UV与NTG复合诱变选育咪唑立宾高产菌

为选育咪唑立宾的高产菌株,对咪唑立宾产生菌Eupenicillum sp.E-0509-2的孢子分别进行了紫外线照射(UV)、亚硝基胍(NTG)和UV+NTG复合诱变处理筛选突变株。结果表明试验所确定的咪唑立宾产生菌的孢子诱变适宜条件为:将孢子悬液在电磁搅拌下,经紫外线照射处理60s后,以3.0g/L NTG处理20min。经发酵筛选试验,获得了一株遗传性状稳定、高产咪唑立宾的诱变菌株Eupenicillum sp.E-UN41,其咪唑立宾产量较出发菌株提高13倍。     

磷霉素产生菌的定向诱变育种

目的:提高出发菌的磷霉素产量.方法:采用紫外(UV)+亚硝基胍(NTG)复合诱变的方法处理出发菌株(Bacillus fusi-formis),以分别含2.0和2.5mg/mL磷霉素的分离培养基来筛选UV诱变和NTG诱变后的菌株.结果:从大量突变菌中选育出一株高产、稳定的磷霉素生产菌株.当底物浓度为10mg/mL时,其磷霉素产量由1.15mg/mL提高至2.30mg/mL,转化产量提高了100%,转化率提高了10.16%.结论:采用UV+NTG诱变结合含FOM的分离平板进行定向筛选可以获得FOM高产菌株.     

γ-聚谷氨酸生产菌的选育及培养条件研究

从土壤中筛选分离到1株γ聚谷氨酸的生产菌株yt102,初步鉴定为枯草芽孢杆菌;以此为出发菌株采用紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)进行复合诱变,获得1株γ聚谷氨酸高产突变株,突变株连续传代10次,发酵性能稳定;通过单因素和正交试验确定培养基的最佳组成,在最优条件下,γ聚谷氨酸的平均产量可达28.5 g/L。     

海洋低温蛋白酶菌株选育及发酵培养基的研究(I)

以渤海和黄海分离出400多株在低温条件下生长良好的菌株为出发菌株,利用常规筛选方法选出2株低温蛋白酶产生菌(Pseudom onas alcaligenes)。经UV、DES、NTG、EMS、L iC l单独及复合诱变,选育出一株(Pa040523)蛋白酶高产突变株。通过单因素实验,确定了Pa040523菌株蛋白酶发酵培养基为:玉米淀粉糖1.8%,尿素0.6%,磷酸氢二钾0.6%,磷酸二氢钾0.3%。该突变株低温蛋白酶产量为940.8 U/mg。     

阿拉伯胶酶产生菌株的筛选及其发酵培养基的优化

从土壤中筛选产阿拉伯胶酶的微生物菌株,并通过紫外诱变选育后得到高产突变菌株ZHB05F,依据菌落和孢子形态特征初步鉴定为镰刀茵(Fusarium sp.).通过单因素试验,优化了产酶培养基的主要组分的浓度和pH值,得到最佳的产酶发酵培养基组成为:阿拉伯胶30 g/L,(NH4)2SO4 8 g/L,K2HPO4 1g/...     

UV+MW复合诱变结合抗性突变筛选替考拉宁高产菌株

采用微波照射(MW)、紫外照射(UV)和MW+UV处理技术,对替考拉宁产生菌AT-92的孢子进行诱变,诱变处理的孢子悬液涂布在含替考拉宁致死浓度的培养基平板上培养,获得替考拉宁抗性突变株,通过摇瓶发酵对替考拉宁抗性基因突变株进行筛选,获得一株遗传性状稳定的替考拉宁高产菌AT 92-52-37菌株,其产替考拉宁能力比出发菌株的提高5倍。     

L-精氨酸产生菌诱变育种的研究

以谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutam icum)ATCC138761为诱变出发菌株,经紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)逐级诱变处理和选育,获得一株能够积累L-精氨酸的菌株UN100-12(SGr,AEr)。在以葡萄糖为碳源、以硫酸铵为氮源的培养基中直接发酵4d,产酸可达16.6 g/L,并具有较好的遗传稳定性。     

SOD高产菌株乳酸菌的选育及其产酶条件的研究

采用常规筛选方法从 200多株不同种属的乳酸菌中筛选出一株超氧化物歧化酶(SOD)产量较高的菌株 (Sn 898)作为实验出发菌株 ,经紫外线 (UV) ,硫酸二乙酯(DES) ,亚硝基胍 (NTG)复合诱变 ,选育出一株 (Lactobacillusplantarum-578简写L .plan-578)SOD产量高达6400u/g湿菌体的高产菌株。该突变株的SOD产量较出发菌株提高了3.5倍 ,并研究了影响SOD产生的最适温度 ,起始pH值 ,通气量 ,培养时间等因素。在优化     

