,研究不同质量分数亚硒酸钠(0～500 mg/kg)对蛹虫草生长发育的影响,并对其有效成分及硒存在形态进行分析。试验结果表明当亚硒酸钠质量分数为100 mg/kg时,蛹虫草鲜质量最高,为293.41 g/盒。当亚硒酸钠质量分数为200 mg/kg时,虫草素、虫草酸含量最高,分别为1.06 mg/g和2.10 mg/g,表明硒与虫草素和虫草酸可协同增效,但虫草多糖含量变化规律不明显,亚硒酸钠的添加不利于腺苷的合成积累。经计算,富硒蛹虫草中有机硒所占百分比均高达99.9%,低浓度的亚硒酸钠可促进可溶性蛋白和可溶性多糖中硒的合成,但高浓度的硒却降低其合成,且富硒蛹虫草中可溶性多糖中硒含量高于可溶性蛋白硒含量。试验表明适宜浓度的亚硒酸钠可促进蛹虫草生长发育及有效成分合成积累。     

嗜酸乳杆菌的生长与富硒的动态关系研究

目的考察嗜酸乳杆菌在添加Na2SeO3的MRS培养基中的生长与富硒的关系和规律.方法以未添加Na2SeO3的MRS培养基的对照相比.结果加硒培养基中嗜酸乳杆菌生长较为缓慢,生长的延滞期增加,对数期缩短.结论处于延滞期的嗜酸乳杆菌细胞对硒的吸收作用比较强,富硒量迅速增加至最高达62.054 μl/g菌细胞.     

钝顶螺旋藻富硒培养条件的优化

硒是人和动物必需的微量元素 ,补硒可以防治多种疾病。有机硒具有低毒、高生物利用度的优点 ,目前主要寄希望于生物转化的途径来获得有机硒[1 ] 。植物对硒的生物有机化作用已有综述[2 ] ,并开发有富硒酵母[3 ] 、富硒菇类[4] 、富硒大蒜、富硒黄芪、富硒西洋参、富硒麦芽、富硒茶以及富硒鸡蛋、富硒牛奶等[5] 。螺旋藻是一种很有开发利用前景的藻类 ,但其含硒量极微 ,实验报道富硒螺旋藻对60 Ｃｏ γ射线胸部照射大鼠诱发肺炎和早期肺、肝纤维增生有防治作用[6] 。在培养液中添加亚硒酸钠可以实现藻类对硒的富集和转化 ,而且螺旋藻对无机硒…     

糖类和植物生长调节剂对冬虫夏草子实体人工培养的影响

为提高人工培养冬虫夏草子实体的产量,需要优化其培养参数。本实验测定培养基中糖类和植物生长调节剂对冬虫夏草子实体产量的影响。于大米小麦作为主要组分的培养基中接入冬虫夏草菌,在9~13℃下培养60 d,转入4℃培养。葡萄糖培养基中,冬虫夏草子实体干重是麦芽糖培养基中的7.6倍,出现菌丝和收获子实体的时间也比麦芽糖培养基中至少快2个月;蔗糖培养基中未获得子实体。不同种类和浓度植物生长调节剂对冬虫夏草子实体产量影响显著。于菌液中加入环磷腺苷、三十烷醇和玉米素的培养瓶均未发现菌丝生长。加入100μg/mL 6-苄氨基腺嘌呤的培养瓶可见菌丝生长,但未见原基分化。转入4℃下6个月后,与对照相比,加入100μg/mL吲哚乙酸、1μg/mL和100μg/mL吲哚丁酸、10μg/mL赤霉素、1μg/mL和10μg/mL乙烯利,以及1μg/mL 2,4-D的培养瓶中子实体干重均显著提高,其中加入1μg/mL吲哚丁酸和1μg/mL 2,4-D的培养瓶的子实体干重是对照的15倍。实验结果为优化冬虫夏草子实体人工培育提供了支撑。     

裸脚菇0612-9液体菌种优化及其对后续发酵产活性物质的影响

裸脚菇0612-9次级代谢产物具有强烈抗青绿霉活性,可作为微生物源防腐剂用于柑橘保藏,但是其发酵周期长,产出能耗大效率低。用摇瓶对裸脚菇0612-9的液体菌种培养基、培养条件进行优化并对优化后液体菌种接种种龄、接种量进行探索,最后用5L发酵罐进行放大发酵验证。取样计数测定菌丝球数量、过滤称重测定菌丝干重、HPLC监测活性物质Ⅱ的积累、牛津杯法评价抗青绿霉活性。经研究最佳碳源为玉米粉和麦芽糖,最佳氮源为蛋白胨,最佳液体菌种培养基组成为：玉米粉30g/L、麦芽糖10g/L、蛋白胨15g/L、KH₂PO₄ 2g/L、MgSO₄·7H₂O 1g/L;最佳培养条件：起始pH 5、接种3×Ф7mm菌块、装液量100mL/250mL三角瓶、温度28℃、转速160r/min;优化前菌丝球数46个/10mL,菌丝干重0.28g/100mL,优化后菌球数达985个/10mL,菌丝干重达0.69g/100mL,分别为优化前的21.4倍、2.43倍;后续发酵使用种龄9d的液体菌种、接种量7.5%。优化后液体菌种在发酵罐中后续发酵周期从10d缩短至5d,缩短50%,产量比优化前提高8.28%。