利用基因重组技术培育抗病毒甘薯

日本《农业技术》,１９９９年５４卷４期第７Ｎ～１１Ｎ页报道：甘薯带状粗皮病严重危害甘薯,向甘薯导入ＳＰＦＭＶ－Ｓ病毒外壳蛋白质基因,可以培育带状粗皮病抗性甘薯。向植物导入基因的方法,一是利用农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）,在质粒上对夹于２５ｂｐ的Ｔ－ＤＮＡ两末端序列的目的基因编入植物染色体;二是使用电激、聚乙二醇（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、粒子枪等直接导入。对于甘薯基因重组的研究情况概要如下。１　向甘薯导入ＳＰＦＭＶ－Ｓ外壳蛋白质基因１．１　甘薯基因重组方法。一是Ａｇｒｏｂａ…     

黑子南瓜甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆及序列分析

依据国外报道的南瓜甘油－３－磷酸转酰酶（ＧＰＡＴ）基因的ｃＤＮＡ序列合成相应引物,用ＲＴ－ＰＣＲ技术,成功地分离了黑子南瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｆｉｃｉｆｏｌｉａ）ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ片段,并亚克隆到了ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统的多克隆位点上,序列分析表明黑子南瓜ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ序列及递推的氨基酸序列与南瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｍｏｓｃｈａｔａ）相比分别具有９８％和９６５％的同源性。在１１８８ｂｐ中有２２个核苷酸发生变化,导致１３个氨基酸的改变     

玉米苹果酸脱氢酶基因的分离与结构分析

以一个玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）杂种一代超亲表达的ｃＤＮＡ片段为探针,从玉米幼苗期ｃＤＮＡ文库中筛选到一个全长１２８７ｂｐ的ｃＤＮＡ克隆。序列分析表明,该ｃＤＮＡ编码细胞质苹果酸脱氢酶,推导的氨基酸序列与龙须海棠（Ｍｅｓｅｍｂｒｙａｎｔｈｅｍｕｍ　ｃｒｙｓｔａｌｌｉｕｍ　Ｌ．）及拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）同一编码基因的氨基酸序列同源性分别为９０％和８４％。这是禾谷类作物中首次克隆的编码细胞质苹果酸脱氢酶的完整基因。     

“电子”cDNA文库筛选指导基因的全长cDNA克隆

“电子”ｃＤＮＡ库筛选主要是指通过采用生物信息学的方法延伸表达序列标签（ＥＳＴ）序列,以获得基因的部分及至全长ｃＤＮＡ序列,避免或部分避免构建与筛选ｃＤＮＡ库等烦琐的实验室工作。该方法具体体现了ＥＳＴ数据库的迅速扩张已导致识别与克隆新基因的策略发生革命性的变化。ＥＳＴ序列ＺＡ７３为本实验室克隆到的可能参与辐射致气管上皮细胞恶性转化过程的基因片段,本研究采用“电子”ｃＤＮＡ库筛选的方法对其可能     

从DNA序列到物种树

从ＤＮＡ序列到物种树张亚平（中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进化开放研究实验室６５０２２３）关键词ＤＮＡ序列,基因树,物种树Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＤＮＡＳｅｑｕｅｎｃｅ,Ｇｅｎｅｔｒｅｅ,ＳｐｅｃｉｅｓｔｒｅｅＤＮＡ不仅是主要的遗传物质,同时也是生物进...     

鸡马立克氏病病毒B抗原片段在大肠杆菌中表达

鸡马立克氏病病毒ＢａｍＨＩ基因文库Ｉ３质粒中含有编码Ｂ抗原膜外Ｄｏｍａｉｎ的ＤＮＡ序列。经ＳｃａＩ和ＳｐｈＩ双酶酶解Ｉ３质粒,分离获得７６４ｂｐＤＮＡ片段,并克隆进Ｍ１３ｍｐ１９中。ＤＮＡ序列测定分析表明克隆片段为ＭＤＶ－Ｂ抗原基因的４９４－１２５８ｂｐ部分序列。进一步分离ＮｃｏＩ－ＨｉｎｄＩＩＩ部分基因片（５３０ｂｐ）,克隆于ＰＬＰｒｏｍｏｔｅｒ控制下的含有修饰型ｃＩｔｓ８５７基因的表达载体中,     

鼻咽癌中差异表达基因的分析和克隆

为了验证通过ＣＤＮＡ代表性差性分析法（ｃＤＮＡ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ,ｃＤＮＡ ＲＤＡ）分离的ＣＤＮＡ序列在鼻咽癌活给组织中的差异表达,并进一不克隆鼻咽癌差异表达基因,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法并结合Ｎｏｔｔｈｅｒｎ杂交确定其转录本的大小,进而充分利用生物信息学对有差异表达ＣＤＮＡ全长进行克隆,并对其基因产物进行了结构和功能预测。结果显示,ＡＦ０９１５     

