小鼠正常肺细胞和肺癌细胞之间的力学特性比较研究

该实验通过鬼笔环肽染色技术观察并比较了小鼠正常肺细胞和肺癌细胞的微丝差异,利用荧光抗体染色技术测定了小鼠单个正常肺细胞和肺癌细胞的α-SMA蛋白含量变化,以及利用CTFM法测定了小鼠正常肺细胞和肺癌细胞的牵引力变化。结果发现,小鼠肺细胞癌变后,细胞内微丝骨架发生了变化,影响了细胞的形态;α-SMA蛋白含量明显下降并且变得分散：细胞投影面积显著减少,大约减少27％,细胞牵引力也显著减小,均方根值大约减少49％。这说明细胞骨架、细胞的形态、α-SMA蛋白和细胞牵引力均与细胞的癌变过程密切相关。     

TGF-β1信号在成纤维细胞促血管生成中作用的研究

该研究旨在探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号在成纤维细胞促血管生成中的作用。实验通过ELISA检测了Hepa1-6细胞上清液中TGF-β1的含量。将胎鼠成纤维细胞分三组,分别用普通培养液(DMEM/F12组)、含Hepa1-6细胞上清液的条件培养液(Hepa1-6组)以及加入1μmol/L TGF-β1受体抑制剂(GW788388)的条件培养液(GWHepa1-6组)培养。采用免疫荧光双染法、q PCR检测培养的成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的蛋白质及m RNA表达水平。采用基质胶(Matrigel)血管形成实验检测成纤维细胞上清液作用下EA.hy 926细胞的血管形成能力。ELISA结果显示,与DMEM/F12相比,Hepa1-6细胞上清液中TGF-β1表达量明显升高(P0.01)。免疫荧光双染法和q PCR结果显示,与DMEM/F12组和GWHepa1-6组比较,Hepa1-6组成纤维细胞中α-SMA和VEGFA蛋白质及m RNA相对水平明显增加(P0.01),且在第5 d时达最高,其上清液诱导EA.hy 926细胞的血管形成能力明显增强(P0.01)。该研究表明,TGF-β1信号通路可以诱导成纤维细胞α-SMA和VEGFA的表达,进而促进EA.hy 926细胞形成小管样结构。     

原代培养鼠肺成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的：观察原代培养大鼠肺成纤维细胞（FB）中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况。方法：24只雌性Wistar大鼠,随机分为正常组和模型组,气管内注入博莱霉素A2（BLM-A2）（5mg／kg）建立大鼠肺间质纤维化（PF）模型,正常组气管内注入等量生理盐水。实验周期第28d腹主动脉放血法处死,肺组织HE染色和透射电镜检查。体外原代培养FB,传3-5代后流式细胞术检测α-SMA表达的细胞阳性率。结果：HE染色28d模型组大片肺泡结构破坏,肺泡腔消失,有成纤维细胞灶形成,电镜观察肺组织超微结构发生改变,肺间质中可见胞浆内有微丝样结构的MF。流式细胞分析结果：正常组α-SMA表达的细胞阳性率为95．5％±4．68％,模型组α-SMA表达的细胞阳性率为96．2％±2．14％,与正常组相比P〉0．05。结论：原代培养的大鼠肺FB中α-SMA的阳性表达率正常组和模型组均显著增高,体外培养的大鼠肺FB传3—5代后可能有部分已经转化为肌纤维母细胞（MF）。     

肿瘤细胞中端粒酶催化亚基hTERT基因启动子结合因子的检测

为了研究端粒酶催化亚基ｈＴＥＲＴ基因在癌变细胞中组成型表达的调控机制,采用凝胶阻滞电泳（ＥＭＳＡ）实验方法检测人粒系白血病细胞ＨＬ－６０、人红系白血病细胞Ｋ５６２、人肺癌细胞Ａ５４９、人肝癌细胞ＨｅｐＧ２及正常人肺成纤维细胞２ＢＳ等体外传代的肿瘤和正常二倍体细胞核提取物中与ｈＴＥＲＴ启动子核心序列结合的核因子活性。结果在４种实验肿瘤细胞中均可检测出与ｈＴＥＲＴ基因启动子结合的核因子活性,而正常二倍     

