膜去极化和cAMP在胰岛细胞株HIT中活化CBPC端片段

在胰岛细胞株 Ｈ Ｉ Ｔ 细胞中,用瞬时转染法观察高 Ｋ＋ 导致的膜去极化与ｃ Ａ Ｍ Ｐ对 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ端片段转录活性的影响．发现二者均可诱导 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ端片段的转录活性增强,并有协同效应; Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ端片段的突变体（ Ｓｅｒ １ ７７２ 突变为 Ａｌａ）表现相同的诱导特性,但其基本转录活性降低．说明膜去极化和 ｃ Ａ Ｍ Ｐ对 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ 端片段转录活性的诱导作用与 Ｐ Ｋ Ａ 磷酸化位点 Ｓｅｒ １ ７７２ 无关,而该位点的磷酸化对调节 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ 端片段的基本转录活性起重要作用．蛋白激酶 Ｃ 通路对 Ｃ Ｂ Ｐ Ｔｉ的转录活性无影响．     

辅调节因子在核受体基因表达调控中的作用

核受体 ( nuclear receptor)在增强或抑制基因转录时 ,需借助于诸多辅调节因子的协同作用 ,使调节更为精细、有效及特异 .辅调节因子 ( coregulator)可区分为辅激活因子 ( coactivator)和辅抑制因子 ( corepressor)两大类 ,均具有多种功能各异的蛋白质因子 ,分别汇聚于核受体上构成不同复合体 .它们的主要作用机理是 :( 1 )促使核小体中的组蛋白乙酰基化 ,导致与 DNA的结合松散 ;或脱乙酰基 ,而使组蛋白与 DNA的结合回复紧密状态 ,从而创造一个有利于转录或封闭转录的局部环境 ;( 2 )作用于通用转录因子及 RNA聚合酶 ,以激活转录或抑制转录 .     

Forskolin对成骨样细胞蛋白激酶C及三磷酸肌醇的影响

Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（ＦＳＫ）是一种植物二萜类化合物,为腺苷酸环化酶的特异激活剂,实验发现：ＦＳＫ和作为参照的诱导分化剂维甲酸（ＲＡ）单独或联合应用均可升高胞浆蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性,并降低膜ＰＫＣ活性,ＦＳＫ可使表皮生长因子（ＥＧＦ）诱导的细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ３－１,４,５）水平降低至对照组的４４．４％至６７％;ＦＳＫ与ＲＡ合用可显著降低成骨样细胞特征蛋白碱性磷酸酶（ＡＫＰ）的活性。以上结果表明,ＦＳＫ对成骨样细胞内磷脂酰肌醇信息传递体系有深刻影响,可能与其调节细胞的增殖分化有关。     

中药固真方对促甲状腺素受体基因表达的调节作用

促甲状腺素（ＴＳＨ）通过甲状腺细胞膜上的ＴＳＨ受体（ＴＳＨＲ）,产生第二信使ｃＡＭＰ,从而激活ｃＡＭＰ反应性起动子,而使相应的基因获得表达．实验结果表明,在构建有ＴＳＨＲ和糖蛋白激素ｃＡＭＰ反应性起动子以及萤光素基因（Ｌｕｃ）的转染细胞中,经补肾益精中药固真方提取液（１×１０~（－４）稀释）处理３～５ｄ后,可下调ＴＳＨＲ基因的表达,并使ＴＳＨＲ数目减少．提示固真方可调整甲状腺细胞的功能,或许有利于调整甲状腺机能亢进．     

人绒毛膜促性腺激素β亚基酶解片段特性的研究

以嗜热菌蛋白酶水解人绒毛膜促性腺激素,亚基(hCG_β),用HPLC分离制备酶解产物。酶解片段经竞爭性放射分析,不能与LH/hCG受体结合,但保留近乎全部hCG_β的免疫反应性.园二色谱分析,与hCG_β比较,酶解片段所含α螺旋减少,β折叠与无规卷曲含量增多。表明hCG_β可能有几个肽段和/或糖链参与hCG受体相互作用;酶解片段中仍含有hCG_β的主要决定簇,该决定簇与hCG_β结合受体的结构有区别。     

猴免疫缺陷病毒引起多形核嗜中性白细胞凋亡的可能机理（英文）

本实验目的是研究猴免疫缺陷病毒(SIV)引起多形核嗜中性白细胞(PMNs)凋亡的机理.实验用PCR技术扩增gag基因,用Western blot法测定p53和bcl-2基因的表达.结果显示PMNs在被SIV感染后随着保温时间的延长存活率下降,在感染后24h可以从PMNs中扩增出gag基因.PMNs中p53基因的的表达在感染后24h增加.同时bcl-2基因的表达在对照组和SIV感染组都增加,但在SIV感染组bcl-2蛋白的表达明显低于对照组.结果揭示SⅣ能够感染PMNs,p53和bcl-2基因表达的改变可能是SⅣ感染PMNs引起细胞凋亡的机理.     