蓝藻OscilatoriaceaerDNA16S-23S基因间隔区的序列分析及其分类学意义

采用末端终止法对蓝藻类颤藻科Ｏｓｃｉｌａｔｏｒｉａｓｐ．ｒＤＮＡ１６Ｓ－２３Ｓ基因间隔区进行了序列测定,获得了Ｏｓｃｉｌａｔｏｒｉａｓｐ．ｒＤＮＡ基因间隔区４２７个核苷酸,其中包含１个异亮氨酸ｔＲＮＡ基因（ｔＲＮＡＩｌｅ）。并通过计算机联网从国际分子生物学数据弹库中获取颤藻科其它种的ｒＤＮＡ基因间隔区序列,通过比较分析,从分子水平对颤藻科Ｏｓｃｉｌａｔｏｒｉａｃｅａｅ属间的某些分类学问题进行了讨论,并根据序列中核苷酸差异值探讨了颤藻科属间界定的分子标准。提出了ｒＤＮＡ基因间隔区是良好的分子标记,可用于“赤潮”或“水华”蓝藻专一性核酸分子探针的研制     

热休克后表达受抑基因的分子克隆及其表达特性

以人成骨肉瘤细胞株ＨＯＳ－８６０３为热休克模型,在利用ＤＤｍＲＮＡ方法筛选和克隆了一个热休克后表达受抑基因的ｃＤＮＡ片段的基础上,以该片段为探针,筛选ＨＯＳ－８６０３细胞的ｃＤＮＡ文库,获得该基因的全长ｃＤＮＡ克隆（ＨＳＳＧ－１）;ＤＮＡ序列测定表明该ｃＤＮＡ全长１４５６ｂｐ,编码２７６个氨基酸,经计算机辅助分析,该ｃＤＮＡ序列尚未被报道。经ＲＮＡ斑点杂交证实,该基因的表达于多种组织细胞之中,并且     

烟草β—1,3—葡聚糖酶cDNA克隆,大肠杆菌表达及植物表达载体的 …

用０．１５％乙烯利诱导烟草幼苗后,提取叶片总ＲＮＡ,并通过反转录及多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出β－１,３－葡聚糖酶基因的ｃＤＮＡ。将其克隆至载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ后,完成了此基因的全序列分析。测序结果表明：所克隆的ｃＤＮＡ除第１００８位碱基与所报道的不同外,其它序列完全一致。为制备抗血清,构建了此基因的大肠杆菌表达载体,并在表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙＳ中得到表达,进行了Ｗ     

番茄抗病基因Cf9的3′UTR区含有内含子序列

从番茄（ＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍＭｉｌ．）抗病品种“中杂９号”基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了番茄抗叶霉病基因Ｃｆ９。序列分析结果表明,该基因全长２７５１ｂｐ,含有一个编码８６３个氨基酸的开放阅读框架。在该基因的３′ＵＴＲ区发现了一段未曾报道的内含子序列,长１１５ｂｐ,它所处的位置与番茄另一个抗叶霉病基因Ｃｆ２内含子的位置相似,其５′和３′边界序列为一重复序列,ＴＣＣＡＧＧ（Ｔ）ＡＴＴＣ,并与Ｃｆ２基因内含子边界序列高度同源。与已报道的Ｃｆ９的ｃＤＮＡ序列相比,它的第３７１位的核苷酸Ｔ突变成了Ｃ,从而使其编码蛋白的ＬＲＲ区第１２１位的亮氨酸突变为脯氨酸。     

日本血吸虫中国大陆株TPI基团的克隆及其表达产物特性

磷酸丙糖异构酶（ＴＰＩ）是血吸虫病疫苗重要的候选抗原基因之一。参考日本血吸虫已发表的ＴＰＩ ｃＤＮＡ序列,以日本血吸虫中国大陆株成虫ｍＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ法快速克隆出一大小约８００ｂｐ的ＤＮＡ片段。ＤＮＡ序列分析证实,所扩增到的ＤＮＡ片段即为日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶（ＳｊＴＰＩｃ）基因。将该基因重组到表达型质粒ｐＧＥＸ－４Ｔ中,表达的ＧＳＴ融合蛋白分子量约５４ｋＤ。用谷胱甘肽琼脂     

K562细胞中锌指蛋白cDNA基因片段的克隆

 Ｋ５６２细胞中锌指蛋白ｃＤＮＡ基因片段的克隆刘智,朱定尔,谢慎思,朱小湘,肖广惠,陈汉春（湖南医科大学分子生物学研究室,长沙４１００７８）１９８５年,Ｍｉｌｌｅｒ等［１］等分离并测定了非洲爪蟾卵母细胞转录因子ⅢＡ（ＴＦⅢＡ）的ｃＤＮＡ序列,推出蛋白质...     

