阿片受体亚型研究进展

近20年来,人们已成功克隆了μ,δ和κ三种经典阿片受体的基因。最近克隆的孤儿(ｏｒｐｈａｎ)受体,其结构特征与阿片受体基本相同,并有高度的同源性,又被称为阿片受体样受体(ｏｐｉｏｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒｌｉｋｅ,ＯＲＬ1)。进一步通过药理学特性的研究,提出每一种受体可能有不同的亚型,并发现了一些新型的ε、λ、ι和ζ阿片受体,而σ受体药理学特性与其它阿片受体明显不同,应不属于阿片受体的范畴。1.阿片受体1.1　μ受体亚型μ(ＭＯＲ1)受体的基因与编码δ、κ受体和ＯＲＬ1受体的基因大约有50%～70%的同源性。μ受体的两种剪接变异体(…     

脑内发现全新的阿片受体样受体及其内源性配体

１９９４年克隆了一种孤儿受体－－阿片受体样受体。１９９５年又发现其内源性配体ＯＦＱ或Ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ。ＯＲＬ受体与已知的阿片受体有５０％同源性,ＯＦＱ则与强啡肽Ａ化学结构高度相似,这两系统在功能上可能既有相反的作用,又有相似的作用,其详情正研究中。     

阿片受体研究最新进展──看分子药理学研究动向

阿片受体研究自1992年δ受体克隆成功;发展迅速,1993年μ、κ受体也克隆成功。1994年发现阿片孤儿受体ORL－1,1995年即找到ORL－1的内源性配体Nociceptin（OrphaninFQ）。1996年成功地应用基因敲出技术制成缺乏μ受体基因的小鼠,证明吗啡镇痛及成痛形成通过μ受体。1997年又发现了μ受体内源性配体endomorphine－1和endomorphine－2。我国学者研究成功的羟甲芬太尼的八个立体异构体合成,发现F－9202和F－9204是当前μ受体选择性最高的配体。计算机模拟μ受体三维结构及定点突变工作证明Tyr－148及His－319是羟甲芬太尼的结合位点。这些进展反映了当前神经分子药理研究的动向。     

阿片受体样受体ORL1基因在大鼠脑内的表达

我们采用地主辛标记的寡聚核苷酸探针和原位杂产技术研究了新发现的阿片受体样受体ＯＲＬ１基因在正常大鼠脑仙的表达和分布。发现ＯＲＬ１基因在大鼠脑内广泛表达。尤其在大脑皮层、丘脑、下丘脑、杏仁核、海马、隔核、缰核、导水管周围灰质、中缝核群及蓝斑等区域。提示ＯＲＬ１除参与痛觉调制外,还可能参与脑内多项生理功能的调控。     

阿片肽研究的回顾与展望

阿片肽研究已有２０多年历史,１９６２年中国学者提出脑内存在吗啡有效作用位点的创见。７０年代期间,先后发现各类阿片受体以及脑啡肽、β－内啡肽和强啡肽等阿片肽。９０年代初,各类阿片受体的基因 克隆成功,随后又发现了孤啡肽,当前阿片肽研究正在继续。阿片受体的基因剔除、计算机的模拟结构分析、阿片类物质的镇痛与成瘾机制、寻找新的阿片肽及受体的基因克隆等均在深入进行。     

阿片受体基因表达调控的最新进展

20世纪90年代早期,科研人员成功克隆了μ、δ和κ3种经典的阿片受体基因,近两三年来又克隆出了孤儿(orphan)受体。目前的研究证实,这些阿片受体基因的调控主要分为转录调节和转录后调节。在转录水平上,最近的研究揭示了众多的转录因子、维生素A酸以及胞质分裂在阿片受体基因表达调控上的作用。转录后调控包括了对基因转录副本的选择性拼接,mRNA稳定性的改变以及翻译效率的影响。     