雷帕霉素菌株的常压室温等离子体(ARTP)诱变选育

雷帕霉素由放线菌次级代谢产生,具有抗真菌、抗肿瘤以及免疫抑制等生理活性,是临床重要的器官移植、抗肿瘤原料药物。为了获得具有高发酵潜力的工业用菌株,对雷帕霉素菌株的摇瓶发酵工艺进行了优化。采用常压室温等离子体(ARTP)的方法对高产雷帕霉素菌株的单孢子悬液进行诱变处理,通过高压液相的方法对诱变菌株的发酵代谢产物进行检测,成功地从诱变菌株中筛选获得了发酵产量提高30%以上的诱变菌株,建立了ARTP诱变选育高产雷帕霉素菌株的方法,为后期进行该菌株的选育研究工作以及中试发酵工艺优化提供了方法和物质的基础。     

诱变选育雄烯二酮高产菌株及其发酵条件研究

以一株降解植物甾醇产生雄烯二酮的分枝杆菌为研究对象,先后利用亚硝基胍(NTG)和N+注入技术对其进行诱变处理。通过考察NTG浓度和N+注入剂量对菌株诱变效果的影响,确定了最佳诱变条件为NTG浓度为0.6 mg/mL,N+注入剂量为60×1011ions/cm2。最终选育出一株高产突变株Mycobacterium sp.N-2,其生产雄烯二酮的能力较出发菌株提高了37.8%,且传至第七代仍基本稳定。进一步研究了初始pH值、接种量和摇床转速等对高产突变菌株发酵能力的影响,确定了最佳发酵条件为初始pH值7.5,接种量12%,摇床转速260 r/min。     

定向选育衣康酸高产菌株的研究

以衣康酸生产菌土曲霉Ａ９００２为出发菌株,经紫外线及亚硝基胍复合诱变后再行定向选育,即在以衣康酸为唯一碳源的培养基中富集不能同化衣康酸的菌种,将将它们涂布在含乌头酸酶抑制剂（单氟醋酸）的高糖、高衣康酸平板培养基上,最后从中而筛选出一支衣康酸氧化酶弱,乌头酸酶活强,并耐自身代谢产物的高产突变株Ａ９００３。此菌株在摇瓶培养７２ｈ后,产酸为９．２％,转化率为５８．１％,在１００ｍ＾３发酵罐生产性试验中,     

脂肪酶产生菌的选育及产酶条件的优化

A lipase-producing bacterium strain was isolated from soil and was identified as Pseudomonas sp.. Its lipase yield was improved 2.25-fold by combined beatment of UV irradiation and NTG. The lipase fermentation condition for the mutant strain was optimized with Plackett-Burman design and Response Surface Analysis(RSA), and the formula of the optimum medium suitable for industrial scale fermentation was thereby established. A maximum yield of 87.5 U/ ml was obtained.     

糖化酶生产菌株种子制备工艺优化

目的：缩短糖化酶工业生产菌株黑曲霉A.nigerCICIM GB0506的种子制备周期。方法：对该菌的活化培养基配方及种子制备方式进行改良,并通过L9（3^4）正交试验对其液体培养方法进行优化。结果：在固体活化培养基中添加0.2%的酵母粉及1%的玉米淀粉,有利于加速菌体生长;加入40粒,粒径3-4mm的玻璃珠130r/min,摇床培养可以获得更为分散、均一的种子液;液体种子制备的较优条件为初始pH4.5,装液量90mL,琼脂加量0.1%,培养天数5d。结论：新的制备工艺使糖化酶种子制备时间较现在工业生产上使用的工艺缩短了4d,进行后续糖化酶摇瓶发酵产酶水平是原工艺的1.18倍。     

缺陷短波单胞菌高产L-脯氨酸菌株的选育及其发酵条件优化

以缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)JNPP-1为出发菌株,利用紫外诱变及亚硝基胍复合诱变的方式,获得1株遗传性能稳定、可抗磺胺胍、能耐高渗透压以及能以琥珀酸钠为唯一C源的、在培养基上有生长优势的L-脯氨酸高产菌株JNPP-NSS(SGr、Sucg、NaClr)。经发酵条件优化后,L-脯氨酸的最高质量浓度可达47.3 g/L,与出发菌株相比提高了45.1%,生产速率由0.45 g/(L·h)提高到0.78 g/(L·h)。     