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化过程中ACT βA的表达定位

观察四氯化碳（CCl4)诱导大鼠肝纤维化形成过程中激活素βA（activinβA,ACTβA）的表达变化。将74只雄性SD大鼠随机分成对照组（n=10)和模型组（n=64)。40?l4皮下注射模型组大鼠制备肝纤维化模型。注射CCl41、2、3、4、5、6及7周后分批处死,每次6-12只,用免疫组织化学法检测各组ACTβA、转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1)及α平滑肌激动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表达,结果显示正常肝脏表达ACTβA,CCl4注射1周后,染色范围缩小,2-3周以后,染色明显减弱,甚至染色阴性,注射4周后,染色又逐渐增强,注射5-7周后染色进一步增强,ACTβA定位于正常肝脏肝细胞胞浆,肝纤维化逐渐形成时则分布在中央静脉,汇管区,纤维间隔等纤维化区域周围的肝细胞。随着纤维化程度加重染色分布范围则进一步扩大,ACTβA与TGF-β1或α-SMA分布不同,βA主要分布在肝细胞,而TGF-β1或β-SMA以间质细胞（肝星状细胞）为主。结果表明肝纤维化时ACTβA表达分布发生改变,ACT可能参与了肝纤维化的形成。     

白血病相关的SHP2过表达对小鼠Lewis肺癌细胞增殖和侵袭及对MAPK信号通路的影响

目的研究超声造影剂介导SHP2（Src homology phosphatase 2）酪氨酸磷酸酶真核表达（pcDNA3.1SHP2）载体在小鼠Lewis肺癌（Lewis lung carcinoma,LLC）细胞中的转染,观察SHP2过表达对Lewis肺癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制初探。方法分别于接种小鼠Lewis肺癌细胞的6孔板中每孔加入200μL造影剂和5μL脂质体,以诊断超声剂量辐照60 s,细胞转染48 h后,Western-blot检测细胞转染前后SHP2及P38蛋白表达量的变化;MTT、划痕实验和Transwell系统分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 Western blotting显示转染组与未转染组比较,转染SHP2真核表达载体后,LLC中SHP2和磷酸化P38表达明显上调;LLC细胞增殖、迁移能力和侵袭能力均显著增强。结论 SHP2过表达可提高肺癌肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力;并初步证实SHP2过表达可能通过激活丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号转导系统促进肿瘤细胞的恶性进展。     

Caveolin-1真核表达载体的构建及其Hepa1-6细胞中的表达

Caveolin-1在不同肿瘤中发挥作用不同,既发挥抑癌基因样作用又发挥癌基因样作用.旨在分析caveolin-1 在小鼠肝癌细胞系中的表达情况及建立稳定表达外源caveolin-1的Hepa1-6细胞.利用RT-PCR和Western-blot方法检测caveolin-1在小鼠肝癌H22、Hea-F和Hepa1-6细胞中的表达;通过分子克隆构建小鼠caveolin-1 cDNA真核表达栽体,利用脂质体转染等方法建立稳定表达外源caveolin-1的Hepa1-6细胞株;通过RT-PCR、Western-blot、免疫细胞化学等方法鉴定其稳定表达细胞株.结果显示,caveolin-1在Hepa1-6细胞中表达呈阴性,在H22和Hca-F 中高表达;成功获得小鼠caveolin-1 cDNA真核表达载体pEGFP-N2/Cav-1,筛选并鉴定出高表达外源caveolin-1的Hepa1-6稳定细胞株C1和C4,为进一步分析caveolin-1在肝癌中所发挥的作用奠定了一定的研究基础.     

小鼠原代肝星状细胞的分离、鉴定及生物学功能分析

目的:探索C57.BL/6J小鼠肝星状细胞(HSCs)分离、纯化的可行方案,并评价该法所得HSCs的生物学特性。方法:经肝门静脉,先用不含钙镁离子的D-Hanks液充分灌注肝脏,再以适宜浓度的链霉蛋白酶和Ⅳ型胶原酶顺序灌注,随后Percoll非连续密度梯度离心分离、纯化HSCs,台盼蓝拒染法检测HSCs活性,光镜观察体外培养的HSCs的形态学变化,免疫细胞化学鉴定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结蛋白的表达,Western印迹检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:纯化后每只小鼠获得HSCs约5.5×105个,纯度及存活率均大于95%;免疫细胞化学技术证实培养的HSCs分别表达α-SMA和结蛋白;Western印迹显示原代HSCs体外培养7 d时,α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达量达到峰值。结论:建立的分离、纯化方案可获得高纯度、高活率、功能正常的小鼠原代HSCs,为进一步研究肝纤维化的发病机制提供了技术保障。     