甲胎蛋白对HeLa细胞N-ras、p53和p21~(ras)表达的促进作用

大量研究已证明甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞的增殖具有调节作用 .为探讨AFP对细胞生长促进作用的分子机理 ,采用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,用Northern印迹分析法分析不同作用时间时细胞N rasmRNA的表达以及用Western印迹分析法分析p5 3、p2 1ras的表达 .结果发现 ,在AFP(2 0mg L)作用后 ,HeLa细胞的N rasmRNA、p5 3蛋白质和p2 1ras蛋白质的表达量与对照组比较在 12h和 2 4h时都有明显增加 .AFP的作用均可被抗AFP单克隆抗体所拮抗 .实验结果提示 ,AFP对细胞生长的调节作用可能通过促进这些原癌基因的表达来实现 .     

Forskolin对成骨样细胞蛋白激酶C及三磷酸肌醇的影响

Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（ＦＳＫ）是一种植物二萜类化合物,为腺苷酸环化酶的特异激活剂。实验发现：ＦＳＫ和作为参照的诱导分化剂维甲酸（ＲＡ）单独或联合应用均可升高胞浆蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性,并降低膜ＰＫＣ活性。ＦＳＫ可使表皮生长因子（ＥＧＦ）诱导的细胞内三磷酸（ＩＰ３－１,４,５）水平降低至对照组的４４．４％至６７％;ＦＳＫ与ＲＡ合用可显著降低成骨样细胞特征蛋白碱性磷酸酶（ＡＫＰ）的活性,以上结果表明,     

甲硫氨酸脑啡肽对猴免疫缺陷病毒早期感染引起CEM x1 74细胞凋亡的可能作用(英文)

探讨短期甲硫氨酸脑啡肽作用对SIV感染CEMx174细胞凋亡的可能作用 .用MTS法测定甲硫氨酸脑啡肽对感染CEMx174细胞存活率的影响 ,流式细胞仪分析SIV诱导细胞凋亡及其甲硫氨酸脑啡肽的作用 ,并测定了cAMP含量、PKA活性和组蛋白磷酸化的水平 .SIV能够显著减少CEMx174细胞数 ,甲硫氨酸脑啡肽可以提高感染细胞的存活率 .AnnexinⅤ结合实验显示 ,1μmol L甲硫氨酸脑啡肽可以增加存活细胞的比率 ,减少凋亡细胞数 .甲硫氨酸脑啡肽降低正常细胞和感染细胞cAMP的含量和PKA活性 ,但是在感染组较为明显 .在感染的情况下 ,磷酸化的组蛋白增加 ,甲硫氨酸脑啡肽可以减少其含量 .甲硫氨酸脑啡肽的作用可以被纳酪酮所拮抗 .研究结果提示 ,甲硫氨酸脑啡肽对SIV感染引起早期细胞凋亡的作用涉及cAMP PKA信号传递过程     

甲状旁腺素增强成骨样细胞ROS 17/2.8中酪氨酸蛋白磷酸化的研究

为了研究甲状旁腺素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅ,ＰＴＨ）促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖分化的信号传递的机理,观察了ＰＴＨ对细胞内酪氨酸蛋白激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓ,ＴＰＫ）活性及酪氨酸蛋白磷酸化水平的影响,并检测了ＰＴＨ对ｃ－ｒａｓｍＲＮＡ表达的诱导作用．结果表明,ＰＴＨ可增强细胞内ＴＰＫ活性,提高细胞内酪氨酸蛋白磷酸化水平,以及促进ｃ－ｒａｓｍＲＮＡ的持续表达．这些结果提示,ＰＴＨ促增殖的细胞内信息传递通路与酪氨酸蛋白激酶－ｒａｓ－ＭＡＰＫｉｎａｓｅ通路密切相关,而ＰＫＡ／ＰＫＣ通路的最终效应可能是通过与上述通路的ｃｒｏｓｓｔａｌｋ实现的