沼泽红假单胞菌富硒发酵条件的研究

通过对沼泽红假单胞菌富硒发酵条件的研究,确定最优的富硒培养方式。采用单一因素变量法,利用微波消解与紫外分光光度法测定沼泽红假单胞菌在不同发酵条件下的生物量变化与富硒效果,确定其最佳培养方式。结果表明,最佳富硒培养条件为:培养温度30℃,环境硒浓度100μg/mL,培养基初始pH为7,硒添加方式应为梯度分次添加,添加时间应为培养周期的第3天、第4天。利用得到的富硒菌种,在最优条件下培养7 d后,测得环境硒浓度下降为10.9μg/mL,硒的转化率为89.1%,菌体富硒量可达到73.54 mg/g(干菌种),其中有机硒含量为97.1%。利用沼泽红假单胞菌生产有机硒具有可行性,富硒菌体可以作为动物饲料添加剂,也可以为人类提供富含有机硒的食品。在以后的实验中,将进一步进行验证和工业化应用。     

富硒活性乳酸菌发酵剂的研制

通过L9(33)正交试验确定了富硒活性乳酸菌发酵剂的适宜发酵条件为发酵温度39℃,加硒量5μg/mL,接种量7%。经检验,研制的发酵剂富硒率达50.38%,冷藏5 d后发酵活力达0.48,冷藏7 d后活菌数达7.2×108cfu/mL,符合发酵剂的各项质量要求。     

减压处理对泡菜乳酸菌及风味物质的影响

以市售苦瓜为原料,研究了减压处理对泡菜自然发酵过程中乳酸菌的数量、总酸、乳酸、多糖及亚硝酸盐含量影响的变化规律。研究表明:减压处理可以促进泡菜发酵过程乳酸菌的增殖及乳酸含量的快速积累,并可以有效地降低泡菜中亚硝酸盐的含量,对泡菜多糖的保留有一定的作用。在0.04MPa(真空度)下,发酵终止时,乳酸菌活菌数仍可达到4.1×10~7个/mL,此时泡菜中的总酸含量为24.79mg/mL,其中乳酸含量为2.33%。     

富硒产品中硒的形态分析及化学评分模式的建立

采用微波水解、HPLC-HG-AFS法测定了硒蛋白粉、硒蛋白片、肽粉、富硒原料等19种硒产品中的总硒、硒代氨基酸和亚硒酸根离子[Se(IV)],分析了硒代氨基酸、Se(IV)和其他形态硒占总硒的百分比及不同形态硒代氨基酸的组成比例。以此为依据,将硒产品分为硒蛋白型、单一硒代氨基酸型、其它形态硒型及有机无机硒混合型。根据DBS42/002-2014规定建立了富有机硒产品评分模式,其中18种为富有机硒产品;根据适硒地区母乳中硒代氨基酸的组成比例提出了硒代氨基酸的化学评分模式,评分结果显示13种以蛋白态硒为主的硒产品中硒代氨基酸的组成比例均与母乳相差甚远,不利于人体平衡吸收利用,其中10种SeMet含量远远超过人体所需,SeCys_2为限制硒代氨基酸。该评分模式的建立对硒产品的开发具有指导意义。     

虎掌菌菌丝富硒培养的研究

为生产合适的硒源提供一种思路,以菌丝体生物量、含硒量、还原糖、氨态氮和蛋白质为指标,采用四因素三水平正交设计法优化虎掌菌的富硒发酵条件,探讨不同浓度的硒对虎掌菌固体培养菌丝生长和液体培养产生的生物组分的影响。结果表明,高浓度的硒抑制虎掌菌菌丝体生长;正交试验选择不同的衡量指标,由极差分析得出各因素的影响程度大小,结合证实试验得到以还原糖为指标的最优组合为葡萄糖6%(质量分数)、酵母浸膏3%(质量分数)、KH_2PO_4 0.1%(质量分数)、Na_2SeO_3 0.6 mmol/L,其菌丝体生物量和氨态氮含量较高。与对照相比,加硒后虎掌菌发酵液中氨态氮、还原糖和总糖含量显著增加(P0.05);当硒浓度为0.5 mmol/L时,氨态氮、还原糖和总糖含量均达到最高值。菌丝体生物量和可溶性蛋白质分别在硒浓度为0.2 mmol/L和0.4 mmol/L时达到最大值。虎掌菌富硒培养后,发酵液的营养成分含量会发生变化。     