芦丁通过激活NRF2/HO-1通路抑制Ang II诱导的血管平滑肌细胞表型转化和炎症反应

摘要 目的：探讨芦丁（Rutin）对血管紧张素II（Angiotensin II，Ang II）诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化和炎症反应的影响及机制。方法：采用Ang II处理小鼠主动脉平滑肌细胞构建表型转化和炎症反应模型。将对数生长期的小鼠主动脉血管平滑肌细胞分为以下4组：正常对照组（Control组），Rutin组（100 μM），Ang II组（1μM），Rutin+ Ang II组（100 μM，1 μM）。采用细胞增殖实验（Cell Counting Kit-8，CCK8）检测芦丁对小鼠主动脉平滑肌细胞活力的影响，采用蛋白免疫印迹实验检测α平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin，α-SMA）、平滑肌蛋白22α（Smooth muscle protein 22-alpha，SM22α）、骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）、基质金属蛋白酶2（Matrix metalloproteinase 2，MMP2）、基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase 9，MMP9）、白细胞介素6（Interleukin 6，IL6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）、核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）、血红素氧合酶-1（Heme oxygenase-1，HO-1）、核因子活化B细胞κ轻链增强子（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells，NF-κB）的蛋白表达和磷酸化水平，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测细胞上清中TNF-α和IL6细胞因子水平，采用荧光显微镜和流式细胞术检测小鼠主动脉血管平滑肌细胞活性氧水平。结果：与对照组相比，Ang II组收缩型标志物α-SMA和SM22α表达水平降低、合成型标志物OPN表达水平升高，炎症相关因子MMP2、MMP9、IL6和TNF-α表达水平升高，NRF2和HO-1表达水平降低，NRF2及NF-κB的磷酸化增加。此外，相较于Ang II组，Rutin+ Ang II组收缩型标志物α-SMA和SM22α表达水平升高、合成型标志物OPN表达水平降低，炎症相关因子MMP2、MMP9、IL6和TNF-α表达水平降低，NRF2和HO-1表达水平升高，NRF2及NF-κB的磷酸化水平降低。结论：芦丁可以抑制Ang II诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化和炎症反应，可能与其激活NRF2/HO-1通路和抑制活性氧的产生有关。     

HSC的活化、增殖与TGF-β1及其Ⅰ型受体在中晚期纤维化肝组织中的改变及护肝片对其的影响

目的 探讨护肝片对中、晚期纤维化大鼠肝组织肝星状细胞（HSC）的活化与增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）及其工型受体（TβRⅠ）表达的影响。方法 采用12．5％CCh诱导的大鼠肝纤维化模型,自造模之日起,大鼠分组灌胃给药（护肝片921mg·kg^-1）或溶媒,每日一次,直至8或13周末,分别处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片,免疫组化S-P法检测大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达,并用Meta Morph图像分析系统计数α-SMA阳性细胞数、对TGF-β1。及TβRⅠ蛋白表达量进行定量分析。结果 1．模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均明显高于正常组（P〈0．01）,护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组。2．模型复制8周和13周,模型组活化的HSC（即α-SMA阳性细胞）数量较正常组明显增多、TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达较正常组明显增强（P〈0．01）;3．护肝片显著抑制8、13周纤维化肝组织HSC的活化与增殖和TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达（P〈0．01）。结论 抑制HSC的活化与增殖和TGF-β1及TβRⅠ的表达可能是护肝片抗肝纤维化作用的靶点之一。     

肺纤维化形成中整合素相关激酶的表达与上皮-间充质细胞转化

目的观察整合素相关激酶(ILK)在博莱霉素致小鼠肺纤维化中的动态表达,探讨其在肺纤维化中与上皮-间充质细胞转化(EMT)的关系。方法将32只小鼠随机分成正常对照组,博莱霉素(BLM)致肺纤维化组。后者以博莱霉素腹腔注射致肺纤维化,正常对照组仅在相同处理条件下注射生理盐水。治疗的第28天和40天处死动物取出肺组织,用苏木精-伊红(HE)和Massontrichrome染色,分别观察实验动物肺炎症和纤维化的程度,以样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸的量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ILK mRNA表达、免疫组化检测不同实验组小鼠ILK,并同时检测间充质细胞标记物α-平滑肌肌蛋白(α-SMA)和上皮细胞标记物上皮钙粘附素(E-Cad)的表达。结果组织学结果显示小鼠肺组织胶原含量在第28d明显增加,第40d达高峰,羟脯氨酸测定动态增高。与正常对照组比较,肺纤维化组中ILK、α-SMA蛋白表达增高(P<0.01),E-Cad的蛋白表达降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示肺纤维化组ILKmRNA的表达显著增高(P<0.01)。ILK的表达不仅与羟脯氨酸的含量成正相关(r分别为0.867、0.886,P均小于0.05),也与α-SMA/E-Cad比值成正相关(r分别为0.830、0.844,P均小于0.05);α-SMA与E-Cad成负相关(r分别为-0.820、-0.833,P均小于0.05)。结论ILK在小鼠肺纤维化中表达与纤维化的程度呈正相关增高,表明其可能是肺纤维化形成的促进因子,且由于ILK与α-SMA/E-Cad比值成正相关,推测ILK在肺纤维化形成中的机制可能与促进EMT有关。     