阿片受体的研究进展

阿片及其衍生物在神经系统中具有很强的镇痛作用,对阿片受体的研究已有20多年的历史。20世纪70年代发现了阿片受体的存在并先后发现了脑啡肽、β-内啡肽和强啡肽等阿片肽,随后发现了孤啡肽。如年代3种阿片受体的基因均已克隆成功,氨基酸序列表明它们均属G蛋白偶联受体,为7螺旋跨膜受体家族的成员,具有很高的同源性,功能包括介导腺苷酸环化酶的抑制作用以及一些离子通道的激活和抑制作用等。阿片受体基因的克隆将有利于新型临床药物的开发以及耐受和药物成瘾性分子基础的研究。目前阿片受体基因敲除、计算机结构模拟分析以及寻找新型阿片受体基因的研究均在深入进行。     

汉滩病毒S基因及其5‘端真核表达载体的构建及在细胞中的表达

体外研究汉滩病毒（ＨＴＮＶ）Ｓ基因及其５'端表达的意义,为核蛋　白Ｔ细胞表位的研究奠定基础。设计２套引物,用ＰＣＲ方法从ＰＢＶ２２０－Ｓ２２原核质粒中扩增出Ｓ　基因全读码框（３７－１３２６ｂｐ）及Ｓ基因５'端（３７－５０１ｂｐ）,用ＴＡ克隆将其克隆入ｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５－Ｈｉｓ－ＴＯＰＯ载体中,成功构建ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ真核表达载体,并通过脂质体转　染至Ｖｅｒｏ细胞中,进行了瞬时表达。间接免疫荧光成功检测到ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ在Ｖｅｒｏ细胞中的表达。ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ真核表达载体有较高的转染效率,目　的基因能在宿主细胞中表达,有利于研究ＨＴＮＶ－Ｓ基因在Ｔ细胞表位研究中的意义。     

μ阿片受体基因敲出（Knockout）小鼠模型的建立和阿片受体镇痛及成瘾机理的

１９９２年克隆出阿片δ受体后,已从不同种属的动物克隆出阿片受体的三个亚型μ,δ,和κ受体。最近法国Ｋｉｅｆｆｅｒ实验室的Ｍａｔｔｈｅｓ等利用小鼠胚胎干细胞基因敲出技术繁育成功了一个μ阿片受体缺陷的种系小鼠,这种小鼠除无μ阿片受体外,生长,发育,生殖和活动周期等正常小鼠无异,且小鼠的δ和κ受体的数量和分布,内源性阿片肽的表达和对热刺激的敏感性都与正常小鼠无异。给予该小鼠吗啡,无镇痛,位置偏受和身体依     

“内吗啡肽”的发现是阿片肽研究的一次突破

早在７０年代,人们即发现了内源性的δ阿片受体选择性配体（脑啡肽）和ｋ阿片受体选择性配体（强啡肽）,但一直未能找到内源性的μ阿片受体的选择性配体。１９９７年４月英国出版的“自然”杂志报道,发现了两种内源性的α阿片受体选择性配体,分别命名为ｅｎｄｏｍｏｒｐｈｉｎ－１（ＥＭ－１）和ｅｎｄｏｍｏｒｐｈｉｎ－２（ＥＭ－２）可译为“内吗啡肽”。本文拟就内吗啡肽的发现过程及其与其它内阿片肽的关系作一简要介绍。     

μ阿片受体基因敲出(Knockout)小鼠模型的建立和阿片受体镇痛及成瘾机理的阐明

1992年克隆出阿片δ受体后,已从不同种属的动物克隆出了阿片受体的三个亚型μ、δ和k受体。最近法国Kieffer实验室的Matthes等利用小鼠胚胎干细胞基因敲出技术繁育成功了一个μ阿片受体缺陷的种系小鼠。这种小鼠除无出阿片受体外,生长、发育、生殖和活动周期等与正常小鼠无异,且小鼠的δ和k受体的数量和分布、内源性阿片肽的表达和对热刺激的敏感性都与正常小鼠无异。给予该小鼠吗啡,无镇痛、位置偏爱和身体依赖性作用,给予纳洛酮也不出现撤药综合征。给予δ受体的选择性激动剂也无镇痛作用。说明吗啡的镇痛、位置偏爱和身体依赖性作用由μ受体介导,而与δ和k受体无关。     