秦巴山区富硒蛹虫草有效成分及硒存在形态分析

为探究秦巴山区富硒蛹虫草有效成分及硒存在形态,以秦巴山区蛹虫草CM-1518为研究对象,研究不同质量分数亚硒酸钠(0～500 mg/kg)对蛹虫草生长发育的影响,并对其有效成分及硒存在形态进行分析。试验结果表明当亚硒酸钠质量分数为100 mg/kg时,蛹虫草鲜质量最高,为293.41 g/盒。当亚硒酸钠质量分数为200 mg/kg时,虫草素、虫草酸含量最高,分别为1.06 mg/g和2.10 mg/g,表明硒与虫草素和虫草酸可协同增效,但虫草多糖含量变化规律不明显,亚硒酸钠的添加不利于腺苷的合成积累。经计算,富硒蛹虫草中有机硒所占百分比均高达99.9%,低浓度的亚硒酸钠可促进可溶性蛋白和可溶性多糖中硒的合成,但高浓度的硒却降低其合成,且富硒蛹虫草中可溶性多糖中硒含量高于可溶性蛋白硒含量。试验表明适宜浓度的亚硒酸钠可促进蛹虫草生长发育及有效成分合成积累。     

硒对肝癌细胞凋亡作用的研究

在小鼠右腋皮下接种Ｈ２２肿瘤细胞悬液,灌服含硒液（硒酸酯多糖）有抑制皮下肿瘤块生长的作用,在人肝癌细胞株培养液中,加入一定浓度含硒液（２０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、１５０μｇ／ｍｌ）,能抑制肝癌细胞增殖,并促使细胞凋亡。与此同时,小鼠血液中谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性提高,血浆和细胞培养液中ＮＯ含量升高。探讨硒酸脂多糖引起肝癌细胞凋亡,可能与使抗氧化活性提高、阻遏自由基对癌细胞增殖的介导及促使ＮＯ释放增加有关。     

脱落酸产生菌的遗传育种

从南京蔬菜研究所植物致病株中分离到３株脱落酸（ＡＢＡ）产量较高菌株,经初步鉴定均为灰葡萄孢。分别命名为Ａ２３,Ａ１０１,Ａ１６０。通过紫外诱变及菌株生长状况比较,选出一株菌Ａ１０１作为出发菌,经紫外,硫酸二乙酯多次诱变,在ＡＢＡ合成代谢关键酶抑制剂平板上定向选育出一株ＡＢＡ高产菌ＵＵＤ－１,该菌固体发酵可产生ＡＢＡ３７４μｇ／ｍｌ,是出发菌株产量的１４倍,且其产量连续培养５代稳定。     

中国Bt Ken－Ag最佳发酵培养基的优选及其发酵生理学研究

用正交试验方法选出ＢｔＫｅｎ－Ａｇ菌株的发酵培养基Ｍ３和ＦＢＨ２两个配方,其发酵液菌数可稳定的保持７０亿／ｍｌ,芽孢晶体形成率达８０－９０％,用ＦＢＨ２配方,对棉铃虫的毒力效价在２０００ＩＵ／μｌ以上。同时研究了在发酵培养基上的生长,ｐＨ变化、芽孢晶体形成以及糖、氮的代谢情况。     

富硒灵芝菌丝多糖、蛋白的提取及其体外抗氧化和抗肿瘤活性研究

灵芝具有较强的硒富集能力，其中的硒元素多以硒多糖、硒蛋白等有机硒形式存在。本研究以灵芝菌丝为研究对象，采用不同方法提取菌丝多糖及菌丝蛋白，探究外源施硒对二者的含量及其抗氧化活性的影响，并初步探究了水提多糖和可溶性蛋白的抗肿瘤活性。结果表明，以硒含量为95μg/mL的培养基发酵得到的菌丝体，其可溶性蛋白及硒含量较高，分别为1.630 8 mg/g和36.905 7μg/g;采用超声辅助碱提法时，多糖含量较高，为32.070 9 mg/g,且该多糖的硒含量为33.864μg/g。与对照组相比，富硒组灵芝菌丝体其多糖和蛋白的抗氧化性较强，且均表现出浓度依赖性。此外，富硒灵芝菌丝体其硒多糖对肿瘤细胞的抑制增殖效果较好，对HCCLM、A549和HSC-3肿瘤细胞的IC₅₀值分别为3.765、3.23和2.267 mg/mL;但其硒蛋白对上述三种癌细胞的增殖抑制效果较差，其IC₅₀值分别为636.987、506.97、555.598μg/mL。     

酸奶中乳酸菌含量的检测

目的检测酸奶发酵前后以及贮藏期间的乳酸菌活菌数及酸度变化,以对酸奶的质量进行控制.方法应用高层半固体琼脂试管法. 结果酸奶中乳酸菌含量极高,达2.65×1010个/ml以上,并随贮藏时间的延长而发生变化. 糖对酸奶的含菌量无明显影响.双菌酸奶比单菌酸奶含菌量高,常可达到倍增,pH值随发酵和贮藏进程而下降.结论高层半固体琼脂试管法操作简便、快速、准确、活菌检出率高.     