小鼠肺静脉起源和肺静脉心肌的形成

目的探讨小鼠胚胎心脏静脉端肺静脉α-横纹肌肌节肌动蛋白（α-SCA）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达特征,研究肺静脉起源及肺静脉心肌的形成。方法妊娠小鼠经乙醚麻醉,收集9—17天胎龄胚胎。对小鼠胚胎心脏进行石蜡连续切片,用抗α-SCA、抗α-SMA单克隆抗体对连续切片进行免疫组化PAP法染色。结果小鼠胚胎发育第11天,心背系膜内α-SCA、α-SMA表达皆阴性的内皮性肺静脉出现,肺静脉开口于原始房间隔左侧。小鼠胚胎发育第12天,肺静脉周围出现α-SCA、α-SMA阳性细胞。小鼠胚胎发育第12天以后,伴随肺静脉纵向延伸,α-SMA阳性细胞出现在肺静脉周围的间充质中,肺静脉周围α-SCA、α-SMA阳性细胞逐渐增多,在第12-13天之间增加最明显,小鼠胚胎发育至14、15d两种抗体表达至高峰。胚胎发育第16,17天,开口于左房发育渐成熟的肺静脉。α-SMA表达明显下降,α-SCA的表达还维持在较高水平。结论肺静脉不在静脉窦中发育,肺静脉始基和内皮性肺静脉与原始心房或左心房直接连接;肺静脉心肌来源于周围邻近的间充质细胞。     

大鼠纤维化肝组织中SHP1表达与肝星状细胞活化及增殖的关系*

目的: 探讨大鼠肝纤维化病理过程中肝组织及在体肝星状细胞 (HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶1 (SHP1)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法: 随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法建立大鼠肝纤维化模型,Masson三色染色及HE染色检测大鼠肝脏组织的病理组织学变化,SHP1与α-平滑肌肌动蛋白 (α-SMA)免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP1表达,免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-SMA及SHP1表达,并分别对大鼠肝组织的SHP1表达及大鼠肝组织中活化HSC的SHP1表达与大鼠肝组织的α-SMA表达进行Pearson’s相关性分析。结果: 大鼠肝纤维化模型成功构建,随着造模时间延长,大鼠肝纤维化逐渐加重。与对照组大鼠肝组织的SHP1阳性表达平均光密度值 (MOD) (0.08±0.01)比较,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP1阳性表达MOD (0.11±0.01、0.14±0.01、0.16±0.01、0.19±0.01)显著增加(P＜0.05),并逐渐升高(P＜0.05)。与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达MOD (0.04±0.01)比较,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达MOD (0.06±0.01、 0.09±0.01、0.12±0.01、0.16±0.02)明显增加(P＜0.05),并逐渐升高(P＜0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。SHP1与α-SMA免疫荧光双标记检测显示,造模2周、4周、6周、8周大鼠纤维化肝组织中表达SHP1的活化HSC占总的活化HSC的百分比(26.49%±3.44%、37.14%±4.57%、44.90%±2.94%、58.09%±5.33%)逐渐升高(P＜0.05)。上述大鼠纤维化肝组织的SHP1表达及大鼠纤维化肝组织中表达SHP1的活化HSC占总的活化HSC的百分比均与大鼠纤维化肝组织的α-SMA表达呈显著正相关(r值为0.926, 0.984,P＜0.05)。结论: 在大鼠肝纤维病理过程中,肝组织及在体HSC 的SHP1表达与在体HSC的活化及增殖呈显著正相关。     

异钩藤碱调控ERK/p27^(Kip1)信号通路改善博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化CSCD