δ阿片肽受体分子药理学

目前已成功地克隆出δ、μ、κ阿片受体 ,均属Ｇ蛋白偶联受体 ,有 6 5 %同源序列 ,仅 35 %序列决定其特异性。阿片受体最大的同源区是跨膜区 (ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ,ＴＭ)和细胞内环 ,变化最大的区域在细胞外环及其氨基、羧基末端。近年来应用反义核酸技术、基因剔除、构建嵌合受体、基因定位突变、截短或缺失氨基酸突变等方法对阿片受体的结构和功能的研究取得了新进展。1 .内源性与克隆δ阿片受体δ阿片受体广泛分布于脑内 ,但在不同的脑区其分布密度不同。体内药理学实验证明 ,δ阿片受体有两种亚型δ1和δ2 [1] ,但是其亚型没被…     

弓状核中阿片受体在细胞介素所致发热效应中的作用

本研究旨在了解弓状核内的阿片受体在体温调节中的作用。研究使用细胞介素ＩＬ１β做致热源。以自动推进器向ＳＤ雄性大鼠弓状核微量注射１μ１ＩＬ１β。在给药前３０ｍｉｎ分别向弓状核微量注射通常阿片受体拮抗剂纳洛酮（Ｎａｌ）、阿片受体μ、δ和κ各自特异性拮抗剂ＣＴＡＰ、ＮＴＩ和ｎｏｒＢＮＩ做预处理,用生理盐水（Ｓａｌ）做对照。结果表明：ＩＬ１β所致的升体温效应能被Ｎａｌ和ＣＴＡＰ阻断,提示弓状核中的阿片受体（主要是μ受体）参与或介导了ＩＬ１β的致热效应;δ和κ受体特异性拮抗剂阻断ＩＬ１β所致的体温升高效应不明显。提示δ和κ阿片受体参与体温调节的可能性较小。对照ＡＲＨ和ＰＯＡＨ中阿片受体在ＩＬ１β所致发热中的作用可发现：二者作用极为相似,这一结果有力地支持了弓状核是体温调节中枢重要组成部分的观点。     

孤啡肽（Orphanin－FQ）─—新发现的内阿片肽及其受体

孤啡肽（Ｏｒｐｈａｎｉｎ－ＦＱ）是最近发现的一个１７肽,其结构与已知的内阿片肽,尤其是强啡肽Ａ类似;但具有明显不同的药理学特性：与经典的阿片受体（μ、δ和）结合能力很弱,而与阿片受体家族中的一个新成员——“孤儿受体”（ｏｒｐｈａｎｒｅｃｅｐｔｏｒ）结合能力很强,因而认为是该受体的天然配基．孤啡肽脑室注射可使小鼠痛觉过敏,运动减少．孤啡肽受体是阿片受体家族中的新成员,属于Ｇ蛋白偶联受体,与经典的阿片受体配基亲和力均很弱．该受体激活后介导对腺苷酸环化酶活力的抑制．     

醋酸铜诱导家兔排卵前LH峰过程中下丘脑β—阿片受体密度的变化

下丘脑β－内啡肽活动减弱是排卵前ＧｎＲＨ／ＬＨ峰形成的重要因素,为了解下丘脑μ－阿片受体是否参与了这一过程,本文利用放射受体自显影结合计算机图像处理,观察醋酸铜诱导家兔排卵前ＬＨ峰过程中下丘脑μ－受体密度变化。给新西兰雌兔注射１％醋酸铜０．９ｍｌ或生理盐水（对照组）,于注射后不同时间处死,观察下丘脑内侧基底核及视前内侧区的μ－受体密度变化,结果表明：醋酸铜组给药后１ｈＭＰＯ部位μ－受体密度明显增加     

