实时无标记肿瘤细胞凋亡筛选技术体系的建立

将x CELLigence-RTCA细胞分析系统的实时无标记技术和流式细胞术结合,建立实时无标记的肿瘤细胞凋亡筛选技术体系。利用顺铂诱导非小肺癌细胞A549凋亡,使用xCELLigence-RTCA系统连续监测96 h获取A549细胞动态生长曲线图谱,分析图谱确定细胞凋亡最佳检测时间点和半有效抑制浓度(IC50),联合流式细胞术的精准定量技术,分析顺铂作用后A549细胞的凋亡率。结果确定这种实时无标记细胞凋亡筛选技术体系用于肿瘤细胞凋亡筛选的可行性和可靠性。     

沙蟾毒精诱导肺癌PC-9细胞的凋亡效应及其作用机制初探

本文主要研究沙蟾毒精(Arenobufagin,ArBu)对非小细胞肺癌PC-9细胞的凋亡作用及其作用机制。以非小细胞肺癌PC-9细胞为研究对象,采用MTT法检测ArBu对肺癌PC-9细胞的生长抑制作用,结果发现ArBu各浓度组在不同时间点均对PC-9细胞具有显著的抑制作用。荧光显微镜观察经Hoechst 33258染色的细胞形态,结果显示ArBu给药组细胞减少且出现了染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成,说明ArBu诱导了细胞凋亡。进一步,流式细胞检测仪结果显示细胞凋亡呈明显的量效关系。此外,Western blot结果显示ArBu抑制EGFR/RAF/MEK/ERK信号通路蛋白的磷酸化,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax的表达。上述实验结果表明,ArBu对非小细胞肺癌细胞系PC-9具有明显的生长抑制和促凋亡作用,可作为抗非小细胞肺癌的先导化合物进一步研究。     

鸡胚早期神经系统发育中凋亡细胞的分布研究

研究鸡胚18S（Stage）神经系统发育中凋亡细胞的分布及其生物学意义。采用HNK－1和TUNEL免疫组化双染及改变切片方向的方法观察了神经管和神经嵴的凋亡细胞,结果显示：凋亡的细胞在间隔10张横向切片上呈非均匀分布,但在矢状切面凋亡细胞有节段性分布趋势。体节处连续神经嵴没有发现凋亡细胞,而体节与体节之间神经嵴迁离神经管呈游离状并有凋亡细胞,神经管腹侧面体节处间充质细胞呈现细胞凋亡节段性分布。结果表明：鸡胚早期神经系统发育中选择性发生细胞凋亡作用。     

线粒体CytC的释放机制及其在细胞凋亡中的作用

描述了细胞色素C(CytC)从线粒体释放的机制及其在细胞凋亡中的作用,主要阐述了细胞凋亡信号转导途径中的线粒体-CytC途径及AIF途径;CytC在细胞凋亡中的作用及介导细胞凋亡的方式。探讨了线粒体CytC的泄漏机制,对非特异性释放模式(MPTP假说和线粒体膨胀假说)、特异性释放模式(专一性通道假说)进行了阐述,最后分析了研究CytC与细胞凋亡分子机制的意义并提出细胞凋亡分子机制中一些未完全研究清楚的问题。     

旋转恒定磁场对TNFa和CHX诱导的Hela细胞凋亡的影响

目的:研究旋转恒定磁场与凋亡诱导剂肿瘤坏死因子和放线菌酮的协同作用。方法:设置暴磁组和非暴磁组,用T检验的方法比较暴磁组和非暴磁组细胞凋亡的差别。结果:在其它条件相同的情况下,暴磁处理促进了由肿瘤坏死因子和放线菌酮诱导的Hela细胞的凋亡,但是单独暴磁处理或者暴磁处理与肿瘤坏事因子和放线菌酮其中之一共同处理并没有对细胞的凋亡产生显著的影响。结论:旋转恒定磁场能够与肿瘤坏死因子和放线菌酮产生协同作用。     

Bcl-2家族蛋白调控线粒体膜通透性和细胞色素C释放的新机制

Bcl-2家族蛋白在调控线粒体功能和细胞色素C释放中起重要作用。最近发现Bcl-2分子通过与其他促凋亡分子相互作用调控线粒体外膜通透性,其具体分子机制尚不完全清楚。本课题组采用化学生物学方法,在研究Bax/Bak非依赖的细胞凋亡途径中,发现了一些小分子化合物能够诱导Bim表达量急剧升高,Bim能转位到线粒体上,与Bcl-2相互作用增强,并直接促进Bcl-2构象变化。有意义的是,Bim可以诱导Bcl-2功能发生转换并能够形成大的复合体通道来介导细胞色素C释放。研究结果提示Bcl-2分子可变成促凋亡分子,参与Bax/Bak非依赖的细胞色素C释放和细胞凋亡。     