基于细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p27^(Kip1)信号通路探究异钩藤碱(isorhynchophylline,IRN)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)的作用及机制。C57BL/6J小鼠48只,随机正常组、BLM组、BLM+IRN(10、20 mg/kg)两个剂量组,每组12只。气管注射BLM(5000 U/kg)诱导PF小鼠模型,造模后连续灌胃给药21天。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原沉积情况。免疫组化检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。体外培养小鼠原代肺成纤维细胞,实验设对照组、转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)(10 ng/mL)组和TGF-β1+IRN(5、10、20μmol/L)三个剂量组。EdU掺入法和流式细胞术检测细胞增殖,Transwell观察细胞的迁移能力。RT-qPCR检测肺组织或肺成纤维细胞TGF-β1、collagen I和α-SMA mRNA的表达。Western blot检测肺组织和(或)肺成纤维细胞TGF-β1、collagen I、α-SMA、p-ERK1/2,p27^(Kip1)、CDK2和Cyclin E1的蛋白水平。动物实验结果显示,与BLM组相比,不同剂量IRN均能明显减轻肺组织结构的损伤、降低炎症细胞的浸润和胶原的沉积;此外,IRN不同程度地降低肺组织TGF-β1、collagen I和α-SMA mRNA和蛋白的表达;同时,IRN还抑制了肺组织ERK1/2的磷酸化、上调p27^(Kip1)和下调CDK2和Cyclin E1的蛋白表达。细胞实验结果显示,与TGF-β1组相比,不同剂量IRN能够明显抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖、显著降低细胞迁移能力;明显降低TGF-β1诱导的collagen I和α-SMA mRNA和蛋白的表达,同时降低ERK1/2的磷酸化水平、上调p27^(Kip1)和下调CDK2和Cyclin E1的蛋白表达。以上结果表明IRN可能通过抑制ERK1/2信号通路、上调p27^(Kip1)的表达而抑制了肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,从而减轻了BLM诱导的PF。     

EGFR 对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化中上皮- 间质转分化的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在肺内的表达对博莱霉素(BLM)诱导小鼠肺纤维化中上皮-间质转分化的影响。方法:将40只4～6周龄C57BLB/c雄性小鼠随机分为正常对照组(气管滴入PBS),纤维化组(气管滴入BLM 3 mg/kg),EGFRRNAi组(气管滴入BLM 3 mg/kg+气管滴入siRNA 20μl)和RNAi阴性对照组(气管滴入BLM 3 mg/kg+气管滴入siRNA阴性对照20μl)。实验第10天处死小鼠,收获肺组织,检测羟脯氨酸含量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测EGFR和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达;肺组织切片行HE染色观察肺组织病理改变,免疫组化染色检测EGFR和α-SMA表达。结果:纤维化组EGFR和α-SMA两者的mRNA和蛋白表达均较正常对照组显著增加;RNAi组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积及肺羟脯氨酸含量减少(P<0.05),肺组织EGFR和α-SMA两者的mRNA和蛋白表达均较纤维化组显著下降(P<0.05)。结论:在博来霉素诱导的肺纤维化中EGFR RNAi抑制EGFR活化,下调α-SMA的表达,减轻了博莱霉素诱导的肺纤维化病理改变。其抑制肺纤维化病理过程可能与其抑制上皮-间质转分化(EMT)有关。     

IL-2-TNFα融合基因与B7.1基因联合修饰的肿瘤的疫苗作用

目的　改进基因修饰的肿瘤细胞疫苗的效力。方法　在小鼠乳腺癌细胞系EMF6 和一个已被含有IL - 2和TNFα融合基因的逆转录病毒载体XdF转染的EMF6 亚系 (T2 -EMF6)中表达B7 1基因。结果　免疫 /侵袭实验表明 ,与单基因转导的肿瘤细胞相比 ,IL - 2-TNFα/B7 1共同修饰的肿瘤细胞具有较低的致瘤性和较优的疫苗效力 (P <0 0 5)。在各种肿瘤细胞的免疫接种后三周 ,进行混合淋巴细胞培养实验和51 Cr释放实验来检测动物的细胞免疫活性 ,IL - 2 -TNFα和B7 1共同作用诱导了比其中的任意一个单独作用更强的抗肿瘤应答 (比IL - 2 -TNFα高 2 5% ,比B7 1高 2 0 % )。结论　IL - 2 -TNFα和B7 1协同作用可提高他们所修饰的肿瘤细胞的疫苗效力。     