大鼠侧脑室及鞘内注射孤啡肽对痛反应及电针镇痛的影响

孤啡肽（ＯＦＱ）是最近发现的一种１７肽,为阿片受体家族中一个新成员－“孤儿受体”的内源性配基。ＯＦＱ在痛觉调制中的作用与内阿片肽明显不同。本实验在大鼠电刺激甩尾测痛模型上,观察了侧脑室（ＩＣＶ）及鞘内注射（ＩＴ）ＯＦＱ对伤害性电刺激引起的痛反应及电针镇痛的影响。结果发现,大量ＩＣＶ及ＩＴ０．１μｇ（０．０５５ｎｍｏｌ）ＯＦＱ对痛觉反应无影响,而１．０μｇ（０．５５ｎｍｏｌ）的ＯＦＱ可明显降低痛阈;     

α-乙酰乳酸脱羧酶的基因克隆及在大肠杆菌和酿酒酵母中的表达

以ｐＵＣ１９质粒为载体,以Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９为受体,构建了含α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ＡＬＤＣ）基因的地衣芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＳ１０１０６的基因文库,得到４８００个重组转化子中均含有４～１０ｋｂ的外源插入ＤＮＡ片段,从基因文库中筛选到６个阳性克隆,对其中１个克隆的α－乙酰乳酸脱羧酶基因片段进行亚克隆分析表明,该α－乙酰乳酸脱羧酶基因位于１．６ｋｂ的ＢａｍＨⅠ     

发现了冷敏感受体

冷和热刺激是通过相同还是不同的通路上传到中枢的呢 ?Ｃａｔｅｒｉｎａ等人分别在 1997年和 1999年成功克隆的辣椒素受体 (Ｖａｎｉｌｌｏｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒ 1,ＶＲ1)及辣椒素受体样蛋白 1(Ｖａｎｉｌｌｏｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ 1,ＶＲＬ1)。高于 4 3℃的热刺激和辣椒素均可以激活ＶＲ1,该受体特异地表达于中、小型感觉神经元上。当外界温度超过 5 2℃时 ,还激活ＶＲＬ1。ＶＲ1和ＶＲＬ1同为非选择性阳离子通道瞬时电位受体 (Ｔｒａｎｓｉｅｎｔｒｅｃｅｐ ｔｏｒｐｏｔｅｎｔｉａｌ,ＴＲＰ)家族成员。机体是如何…     

鼠伤寒沙站氏菌嘌呤生物合成调控研究

在鼠伤寒沙门氏菌中,由嘌呤从头合成途径合成ＩＭＰ经１０步酶促反应,涉及１０个结构基因,其中ＰｕｒＪ ｐｕｒＨ和ｐｕｒＤ构成１个操纵子,除ｐｕｒＢ外均肥反式调节基因ｐｕｒＲ的负调控。本文以ｐｕｒＪＨＤＯ＾＋和Ｏ＾ｃ突变体为材料,通过体内克隆法分别克隆到Ｏ＾＋ｐｕｒＪＨＫ（Ｐ２－９）和Ｏ＾ｃｐｕｒＪＨＤ（Ｐ＾ｃ－１２）操纵子;遗传互补和限制性内切酶分析作出了Ｐ２－９和Ｐ＾ｃ－１２的物理谱。经２次亚克克     

第一个阿片受体克隆成功

谢国玺博士最近从人胎盘中克隆出一个具有阿片结合活性的受体,这是第一个克隆成功的阿片受体。阿片受体的存在最早是于70年代初基于药理学实验提出的,以后许多实验室又对阿片受体的生化特性做了大量的研究,并纯化出一些不同分子量的阿片受体,进一步证实了阿片受体的存在。尽管这些实验室一直在致力于阿片受体的