Prohibitin对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究Prohibitin对非小细胞肺癌株A549和NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响.方法:将针对Prohibitin的特异性的干扰片段瞬时转染非小细胞肺癌A549和NCI-H460细胞株,以瞬时转染与Prohibitin没有同源性的干扰片段的细胞作为阴性对照,通过免疫蛋白印迹检测各组细胞Prohibitin和Survivin蛋白的表达情况,通过MTT法检测各组细胞的增殖情况,通过流式仪检测各组细胞的凋亡率.结果:针对Prohibitin基因设计的siRNA片段特异性地沉默该基因的表达,与对照组相比较,干扰组的细胞的增殖活性明显增强.同时与凋亡密切相关的Survivin的表达在沉默掉prohibitin后,在A549和NCI-H460中分别降低了46.3%和54.5%.而干扰prohibitin后导致A549细胞的凋亡率上升了约2%.结论:Prohibitin能显著抑制非小细胞肺癌A549和NCI-H460细胞的增殖,而对凋亡的影响可能并不是通过survivin介导的.     

鼻病毒非结构蛋白2B 诱导细胞发生内质网应激

为探讨鼻病毒非结构蛋白2B诱导内质网应激和细胞凋亡的机制,本研究构建了鼻病毒非结构蛋白2B的真核表达载体p2B‐GFP ,通过转染BHK‐21细胞检测相关标志蛋白的变化情况。结果显示,非结构蛋白2B定位表达于BHK‐21细胞内质网,诱导内质网应激标志蛋白Grp78、CHOP的表达增加,并使活化转录因子6（ATF6）的转录活性增加,还诱导BHK‐21细胞发生核浓缩而凋亡,使凋亡标志蛋白PARP发生降解而减少。结果提示,鼻病毒非结构蛋白2B可诱导细胞发生内质网应激,并经该途径诱导细胞凋亡。     

冷休克诱导肿瘤细胞凋亡的动力学特征

应用扫描电镜观察、末端DNA转移酶介导的脱氧UTP缺口末端标记技术（TUNEL）和流式细胞术研究低温冷休克诱导人乳癌细胞系（ZR－75－30）细胞凋亡,并对其细胞凋亡的动力学特征测定、分析。结果显示：－5℃、0℃、4℃冷休克均可诱导ZR－75－30细胞凋亡,但细胞凋亡进程受实验细胞预培养时间;冷休克温度、时间;细胞冷休克后恢复培养时间的影响,这些影响因素具有明显的动力学特征。经过对冷休克诱导ZR－75－30细胞凋亡的动力学特征分析、比较,优选出研究冷休克诱导肿瘤细胞凋亡的实验体系：即细胞经37℃细胞凋亡的动力学特征分析、比较, 优选出冷休克诱导肿瘤细胞凋亡的实验体系：即细胞经37℃预培养36h→冷休克（-5℃24h,0℃36h,4℃48h）→细胞冷休克后于37℃恢复培养18－24h→细胞凋亡检测→检测结果综合分析。应用该实验体系要使细胞凋亡率达50－60％,且重复性尚佳。优化体系的深入研究冷休克诱导细胞凋亡的信号传递及其分子机制提供实验模型。     

非药物性处理抑制缺血再灌注肝脏细胞凋亡的研究进展

肝脏是人体最大的代谢器官,肝脏任何损伤都可能导致全身稳定状态的改变。肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)是临床常见的导致脂肪肝、非酒精性肝硬化和肝癌等疾病患者进行肝移植后肝功能受损的重要原因。细胞凋亡(apoptosis)是细胞自主、有序的死亡,过程复杂,参与因素多。凋亡可以清除肝内受损的细胞,维持肝功能。故在HIRI中如何维持细胞凋亡的稳定状态成为保肝的关键。研究显示,多种非药物性处理可平衡HIRI中细胞凋亡,减少肝损伤。该文就近几年非药物性处理抑制缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)肝脏细胞凋亡作用的研究进展(如对凋亡诱导因素、凋亡信号转导通路、凋亡通路下游分子等)作一综述。