费氏丙酸杆菌费氏亚种生长特性及对致病菌和益生菌作用探讨

目的对1株费氏丙酸杆菌费氏亚种生长特性及发酵代谢物的抑菌和促生长作用进行研究。方法将费氏丙酸杆菌费氏亚种无细胞发酵上清液分别与5株致病菌和3株益生菌添加至24孔板中进行培养,通过测定A_(600 nm)值的变化来研究发酵代谢物的抑菌和促生长作用。结果发酵代谢物中的抑菌成分含量随发酵时间的延长而增加,到第6天后增长趋于平缓。当发酵上清液添加量达到400μL时,溶血性链球菌被完全抑制,达到600μL时,金黄色葡萄球菌、沙门菌、单核细胞增生李斯特菌和大肠埃希菌实验组A_(600 nm)值较对照组分别下降76.1%、68.5%、60.2%和43.9%,而长双歧杆菌和婴儿双歧杆菌实验组A_(600 nm)值较对照组分别上升17.1%和41.5%。结论费氏丙酸杆菌费氏亚种发酵代谢物对5株致病菌均表现出不同程度的抑菌效果,对2株双歧杆菌的生长有较明显的促进作用。     

金针菇子实体富硒栽培特性及HPLC-ICP-MS法对硒的分布研究

以金针菇子实体为富硒载体,比较研究其富硒及生长特性,同时采用高灵敏度分离和超痕量元素分析技术（HPLC-ICP-MS）分离检测其含硒生物大分子化合物,确定其分子量及硒含量。结果表明：金针菇子实体对硒的富集能力与培养基中硒浓度有关。样品中的硒浓度与培养基中硒浓度呈正相关性,同一培养基子实体中硒的分布为：菌冠＞菌柄＞菌根;培养基中硒浓度小于30mg/kg时对金针菇的生长有促进作用,富硒系数在2.8－9.9之间;培养基中硒浓度在40－200mg/kg范围时,对金针菇的生长产生抑制作用;高于200mg/kg时,不适于富硒金针菇的培养。对富硒金针菇子实体以Tris-HCl浸提,采用体积排阻色谱法（SEC-HPLC）根据蛋白分子量标样检测浸提液中可溶性生物大分子化合物的分子量分布在25kDa以下;同时与电感耦合等离子体质谱联机（SEC-HPLC-ICP-MS）将不同分子量的含硒化合物中的硒进行高温电离检测各形态硒化合物中硒的含量在68.74－2,986.00μg/kg之间,占浸提液中硒含量的71.87%;其中硒蛋白含硒量占4.88%。因此,以金针菇为载体进行硒的生物有机化不仅成本低,含硒量高,而且硒的主要存在形态安全无毒、人体利用率高。     

复合碳源培养对酒糟厌氧消化液中丙酸互营氧化菌及群落结构的影响

丙酸累积是影响厌氧消化系统稳定性的主要因素,为了考察酒糟厌氧消化过程中间代谢产物的累积情况,以总固体含量(TS)（质量分数） 5%和7%的白酒糟为发酵原料进行了批次试验。结果表明,乙酸(最高浓度33~129 mmol/L)、丙酸(39~61 mmol/L)、丁酸(5~44 mmol/L)和15种氨基酸(0.01~0.3 mmol/L)为主要中间代谢产物。为了探究其中关键的丙酸降解菌群,以酒糟原始沼液JO为植种源,10 mmol/L丙酸和0.1 mmol/L混合氨基酸为复合碳源进行富集培养,获得中温厌氧丙酸-氨基酸培养系JO-AP。高通量测序分析表明,互营丙酸降解菌与厚壁菌门（Firmicutes）的丙酸厌氧降解菌（Pelotomaculum schinkii）近缘,16S rRNA基因相似性100%,占细菌总丰度的16.7%。对比酒糟原始沼液JO、丙酸培养系JO-P及丙酸-氨基酸培养系JO-AP中的主要功能菌群,发现采用单一碳源和复合碳源获得的优势互营丙酸降解菌不同;传统培养与分子生物学技术相结合可以更全面地掌握系统中的微生物群落组成。     