人乳铁蛋白基因在烟草中的表达及抗细菌与病毒的能力

从人血液中性白细胞中分离细胞总ＲＮＡ,用ｏｌｉｇｏ（ｄＴ） 为引物进行ｃＤＮＡ 第１ 条链合成,再用乳铁蛋白ｃＤＮＡ 的特异性引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ） ,分两段合成并拼成完整的乳铁蛋白ｃＤＮＡ。核苷酸序列测定证明,该ｃＤＮＡ 所编码的氨基酸与前人论证的人乳铁蛋白的氨基酸序列完全一致。将该ｃＤＮＡ 构建成植物表达载体ｐ３５ＳｈＬＦｃ,经根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４ 感染烟草叶盘,获得具有卡那霉素抗性的烟草植株,ＰＣＲ检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明,人乳铁蛋白基因已整合到烟草基因组中。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交与Ｗｅｓｔｅｒｎ 免疫印迹分析,检测到人乳铁蛋白基因在转化烟草中表达。体外实验证明,人乳铁蛋白基因在烟草中的表达产物对植物致病菌烟草火叶病菌、水稻白叶枯病菌有一定抑制作用     

豌豆5SrRNA的cDNA克隆、全序列及结构特征分析

以赤霉素（ＧＡ）处理后的Ｇ２豌豆为材料,构建了一个２．０×１０６的ｃＤＮＡ文库,用随机筛选法从该ｃＤＮＡ文库中得到一个完整的ｃＤＮＡ．其中１１１５ｂｐ全序列分析表明,它编码了豌豆５Ｓ核糖体ＲＮＡ（５ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌＲＮＡ,５ＳｒＲＮＡ）,基因内部存在着与核糖体蛋白Ｌ５及５ＳｒＲＮＡ结合蛋白（５ＳｒＲＮＡＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ）同源的区段,这些同源区段是蛋白与ＲＮＡ结合的位点．基因内部还存在着大量的重复序列．     

苎麻疫霉激发蛋白基因断裂现象初探

苎麻疫霉可分泌具有诱抗作用的激发蛋白（α－ｅｌｉｃｉｔｉｎ）,根据α－ｃｌｉｃｉｔｉｎ第２４￣３０和５６￣６３位保守区氨基酸推导的寡核苷酸引物序列,对苎麻疫霉基因组ＤＮＡ进行特异ＰＣＲ扩增反应,发现其扩增的ＤＮＡ片段大于预计的片段。回收纯化的特异扩增ＤＮＡ,并进行克隆和测序分析,结果表明特异扩增的ｃｌｉｃｉｔｉｎ基因亚克隆ＤＮＡ为５７０ｂｐ,大于预计的１１７ｂｐ。在特异片段中,存在３个内含子将基因     

稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)诱导的水稻早期反应基因ER1的5'' 端cDNA片段克隆及序列分析

研究高等生物基因表达与调控的一个重要方面是分离基因的编码区及其上游的调控序列（ＤｅＶｅｅｒ等１９９７）,这需要获得一个基因的ｃＤＮＡ全长及从植物基因组获取全基因。在前文（周建明等１９９９）中曾经分离了稻瘟病菌侵染诱导的水稻早期反应基因ＥＲ１的ｃＤＮＡ片段,但是运用ｍＲＮＡ差异显示技术分离的ｃＤＮＡ片段往往只有近ｍＲＮＡ３’端的一部分,难以反映基因的结构及功能特点,因此,必须进一步分离其５’端的部分才有可能比较全面地了解此基因的特点。ＲＡＣＥ（ｒａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎ…     

中国人白细胞介素-12 cDNA基因的克隆及序列分析与比较

为研究中国人ＩＬ－１２的基因特征,采用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）从中国人脐带血单核细胞中分别克隆了Ｐ３５、Ｐ４０两亚基ｃＤＮＡ基因,包括完整的前体蛋白编码序列,其中Ｐ３５ ｃＤＮＡ编码２１９个氨基酸的多肽,Ｐ４０ ｃＤＮＡ编码３２８个氨基酸的多肽,与国外序列（ＮＫＳＦ、ＣＬＭＦ）比较结果发现：所克隆序列Ｐ３５同ＮＫＳＦ相比,第４４ａａ密友子由ＧＴＣ（Ｖａｌ）→ＧＴＧ（Ｖａｌ）,但未改     

利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究

设计一对ＰＣＲ引物,其中上游引物的５’端除目的基因外,还加Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列,以质粒（ｐＳＶＬＤ３）为模板,通过ＰＣＲ扩增出带有Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列的１３９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该ｃＤＮＡ有２个碱基变异,以此ＰＣＲ产物为模板,通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其     

木质素过氧化物酶基因5'端上游调控序列的分析

黄孢原毛平革菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）能产生降解木质素的胞外木质素过氧化物酶（ＬＩＰ） 和锰过氧化物酶（ ＭｎＰ）同工酶。为研究ＬＩＰ基因的转录调控机理, 对ＬＩＰ基因（ ＧＬＧ３ 和ＧＬＧ６） 的５′端上游序列进行亚克隆, 获得６ 个亚克隆ＤＮＡ 片段, 然后应用凝胶迁移率变动分析技术筛选能与菌体蛋白质专一性结合的ＤＮＡ片段。结果表明： ＬＩＰ基因ＧＬＧ６ 的５′端上游有一个约６７０ ｂｐ 的ＤＮＡ 片段能与总蛋白质组分专一性结合, 其核苷酸序列分析表明该片段可能含有蛋白质结合的序列特征。研究结果初步显示, 黄孢原毛平革菌可能存在有与ＬＩＰ基因上游某些顺式调控元件相互作用的蛋白质, 调控着ＬＩＰ基因的转录表达。