蛋白质翻译后修饰研究进展

翻译后修饰在蛋白质加工、成熟的过程中发挥着重要的作用,它可以改变蛋白质的物理、化学性质,影响蛋白质的空间构象、立体位阻及其稳定性,进而对蛋白质的生物学活性产生作用,引起蛋白质的功能改变。修饰基团自身的结构特性对蛋白质的性质、功能也会产生深远的影响。在已有的研究基础上,综述蛋白质翻译后修饰的主要类型以及各修饰作用潜在的生物学功能。     

过表达调控基因rapG提高雷帕霉素的产量

雷帕霉素是具有很好的抗真菌、免疫抑制、抗肿瘤等活性的微生物次级代谢产物,可由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)发酵产生。由于传统诱变育种的菌株产量较低,不能满足工业生产的需求。为了找到突破传统育种瓶颈的技术方法。本研究通过建立该菌株的遗传操作体系、构建表达载体、建立发酵、提取和检测等的研究方法,对传统诱变菌株(S.hygroscopicus17-1)进行遗传改造。首先,以整合型载体pSET152为出发载体,构建了含有自身启动子的rapG调控基因表达载体,建立并优化了该菌株的遗传操作系统,通过大肠杆菌与链霉菌属间接合转移的方法成功将rapG整合至原菌株基因组上,获得了该基因的多拷贝菌株S.hygroscopicus17-Gp。采用高压液相色谱和质谱等方法,检测分析了S.hygroscopicus17-1与S.hygroscopicus17-Gp发酵液中雷帕霉素的产量。结果表明S.hygroscopicus17-Gp发酵液中雷帕霉素的产量比原菌株提高了约40%,这为后期进行相关机制和产量提高的理论与实践研究奠定了基础。     

RNA干扰技术的基础研究与应用

RNA干扰技术(RNAi)是一项高效率、强特异性的基因沉默技术.自1998年发现RNA干扰现象以来,RNAi吸引很多国内外科学家的研究兴趣.经过10多年的潜心研究,现在对该技术的参与成分、作用机理都有了较深入地了解.同时,随着生物学知识的完善和生物技术与基因工程的发展,研究人员时RNAi在基因功能研究、疾病(如肿瘤)相关的基因治疗、新药的研究与开发等方面的应用进行了广泛的探索,并且已经显示该技术的潜在应用价值,但是RNAi的自身缺陷制约了其在临床治疗等方面的实际应用.综述前人的研究结果,系统阐述了RNAi的发生、作用机理、缺陷以及其应用,为相关科学研究提供参考.     

L-山梨糖流加发酵高效生产2-酮基-L-古龙酸

实验充分利用混合菌系氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)和蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)混合发酵的优良特性,通过在发酵过程中间歇流加L-山梨糖的方法,实现了在自动控制温度、pH和溶氧的条件下,高效发酵L-山梨糖生成2-酮基-L-古龙酸(2-KLG)的目的。结果表明：当将L-山梨糖的终浓度调高到14％(w／v)时,2-KLG产量为130mg／mL左右,转化率达90％,发酵周期40—60h之间。结论：发酵过程中间歇流加L-山梨糖可以解除高浓度糖对产酸的抑制作用,提高了糖的转化率,但是发酵周期略有延长。     

VC二步发酵产酸菌氧化葡萄糖酸杆菌的选育

实验通过紫外线两轮诱变的方法诱变选育氧化葡萄糖酸杆菌（Gluconobacter oxydans）,以实现提高2-酮基-L-古龙酸（2-KLG）产量的目的,获得1株高产2-KLG的菌株G5。结果证明该突变菌株在pH6．5—6．7的发酵培养基中与蜡质芽孢杆菌（Bcillus cereus）混合发酵,G5的平均糖酸转化率提高了13．49％,酸量达到83．6mg／mL,发酵周期缩短了2—3h。经连续10代转接发酵实验,证明其产酸稳定性较好。结论：氧化葡萄糖酸杆菌（Gluconobacter oxydans）的突变体G5提高了糖酸转化率,缩短了发酵周期。     

雷帕霉素菌株的常压室温等离子体(ARTP)诱变选育

雷帕霉素由放线菌次级代谢产生,具有抗真菌、抗肿瘤以及免疫抑制等生理活性,是临床重要的器官移植、抗肿瘤原料药物。为了获得具有高发酵潜力的工业用菌株,对雷帕霉素菌株的摇瓶发酵工艺进行了优化。采用常压室温等离子体(ARTP)的方法对高产雷帕霉素菌株的单孢子悬液进行诱变处理,通过高压液相的方法对诱变菌株的发酵代谢产物进行检测,成功地从诱变菌株中筛选获得了发酵产量提高30%以上的诱变菌株,建立了ARTP诱变选育高产雷帕霉素菌株的方法,为后期进行该菌株的选育研究工作以及中试发酵工艺优化提供了方法和物质的基础。