不同剂量乙肝疫苗阻断乙型肝炎病毒母婴传播的远期效果观察

本文对出生后接种不同剂量乙肝血源疫苗的２７２名婴儿进行了３－５年的效果随访观察。结果表明,接种３、４、５年后,抗－ＨＢｓ阳性率仍分别保持在９０．５％、８２．３％和７３．２％,ＨＢｓＡｇ阳性率分别为２．８％、３．１％和４．２％。３年后抗－ＨＢｓ阳性率逐年下降,Ｐ／Ｎ值＞５０者以接种后３年为多,＜５０者以５年为多,３年后也呈下降趋势。随访结果说明,接种１０μｇ×４、５μｇ×４及２．５μｇ×４剂量的乙肝疫苗具有阻断母婴乙肝病毒传播的效果。鉴于Ｐ／Ｎ值及抗－ＨＢｓ阳性率在接种后３年开始下降,建议接种后３年应进行一次加强接种。     

固定化共生发酵无醇饮料的研究

以大麦和大米为主料,优质红茶为辅料,采用海藻酸钠包埋法固定酵母菌、嗜酸乳杆菌、弱氧化醋酸菌,混合装填固定化细胞反应柱,连续发酵生产无醇饮料。试验表明：麦茶汁１２°Ｂｘ,ｐＨ６５,２５℃,反应柱内固定化各菌种凝胶比例为酵母菌：嗜酸乳杆菌：弱氧化醋酸菌＝０．７：１：２,停留时间９～１３ｈ,相当于游离细胞发酵１０ｄ的效果。流出液含Ｌ－乳酸１．６５～１．９８ｇ／Ｌ,总酸２．６２４～３．０３２ｇ／Ｌ,酒精０７％～１．３２％。制成的新型发酵无醇饮料呈淡黄色,泡沫洁白细腻,含有多种人体必需氨基酸和维生素,以及具有保健作     

脱落酸产生菌的遗传育种

从南京蔬菜研究所植物致病株中分离到3株脱落酸（ABA）产量较高菌株,经初步鉴定均为灰葡萄孢（BolrytiscinereaPers．）。分别命名为A23,A101,A160通过紫外诱变及菌株生长状况比较,选出一株菌A101作为出发菌,经紫外,硫酸二乙酯多次诱变,在ANA合成代谢关键酶抑制剂平板上定向选育出一株ANA高产菌UUD－1,该菌固体发酵可产生ABA374μg／ml,是出发菌株产量的14倍,且其产量连续培养5代稳定。     

葡萄酒苹果酸—乳酸发酵接种时间选择的研究

分别在佳利酿葡萄汁酒精发酵前期（第Ｉ阶段）、中后期（第Ⅱ阶段）和结束时（第Ⅲ阶段）接种酒明串珠菌（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｏｅｎｏｓ）３１ＤＨ,进行苹果酸－乳酸发酵（ＭＬＦ）接种时间选择的研究,结果表明：不同阶段接种经ＭＬＦ后总酸降幅均为２．６ｇ／Ｌ;挥发酸含量上升且第Ｉ阶段＞第Ⅱ阶段＞第Ⅲ阶段;挥发酯以第Ⅱ阶段含量最高,为０．３７ｇ／Ｌ,同其他两阶段含量相比较,差异显（α＝０．０５）;接种时间     

L—苹果酸产生菌筛选及高产突变株诱变选育

通过广泛收集和分离,获得根霉属、曲霉属及裂褶菌属等属菌侏８９７侏。产酸指示平板上的变色圈测定结果表明,它们中间６２８株为产酸菌。通过纸层析对产酸菌发酵液酸谱的分析,获得１２９株Ｌ－苹果酸产生菌,经进一步测定发酵液中Ｌ－苹果酸的含量,筛选出以葡萄糖为原料,摇瓶发酵１４０小时,Ｌ－苹果酸产率４８．３７ｇ／Ｌ,对糖转化率４８．３７×１０＾－２的菌株ＬＭ０２。经初步鉴定,这一菌株为曲霉。以ＬＭ０２作为出发     

葡萄酒苹果酸-乳酸发酵接种时间选择的研究*

分别在佳利酿葡萄汁酒精发酵前期（第Ⅰ阶段）、中后期（第Ⅲ阶段）和结束时（第Ⅲ阶段）接种酒明串珠菌（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｏｅｎｏｓ）３１ＤＨ,进行苹果酸－乳酸发酵（ＭＬＦ）接种时间选择的研究,结果表明;不同阶段接种经ＭＬＦ后总酸降幅均为２．６ｇ／Ｌ;挥发酸含量上升且第Ⅰ阶段＞第Ⅱ阶段＞第Ⅲ阶段;挥发酯以第Ⅱ阶段含量最高,为０.３７ｇ／Ｌ,同其他两阶段含量相比较,差异显著（ａ＝０．０５）;接种时间影响着接种后菌群成活率和迟滞期的长短;接种酒明串珠菌３１ＤＨ进行 ＭＬＦ应以第ⅢＳ阶段为宜。根据