HMGB1/SREBP-1参与IFN-γ介导的小鼠肾小球系膜细胞内的脂质沉积

目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)诱导小鼠系膜细胞内脂质沉积的可能机制。方法:常规培养的小鼠系膜细胞(MMC)分为正常对照组、刺激组、刺激+空质粒组(sh-HMGB1)和刺激+质粒组(sh-SREBP-1);油红O染色观察细胞内脂质沉积;RT-PCR检测HMGB1、SREBP-1和脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达;Wesern blot检测蛋白表达。结果:油红O检测显示IFN-γ刺激组MMC细胞中出现明显脂滴;IFN-γ刺激能够上调HMGB、SREBP-1和FASmRNA及蛋白表达;沉默HMGB1能够降低IFN-γ诱导的SREBP-1和FAS上调,并减少细胞内脂质沉积;沉默SREBP-1能够减少HMGB诱导的MMC细胞内脂质沉积。结论:IFN-γ可能通过上调HMGB/SREBP-1/FAS的表达促进小鼠系膜细胞内脂滴沉积。     

葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织MMP-3、TIMP-1表达的影响

目的 探讨葛根素对糖尿病大鼠肾小球结构、功能及肾组织基质金属蛋白酶3(MMP-3)、组织抑制剂1(TIMP-1)表达的影响。方法 腹腔注射链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型,每日ip葛根素注射液,共16周。采用原位杂交法检测肾小球TIMP-1 mRNA表达,流式细胞术和免疫组化检测肾皮质MMP-3、TIMP-1及Ⅳ型胶原、层粘连蛋白表达。结果 糖尿病组较对照组肾小球TIMP-l mRNA及蛋白表达增加,MMP-3、TIMP-1及Ⅳ型胶原、层粘连蛋白表达亦增加;葛根素用药组较糖尿病组TIMP-1 mRNA、蛋白及MMP-3、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白表达减少。结论 葛根素对糖尿病大鼠肾功能、形态的影响具有保护作用,除降低血糖外,调节肾小球MMP-3、TIMP-1表达式从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。     

HMGB1在狼疮性肾炎肾小球细胞外基质沉积中的作用及其可能机制

狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)的病理改变多种多样,硬化性肾小球肾炎是多数LN患者的终末阶段,因此,该研究探讨了肾小球硬化的原因及机制。该研究通过免疫组化技术检测发现,与癌旁远端正常组织相比,LN肾组织晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)与IV型胶原蛋白(collagen IV,Col IV)的表达水平均明显上调且二者呈明显正相关;ELISA技术检测结果发现,甘草酸及Box A均可抑制由狼疮性肾炎患者置换血浆所诱导的人系膜细胞培养上清中FN蛋白表达的上调;Western blot及IP检测显示,高迁移率组蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)可与HMC表面的RAGE结合并上调其表达水平。综上所述,研究者推测,HMGB1可能先与系膜细胞表面的RAGE结合,继而诱导系膜细胞细胞外基质沉积,从而参与LN肾损伤的发生。     

基于Illumina MiSeq测序平台分析长期不同施肥处理对黑土真菌群落的影响

【目的】不合理施肥所引发的土壤环境问题逐渐成为制约我国农业可持续发展的重要因素之一,土壤真菌作为一类重要的土壤微生物,研究长期施肥对土壤真菌多样性及群落分布格局,探讨其理化因子对真菌群落结构的影响具有一定意义。【方法】本研究以东北黑土玉米田长期定位施肥试验(1984–2017)为基础,通过常规分析和Illumina Mi Seq高通量测序技术,分析长期施肥对黑土玉米田土壤养分含量和真菌群落结构变化的影响。【结果】长期施用氮肥明显降低土壤p H,却增加了玉米产量,秸秆与化肥配施可以增加土壤有机质和全氮的含量。稀释曲线结果表明长期施肥降低了土壤真菌序列的丰度和均匀度,并且在秸秆与化肥配施中序列数最低;在优势菌群中,共检测出5个已知真菌门,分别是子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、接合菌门(Zygomycota)、球囊菌门(Glomeromycota)和壶菌门(Chytridiomycota),子囊菌门占总序列平均值的57.0%,并且在氮磷钾配施高量秸秆有机肥(NPK+S0.5)的土壤中,子囊菌门丰度高达70.35%。在土壤真菌属水平的物种丰度分析中,共检测出109个已知真菌属,Humicola、Fusarium、Verticillium、Mortierella这4个菌属为优势菌属;Chaetomium、Trichocladium、Podospora、Preussia 4个菌属在秸秆与化肥配施处理中丰度较高,并同属一个分支聚类。从多样性指数分析得出,秸秆与化肥配施可以增加物种丰度和群落多样性;从热图分析可知,施用氮肥和不施用氮肥处理间真菌群落组成存在明显差异。RDA分析中,土壤理化性质影响着土壤真菌群落结构,尤其是土壤的p H、全量氮磷钾(T-N、T-P、T-K)、有效磷钾(A-P、A-K)和铵态氮(NH4+-N)浓度是重要环境因素。【结论】因此,施用氮肥虽然增加了产量,但也造成土壤酸化,真菌数量增加,其丰富度和多样性明显降低。而秸秆与化肥配施可以维持土壤健康生态环境和真菌群落多样性。     

葛根素对糖尿病大鼠肾组织MMP-2的表达及活性的影响

为探讨葛根素对糖尿病大鼠肾组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)及活性表达的影响,采用单侧肾切除大鼠ip链脲佐菌素诱发糖尿病模型的方法,每日ip葛根素注射液,共16周。采用原位杂交法检测肾小球MMP-2、TIMP-2mRNA表达,流式细胞术和免疫组织化学检测肾皮质MMP-2、TIMP-2及Ⅳ型胶原表达;酶谱分析检测肾皮质MMP-2活性变化。结果发现糖尿病组较对照组肾小球MMP-2mRNA及蛋白表达降低而TIMP-2mRNA及蛋白表达升高,Ⅳ型胶原表达亦增加,MMP-2活性降低,肾功能恶化;葛根素用药组较糖尿病组MMP-2mRNA及蛋白表达升高而TIMP-1、Ⅳ型胶原表达减少,MMP-2活性部分恢复,肾功能改善。表明葛根素可能部分是通过调节肾小球MMP-2蛋白表达及活性的改变从而减轻肾小球细胞外基质沉积,保护糖尿病大鼠的肾功能和形态。     

泛素特异性蛋白酶46的分子克隆及基因突变对其功能的影响

该文探讨了行为绝望相关基因—泛素特异性蛋白酶46(usp46)基因的生物学功能及编码区错义突变对其功能的影响。从人类食管癌细胞株TE-1中提取总RNA,RT-PCR扩增获得人类usp46基因,q RT-PCR检测小鼠各组织中该基因的m RNA相对表达水平;运用去泛素化酶活性检测体系,将USP46与模型底物表达质粒共转化,研究USP46的活性;采用定点突变法构建错义突变V89I,用上述方法检测突变对酶活性的影响。结果发现,人类usp46基因具有1 101 bp的开放阅读框,编码366个氨基酸;序列比对显示,其在各个物种中高度保守;在小鼠脾脏中m RNA表达量较高,而骨骼肌中表达较少;人类的USP46蛋白具有去泛素化酶活性,V89I突变后,其活性显著下降,仅为野生型的37.67%±2.52%(P0.05)。结果表明,usp46基因在小鼠各组织中的m RNA表达水平存在差异;人类USP46蛋白具有去泛素化酶活性,而且其编码区V89I错义突变后,其活性显著下降,为抑郁症等神经精神性疾病的病因学研究提供了新的线索。