白介素-1β对高糖刺激的人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨炎症细胞因子白介素-1β（interleukin-1βIL-1β）对高糖刺激的人肾小管上皮细胞转分化的影响。-方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株（HKCs）,随机分为正常对照组（5.5 mmol/L normal glucose）;高糖组（30 mmol/L high glucose）;高糖＋IL-1β（5ng/ml）组。分别于处理后24h、48h、72h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和Western蛋白印迹法检测细胞角蛋白-18（cytokeratin-18 CK-18）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actinα-SMA）水平。结果高糖能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18的表达逐渐减少;IL-1β与高糖同时刺激可使肾小管上皮细胞α-SMA蛋白表达进一步增多,而其自身标志物CK-18的表达则明显下降。结论炎症因子IL-1β能增强高糖对肾小管上皮细胞转分化的作用。     

整合素α6亚单位和肿瘤的发生、发展与转移

整合素为跨膜糖蛋白,属于细胞表面的粘附分子。胞外域介导细胞与细胞及细胞与细胞外基质间的识别与结合,胞质域与细胞骨架和信号转导系统相连。α6亚单位与β1或β4亚单位非共价结合形成异二聚体,是细胞外基质蛋白质——层粘连蛋白的单特异性受体,与肿瘤的发生、发展和转移有着非常密切的关系。多种肿瘤的发生伴有整合素α6表达水平的变化,包括表达水平的升高、降低或极性分布的变化。表现为一些不表达α6β1的细胞,如肝细胞癌变后通过新合成的α6β1介导了肿瘤细胞与基底膜间相互作用而促进了肿瘤细胞的转移;表达α6β1的细胞α6β1失去沿基底膜的极性分布,导致细胞与基底膜的结合减弱,癌细胞易于脱落而发生转移;还可以通过促进细胞基质金属蛋白酶的分泌而促进肿瘤的转移,并导致肿瘤细胞的低分化表型。整合素α6可以促进肿瘤新生脉管的生成,一方面增加瘤组织的血供和营养,促进肿瘤的生长;另一方面促进脱落的肿瘤细胞进入血循环发生转移。     

四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型中SDF-1/αCXCR4的表达及其意义

目的检测四氯化碳（CCl4）诱导的肝纤维化小鼠模型肝脏SDF-1/αCXCR4的表达,评价SDF-1/αCXCR4轴与肝纤维化的关系,为研究肝纤维化肝损伤发生及损伤修复机制研究提供基础。方法选用6周龄雌性纯系C57小鼠,采用40%的CCl4/橄榄油溶液腹腔注射,剂量为1 mL/kg,每周2次,共4周,制成肝纤维化模型,取肝纤维化及正常对照组小鼠肝脏标本,采用RT-PCR及免疫组化检测SDF-1α的表达,采用RT-PCR及Western检测CXCR4受体的表达。结果与对照组相比,SDF-1α及CXCR4在肝纤维化模型小鼠肝脏组织中的表达较对照组明显上调,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论肝纤维小鼠肝组织的SDF-1/αCXCR4受体表达上调,为研究肝纤维化肝损伤机制及干细胞移植治疗提供理论基础。     

肌成纤维细胞促进小鼠胚胎肝干细胞的增殖和分化

移植细胞的增殖和分化需要微环境支持。作为最重要的微环境成分,肌成纤维细胞在肿瘤的生长过程中发挥着重要作用。该实验Hepa1-6肿瘤细胞上清液在体外激活成纤维细胞分化为肌成纤维细胞,探讨肌成纤维细胞上清对小鼠胚胎肝干细胞（embryonic hepatic stem cells,EHSCs）HP14.5增殖和分化的影响。实验将EHSCs HP14.5分为三组：DMEM培养液处理组（DMEM组）、成纤维细胞上清液处理组（CMFb组）及肌成纤维细胞上清液处理组（CMAFb组）。MTT法绘制三组HP14.5细胞生长曲线图,免疫荧光法及Real-time PCR法检分别测白蛋白（albumin,ALB）、甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）、细胞角蛋白18（cytokeratin 18,CK18）的蛋白及mRNA表达情况,PAS染色法检测糖原合成状况。MTT法检测显示,CMAFb组胚胎肝干细胞增殖明显速度较其他两组快。免疫荧光染色及Real-time PCR结果显示,HP14.5培养5 d后,CMAFb组ALB和CK18的蛋白及mRNA表达水平以及糖原合成水平显著高于CMFb组及DMEM组,而AFP蛋白和mRNA表达水平明显降低。该实验表明,Hepa1-6激活的成纤维细胞能促进胚胎干肝细胞的增殖以及分化为有功能的成熟肝细胞。