土曲霉（Aspergillus terreus）产生洛伐他汀（lovastatin）的研究

从土曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｔｅｒｒｅｕｓ ＣＡ９５１发酵液中,分离出一种白色针状晶体,经质谱、紫外光谱、红外光 谱和核磁共振谱分析,与文献报道的洛伐他汀（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）基本一致。 Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ　 ＣＡ９５１经亚硝基胍诱变,选出 编号为ＣＡＮ １８７的突变株,其产生洛伐他汀的能力比ＣＡ９５１高６６％。摇瓶发酵实验研究了不同碳源、氮源和 水质对 ＣＡＮ１８７ 菌株产生洛伐他汀的影响,并进行了 ５００Ｌ发酵罐实验,发酵单位达９００ｍｇ／Ｌ左右。     

微生物转谷氨酰胺酶的生产菌种诱变和发酵生产分析

对本研究室从土壤分离得到的使霉菌(Streptomyces sp.)WZFF．W-12菌株的斜面孢子预培养处于初萌发状态后,以亚硝基胍(NTG)进行诱变育种试验,并根据诱变处理后菌落的某些形态变化状况与产酶能力相结合的特征,初步判断产酶性能,挑选高酶活菌株,再经过初筛和复筛,获得一性能良好的产酶突变菌株WZFF.W-12.var MN-35,转谷氨酰酶活达0．53U／mL,比原始菌株提高了1．2倍。然后在摇瓶条件下,对其发酵过程中的主要培养基组成及各种培养条件对菌体生长和产酶的影响作用进行了研究,结果表明该菌株发酵生产转谷氨酰酶的适宜破源为可溶性淀粉 葡萄糖,氮源是多价胨外加少量的酵母膏,优化工艺条件为种龄时间24h、接种量10％、初始以值6．5、温度30℃和搅拌速度200r／min,产酶能力显著提高,用小型生化反应器可以稳定生产2.0U／mL以上的酶产品。     

高产DHA破囊壶菌Aurantiochytrium sp. PKU#SW7诱变株的筛选

【目的】对野生菌株Aurantiochytrium sp.PKU#SW7诱变育种,筛选高产DHA突变株。【方法】采用UV诱变和化学药物胁迫筛选方式,以菌株的生物量、油脂产量、DHA产量作为筛选指标,获得高产DHA突变株。【结果】经鉴定获得一株DHA高产突变株PKU#PM003,该菌株传代4次后仍保持较好的遗传稳定性。摇瓶发酵后,PKU#PM003生物量产量高达6.62 g/L,比原始菌株5.95 g/L提高了11.26%,脂肪酸含量高达4.01 g/L,比原始菌株3.18 g/L提高了26.1%,DHA在脂肪酸中所占比例由29.97%增加到33.43%,产量提高了41.01%,油脂突变效果显著。【结论】突变株PKU#PM003可作为性状优良的工业化发酵生产菌种,并在DHA产量提升上仍具有巨大的空间。     

高产马杜霉素产生菌的诱变选育

研究马杜拉放线菌的筛选,比较代表5类不同诱变剂UV,EMS,LiCl+UV和NTG的处理效果,经摇瓶验证,用NTG处理后经过初筛、复筛得到摇瓶效价比对照菌株高91.5％的诱变菌株348＃,稳定性考查后,在2.5m~3和50m~3发酵罐上进行试生产,效果显著,菌种代谢速度加快,效价比对照罐高60％,主要组分A组分的含量由91％增长到96.5％,提高了经济效益。     

携多拷贝glaA的重组黑曲霉过量合成糖化酶的研究

以工业生产菌株黑曲霉CICIMF0410基因组DNA为模板,扩增出糖化酶glaA基因,测序并进行表达研究。GlaA基因的核苷酸序列长为2167bp,包含4个内含子。氨基酸序列比对表明此黑曲霉糖化酶与其他曲霉属来源的糖化酶有很高的同源性。将glaA基因克隆到pBC-Hygro载体中,构建重组质粒pBC-Hygro-glaA并转化A.nigerF0410。携多拷贝glaA的转化子用150μg/mL潮霉素抗性筛选并通过荧光实时定量PCR鉴定。结果表明,在染色体整合2~3倍糖化酶基因对糖化酶的过量合成是适宜的,有助于提高糖化酶活力。对转化子进行摇瓶发酵研究,发酵终止时转化子GB0506的糖化酶活力比出发菌株F0410提高了17.5%。因此,增加黑曲霉染色体糖化酶基因的拷贝数可以显著提高糖化酶活力。